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申明霞: 作品数：10 被引量：36H指数：4; 供职机构：华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目海南省自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>

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海南黄牛外周血白细胞cDNA文库的构建被引量：4: 2007年; 运用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技术构建海南黄牛外周血白细胞cDNA文库。采用RNAiso Reagent处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入Ecoli.DH5α,建成原始文库。经鉴定,库容量达到1.2×106克隆,原始文库滴度为3×109cfu/mL,扩增后的文库滴度为4.3×1010cfu/mL。PCR鉴定重组子,发现重组率接近100%,插入片段大小分布为0.5～2kb,插入片段平均长度约为1kb。文库的各项指标均达要求,为利用文库筛选海南黄牛已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。; 杜丽刘涛申明霞王凤阳成鹰张莉娜祁超李治深吴科榜张艳许兆艳林杰材满初日嘎; 关键词：CDNA文库 SMART技术外周血白细胞

D1蛋白酶的克隆表达、纯化、生物活性测定及多克隆抗体的制备被引量：1: 2010年; 为了开发以D1蛋白酶作为靶标的新型除草剂,需要对先导化合物的生物活性进行检测和筛选。从菠菜中提取总RNA,逆转录合成cDNA,采用PCR扩增了CtpA的基因,连接至表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,通过降低IPTG和诱导温度获得了可溶性表达的重组蛋白酶。采用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤柱层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE和Western blotting结果证实目的蛋白为含有His-tag的融合蛋白。以合成的D1前体蛋白羧基端24肽作为模拟底物,采用高效液相色谱法测定了其水解活性,结果表明活性可达1.10nmol/(mg·min),为文献报道数据的15倍。纯化后的CtpA蛋白免疫日本的长耳大白兔制备多克隆抗体,ELISA法测定其血清抗体的效价高达1:100000。该结果为抑制剂先导化合物的筛选和酶蛋白与化合物的作用机理研究提供了必要的基础。; 李慧张巍申明霞李伟国刘艳丽刘素芳祁超; 关键词：纯化生物活性多克隆抗体

海口和三亚地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况调查被引量：7: 2007年; 目的调查海口和三亚地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况,为制定相应的戊肝防制策略提供资料。方法应用ELISA方法,对海口和三亚的18个养猪场的190只成年猪进行了HEV血清学调查。结果在海口和三亚地区18个猪场的190只猪中,抗-HEV抗体阳性猪176只,总阳性率92.6%。在18个猪场中,有13个猪场的HEV阳性率在90%以上,其中,11个猪场的阳性率为100%。最低的阳性率为60%。结论在海口和三亚两地区商品猪中,HEV的感染是非常普遍的,且感染率较高,应予关注。; 王凤阳李布勇王轶廖起志杜丽李笑春申明霞成鹰刘涛; 关键词：戊型肝炎病毒血清酶联免疫吸附试验

海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建被引量：18: 2008年; 目的:构建海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库。方法:采用RNAiso Reagent(TAKARA)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。利用SMART(Switching Mechanismat5’end of RNA Transcript)技术,用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coliDH5α,建成原始文库。然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfu/mL。插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。; 申明霞刘涛杜丽王凤阳成鹰许世英吴科榜李治深符运南林贤梅满初日嘎祁超; 关键词：海南坡鹿外周血白细胞 CDNA文库 SMART技术

五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库的构建与鉴定被引量：5: 2009年; 目的运用SMART技术,构建了五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库。方法用RNAiso reagent(TaKaRa)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。用Powerscript TM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMASPIN-400TM柱分离后,500 bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coli.DH5α,建成原始文库。然后,扩增文库并随机挑取单菌落,PCR鉴定重组子插入片段大小。结果经鉴定,库容量达到1.5×106克隆,原始文库滴度为9.7×109cfu/mL,扩增后的文库滴度为6.4×1010cfu/mL。重组率接近100%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均长度约为1.1 kb。结论构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库符合建库要求,可以用于全长cDNA的筛选。为五指山小型猪新基因的获得及结构和功能研究提供了可靠材料。; 申明霞刘涛杜丽王凤阳成鹰李治深满初日嘎林杰材祁超; 关键词：五指山小型猪外周血白细胞 CDNA文库

五指山小型猪APEX1基因cDNA的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2009年; [目的]对五指山小型猪脱嘌呤嘧啶核酸内切酶cDNA进行克隆和生物信息学分析。[方法]以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法,克隆得到APEX1基因全长cDNA,并运用生物信息学软件对该基因核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质及二级结构等进行分析和预测。[结果]生物信息学分析表明,该cDNA全长1392bp,5′非翻译区长132bp,3′非翻译区长303bp,含有一个957bp的完整开放阅读框,编码318个氨基酸。该蛋白的分子量为35kD,等电点为8.05。比对分析表明,五指山小型猪APEX1基因的核酸序列及其氨基酸序列与人、小鼠、黑猩猩等哺乳动物具有较高的相似性。[结论]成功克隆了五指山小型猪A-PEX1基因cDNA,为进一步研究APEX1在动物体内的作用机制奠定了基础。; 李治深杜丽刘涛申明霞王凤阳成鹰陈品林林杰材满初日嘎祁超; 关键词：五指山小型猪 CDNA文库克隆

海南黄牛HSF1 cDNA全长的克隆与序列分析被引量：1: 2008年; 目的:根据人、小鼠HSF1cDNA保守区序列设计引物,通过PCR方法扩增海南黄牛HSF1cDNA,并进行序列分析。方法:利用RT-PCR、半巢式PCR以及3'-RACE技术分段扩增得到了海南黄牛HSF1cDNA序列,测序正确后进行拼接。用DNAMAN 生物信息学软件分析海南黄牛HSF1 cDNA与赫里福德牛、人、小鼠同源性和海南黄牛HSF1蛋白的氨基酸组成、等电点、亲/疏水区等蛋白质性质,并根据各种动物HSF1蛋白绘制进化树。结果:(1)海南黄牛的HSF1 cDNA序列全长为1 993bp,包括150bp的5'非翻译区,1 578bp的开放阅读框以及264bp(不含poly(A)尾)的3'非翻译区,编码524个氨基酸,分子量为56.42 kD,等电点(pI)为 4.79。(2)海南黄牛的HSF1 cDNA与赫里福德牛、小鼠和人HSF1 cDNA的同源性分别为98.99 %、81.78 %、87.82 %,相应编码蛋白氨基酸序列的同源性分别为98.86 %、83.84 %、89.06 %,其中N-末端和C-末端高度保守,而中间区域存在缺失或替换。(3)根据氨基酸序列构建不同动物HSF1蛋白的进化树,与采用经典遗传分类法构建的进化树基本一致。结论:首次克隆了海南黄牛 HSF1 cDNA全长,分析表明:海南黄牛HSF1蛋白是亲水性蛋白,在8种动物中,其同源性大于73 %,高度保守。海南黄牛与赫里福德牛HSF1蛋白同源性高达98.86 %,在三聚体化区域、转录调节域和激活域存在6个位点的单氨基酸突变,这些发现为进一步揭示海南黄牛抗热性状形成的分子机制提供了重要依据。; 成鹰李治深杜丽王凤阳刘涛申明霞张莉娜张巍吴科榜林杰材满初日嘎米华存祁超; 关键词：CDNA 克隆

海南特色动物cDNA文库构建及文库筛选: 运用SMART（Switching Mechanism at5'end of RNA Transcript）技术，构建了海南坡鹿、海南黄牛、五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库。用RNAiso Reagent（TAKAR...; 申明霞; 关键词：CDNA文库蛋白酶体基因克隆生物信息学; 文献传递

海口和三亚11个猪场戊型肝炎病毒急性感染情况的调查被引量：1: 2007年; 目的调查海口和三亚地区商品猪中戊型肝炎病毒急性感染情况,为制定相应的戊肝防制策略提供重要资料。方法应用ELISA方法,对海口和三亚的11个养猪场的69头成年猪进行了HEV急性感染情况的血清学调查。结果在海口和三亚地区11个猪场的69头猪中,抗-HEVIgM抗体阳性的情况只存在于4个猪场中,并且阳性率相差也较大,最高的达50%,最低的5.6%,总共9只,总阳性率13%。结论在海口和三亚两地区成年猪中,存在HEV的急性感染。; 杜丽李布勇廖起智王凤阳张莉娜王轶申明霞成鹰刘涛; 关键词：戊型肝炎病毒急性感染酶联免疫吸附试验

五指山小型猪PMSA6基因cDNA克隆及生物信息学分析被引量：3: 2009年; 为了对海南五指山小型猪蛋白酶体亚基α型6(proteasome subunit alpha type 6,PMSA6)cDNA基因进行克隆和生物信息学分析,笔者以构建的五指山小型猪外周血白细胞cDNA文库为材料,采用菌落PCR方法,克隆得到PMSA6全长cDNA,并向GenBank递交了该序列(登录号:FJ358606).同时运用生物信息学软件对该基因核苷酸序列进行了分析,并预测了其编码蛋白的理化性质及二级结构等.生物信息学分析表明:该cDNA全长1029 bp,5′非翻译区长96 bp,3′非翻译区长192 bp,含有一个741 bp完整的开放阅读框,编码246个氨基酸.该蛋白的分子量为37.680 kD,等电点为8.76.进一步比对分析发现,五指山小型猪PMSA6基因的核酸序列及其氨基酸序列与人、牛等哺乳动物具有很高的相似性.本研究成功克隆了海南五指山小型猪PM-SA6基因cDNA,并进行了相关生物信息学分析,为进一步研究PMSA6在动物体内的作用机理奠定了基础.; 刘涛申明霞杜丽程立生王凤阳成鹰李治深; 关键词：五指山小型猪 CDNA文库克隆生物信息学分析

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