王立良
- 作品数：13 被引量：56H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Raft培养可诱导人正常上皮细胞分化
- 2001年
- 人的正常上皮细胞在一般的体外培养情况下很难分化成类似于机体的上皮样结构。为了得到上皮样结构进行相关研究 ,近年来 ,国外建立了Raft(船式 )培养方法。本文在长期从事细胞培养的工作中 ,摸索出了适合国内一般实验室条件的Raft细胞培养操作方案 ,模拟体内人皮肤结构的分化层次 ,以纤维细胞与胶原作为混合基质 (作为上皮细胞的滋养物 ) ,同时加入一些生长因子、激素和必需的蛋白等成分。将纤维细胞、胶原和添加成分做为基层过夜培养 ,次日将培养好的上皮细胞种到上面 ,过夜培养后即为“skinequivalent”(皮肤等价物 ) ,将“皮肤等价物”移到一种网状金属架上以使细胞在气—液状态下培养 ,在这种条件下 ,培养中的上皮细胞与体内上皮细胞自然生长的状态、环境非常类似 ,在体外导致上皮细胞分化成清晰可见的层次。此项技术在临床治疗烧伤以及其它皮肤损伤的疾病方面有潜在的应用价值 ,也为研究皮肤的正常生理功能以及癌症的发生、发展以及治疗提供了一种模型。
- 陈连凤王立良宋国兴王淼司静懿
- 关键词：分化皮肤
- 乳头瘤病毒E2蛋白的分子生物学研究进展被引量：2
- 1999年
- 乳头瘤病毒E2蛋白是一种多功能蛋白,在乳头瘤病毒的生活史中处于核心的枢纽地 位。E2蛋白可在DNA复制水平、RNA转录水平上对基因表达进行调控。E2蛋白可启动、增强或抑制乳头瘤病毒早期启动子的表达。研究E2蛋白的功能有助于揭开乳头瘤病毒的生活史及其致病的分子机理。
- 王立良肖长义
- 关键词：乳头瘤病毒E2蛋白分子生物学
- 人乳头瘤病毒16型结构基因L1在昆虫细胞中的表达及其生物学活性被引量：8
- 2001年
- 目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK B/ 16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的HPV16晚期基因L1,装入杆状病毒转移载体 ;在DH10Bac内通过转座子Tn7的介导 ,使携带有杆状病毒多角体蛋白基因启动子Ppolh的HPV16L1基因整合入杆状病毒 ,形成重组杆状病毒 ;转染昆虫细胞Sf9进行表达 ;将感染 72h的Sf9细胞包埋、切片、染色后 ,电镜观察。提取L1蛋白 ,免疫BALB/c小鼠。结果 重组杆状病毒在Sf9细胞内高效表达出L1蛋白 ,经Westernblot发现能与L1抗体特异地结合 ;薄层扫描显示所表达的L1蛋白占Sf9细胞总蛋白的比例高达 31%。经透射电镜观察表明 ,在细胞核里有大量的重组杆状病毒形成 ;并且产生了大量的由HPV16L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒 (virus likeparticles,VLP)。小鼠免疫实验结果表明 ,所表达的HPV16L1蛋白具有强免疫原性。结论 此研究为今后L1基因分子流行病学调查、L1蛋白的结构生物学研究。
- 王立良宋国兴陈莲凤肖长义
- 关键词：人乳头瘤病毒16型重组杆状病毒病毒样颗粒
- 冷冻复苏法高效转化大肠杆菌被引量：7
- 2002年
- 对传统的CaCl2方法进行的质粒转化做出改进,用冷冻复苏法使得CaCl2转化方法更加高效,整个过程仅需2min左右。同时分析了质粒快速转化的必需条件。
- 王立良王淼陈连凤宋国兴
- 关键词：大肠杆菌
- 喷昔洛韦对宫颈癌细胞系抑制作用的研究被引量：3
- 2001年
- 目的：喷昔洛韦９位取代鸟嘌呤化合物，在体内外对单纯疱疾病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）、Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ），带状疱疹病毒（ＶＩＶ）有良好的抑制作用。我们从基础研究入手，在细胞水平上探讨喷昔洛韦对ＨＰＶ（人乳头瘤病毒）相关细胞系的作用，为扩大此药的治疗适应症提供新的思路。方法：采用不同来源的宫颈癌细胞系ＣａＳｋｉ（ＨＰＶ１６型阳性的人宫颈鳞状上皮细胞系）、Ｈｅｌａ（ＨＰＶ１８型阳性的人宫颈腺上皮细胞系）、 Ｎ（由 ＨＰＶ１６ Ｅ６／ｅ７基因和 ＨＳＶ的 Ｎ片断共转染得到的恶性转化宫颈鳞状上皮细胞系）和２ＢＳ（人正常纤维细胞）及原代培养的正常人鳞状上皮细胞，加入不同浓度的喷昔洛韦，测定不同细胞在喷昔洛韦药物作用下的半数致死浓度（ＥＤ５０），喷昔洛韦对上述细胞的ＥＤ５０分别是２．５ × １０－３ｍｏＬ·Ｌ－１， ７·５ × １０－３ｍｇ·Ｌ－１， ２５ × １０－３ｍｇ·Ｌ－１５．０ × １０－３ｍｇ·Ｌ－１， １５．０ × １０－３ｍｇ·Ｌ－１。选择合适的喷昔洛韦浓度加到各种细胞系中，在不同时间下，用倒置显微镜观察细胞的形态结构改变及测定了各种细胞的生长速度（生长曲线），用透射电子显微镜观察了细胞的超微结构变化。结果：选择 ７．５ ×１０－?
- 陈连凤王淼王立良司静懿刘跃华王家璧
- 关键词：宫颈癌细胞系药物治疗HPV
- 重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒诱导中和抗体被引量：6
- 2003年
- 为研究重组病毒样颗粒 (virus -likeparticle ,VLP)免疫血清的抗感染作用 ,用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV - 6 )L1VLP和HPV - 6L1+L2VLP免疫BALB/c小鼠 ,获得抗血清 ,ELISA法测定抗体滴度 ,在细胞水平和裸鼠异源组织移植模型中评价了免疫血清的中和病毒抗感染作用。VLP诱导了高滴度 ( >1∶10 0 0 0 )的血清抗体 ,抗血清可以特异地阻断人胚上皮细胞对VLP的摄入 ,并且能抑制从尖锐湿疣活检标本提取的HPV对人上皮组织的感染。重组HPV - 6VLP免疫小鼠诱导的血清抗体具有中和病毒、抑制感染的作用。提示重组VLP可以用于研制HVP预防性疫苗。
- 王淼陈连凤许雪梅王立良陈建国刘士德司静懿宋国兴
- 关键词：人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒中和抗体
- 杆状病毒载体的研究进展被引量：19
- 1998年
- 重组杆状病毒目前代表了一种发展比较成熟的方法技术学。其中载体的发展,尤其是用于表达水平的调控方面已达到了一个相当的高度;但关于表达的其它方面.如多种蛋白产物在同一细胞中的产生.改进的蛋白产物的纯化方法以及充分的蛋白质翻译后加工方式,为新载体和宿主细胞的完善发展留下了广阔的空间和前景。
- 王立良
- 关键词：杆状病毒翻译后加工基因重组
- 人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的相关研究进展被引量：1
- 1997年
- 人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多，发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰ），并可用作预防性疫苗；基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文着重从近几年国际上ＨＰＶ１６预防性疫苗的基础性工作进展及预防性疫苗研究现状等方面及趋势作一综述。
- 王立良宋国兴司静懿刘世德
- 关键词：乳头瘤病毒疫苗预防性疫苗
- 鲍温氏病组织人乳头瘤病毒16型结构基因L1的克隆及其序列分析被引量：5
- 2000年
- 本研究采用 ＰＣＲ法从中国妇女鲍温氏病（Ｂｏｗｅｎ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）组织标本扩增获得了与宫颈癌密切相关的人乳头 瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）的晚期基因Ｌ１，并装入测序载体测序分析了其ＤＮＡ的序列，与标准型进行了比较，发现有 若干变异。此研究对序列及变异意义进行了分析和讨论，为今后Ｌ１基因分子流行病学调查、Ｌ１蛋白的结构与功能研 究、疫苗研制以及ＨＰＶ相关的基础性研究提供了有用的资料。同时在国内外首次报道了鲍温氏病组织中ＨＰＶ１６Ｌ１的 序列及其变异情况，并在ＧｅｎＢａｎｋ［１］申请到序列号（ＡＦ０８９５２）。
- 王立良宋国兴陈莲凤司静懿刘世德
- 关键词：乳头瘤病毒16型克隆皮肤癌
- HPV16预防性疫苗的相关研究动态被引量：1
- 1997年
- 人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多，发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰ），并可用作预防性疫苗；基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文就近几年的研究进展及趋势作一综述。
- 王立良
- 关键词：人乳头瘤病毒疫苗预防性
