宋国兴
- 作品数：30 被引量：148H指数：7
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒诱导中和抗体被引量：6
- 2003年
- 为研究重组病毒样颗粒 (virus -likeparticle ,VLP)免疫血清的抗感染作用 ,用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV - 6 )L1VLP和HPV - 6L1+L2VLP免疫BALB/c小鼠 ,获得抗血清 ,ELISA法测定抗体滴度 ,在细胞水平和裸鼠异源组织移植模型中评价了免疫血清的中和病毒抗感染作用。VLP诱导了高滴度 ( >1∶10 0 0 0 )的血清抗体 ,抗血清可以特异地阻断人胚上皮细胞对VLP的摄入 ,并且能抑制从尖锐湿疣活检标本提取的HPV对人上皮组织的感染。重组HPV - 6VLP免疫小鼠诱导的血清抗体具有中和病毒、抑制感染的作用。提示重组VLP可以用于研制HVP预防性疫苗。
- 王淼陈连凤许雪梅王立良陈建国刘士德司静懿宋国兴
- 关键词：人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒中和抗体
- 人巨细胞病毒协同人乳头瘤病毒16型诱导宫颈上皮细胞癌变的研究被引量：1
- 2004年
- 目的：探讨宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(HPV)和人巨细胞病毒(HCMV)协同感染的关系。方法：本实验应用我室建立的HPV16永生化的人宫颈上皮细胞系，感染HCMV，观察细胞的生物学特性。结果：HCMV协同HPV16促进宫颈上皮细胞的恶性转化，在裸鼠中形成肿瘤。结论：HCMV可协同HPV16恶性转化宫颈上皮细胞，并对其协同机制进行了细胞和分子生物学的探讨。
- 刘朝奇李昆司静懿刘世德宋国兴阎伦飚
- 关键词：人巨细胞病毒人乳头瘤病毒16型发病机制
- 白介素2基因佐剂协同单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗免疫诱导的特异性免疫应答被引量：15
- 2005年
- 目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定其表达。动物实验分为pcDNA3.1空载体对照组、pgD单独免疫组和pgD+pIL-2联合免疫组3组,具体为通过肌肉免疫接种BALB/c小鼠3次,间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体滴度并做亚型分析,利用3H-TdR掺入法进行Th细胞增殖实验,ELISA试剂盒检测Th细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-10水平,耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)反应;HSV-1病毒角膜攻击后,裂隙灯显微镜观察角膜上皮病变。结果与pgD单独免疫组相比,pIL-2的协同免疫可以显著提高IgG2a抗体滴度、Th细胞增殖反应和DTH反应,Th细胞分泌IL-2和IFN-γ水平也显著提高,IL-10水平明显下降。在动物保护实验中,pIL-2的协同免疫明显增强了pgD疫苗在病毒攻击时对角膜的保护效果。结论IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高pgD核酸疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,增加核酸疫苗的免疫保护效果。
- 刘晓娟朱明昭宋国兴许于飞刘宏伟王盛杨宝玲董方田许雪梅
- 关键词：白介素2单纯疱疹病毒1型
- Raft培养可诱导人正常上皮细胞分化
- 2001年
- 人的正常上皮细胞在一般的体外培养情况下很难分化成类似于机体的上皮样结构。为了得到上皮样结构进行相关研究 ,近年来 ,国外建立了Raft(船式 )培养方法。本文在长期从事细胞培养的工作中 ,摸索出了适合国内一般实验室条件的Raft细胞培养操作方案 ,模拟体内人皮肤结构的分化层次 ,以纤维细胞与胶原作为混合基质 (作为上皮细胞的滋养物 ) ,同时加入一些生长因子、激素和必需的蛋白等成分。将纤维细胞、胶原和添加成分做为基层过夜培养 ,次日将培养好的上皮细胞种到上面 ,过夜培养后即为“skinequivalent”(皮肤等价物 ) ,将“皮肤等价物”移到一种网状金属架上以使细胞在气—液状态下培养 ,在这种条件下 ,培养中的上皮细胞与体内上皮细胞自然生长的状态、环境非常类似 ,在体外导致上皮细胞分化成清晰可见的层次。此项技术在临床治疗烧伤以及其它皮肤损伤的疾病方面有潜在的应用价值 ,也为研究皮肤的正常生理功能以及癌症的发生、发展以及治疗提供了一种模型。
- 陈连凤王立良宋国兴王淼司静懿
- 关键词：分化皮肤
- 基因工程重组人乳头瘤病毒亚基因致癌的分子生物学及超微结构研究被引量：1
- 1990年
- 我们用基因分子生物学结合超微结构的方法在318例人宫颈癌标本中证明人乳头瘤病毒16型(HPV-16)与中国妇女宫颈癌的发生关系密切。它的亚基因片段,E_6-E_7早期基因可能是HPV-16的致癌基因。本文采用近年来开始发展起来的基因工程方法,将HPV-16的全部早期区基因及E_6-E_7基因分别重组至逆转录病毒(小鼠白血病病毒)的基因组中,将比重组的逆转录病毒导入培养细胞,在细胞中大量牛成并释放病毒颗粒到培养液中(此细胞称为重组病毒生成细胞)。借助重组病毒感染方式介导基因转移进行体外转化研究。采用重组逆转录病毒感染方式研究属于DNA病毒的HPV-16的致癌潜能,国内外尚未见报道。我们证明它是目前体外研究转化功能效率最高,最稳定的方法。
- 司静懿李昆张卫韩日才陈莲凤赵维敏宋国兴刘世德贾丽萍麦永嫣曾毅
- 关键词：乳头瘤致癌超微结构
- 人乳头瘤病毒16型E＿6E＿7基因反义质粒对人宫颈癌细胞恶性的逆转作用被引量：12
- 1995年
- 构建可为地塞米松诱导表达的人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ＿６Ｅ＿７基因反义质粒（ｐ１６ａｓＥ＿６Ｅ＿７Ｎｅｏ），利用磷酸钙沉淀法将其分别转染到ＨＰＶ－１６阳性的人宫颈癌细胞株Ｃａｓｋｉ和ＨＰＶ阴性的人宫颈癌细胞株Ｃ－３３Ａ中。地塞米松诱导反义质粒表达后，ＣａｓＫｉ细胞失去其恶性表型，而Ｃ－３３Ａ细胞的生长特性及恶性行为未发生变化。说明反义质粒能够改变Ｃａｓｋｉ细胞的恶性表型，且这种改变是通过特异性抑制Ｅ＿６Ｅ＿７基因表达实现的。
- 曾苹司静懿郭仁李昆宋爱华刘士德陈莲凤宋国兴
- 关键词：子宫颈肿瘤人乳头瘤病毒
- 人乳头瘤病毒16型转换基因的序列分析被引量：3
- 2000年
- 为了解中国地区宫颈癌病人中人乳头瘤病毒16 型E6E7 基因结构特点，从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取组织DNA，经HPV 多重引物PCR 法鉴定标本中感染HPV 型别，选单纯感染HPV16 型两例标本DNA为模板进行PCR 扩增，获得HPV16 E6E7 基因后，重组入pALTER-1 载体，进行双向测序、分析。DNA 序列分析表明:两例标本的HPV16 E6E7 序列全长均为776bp， 与已发表的德国标准株长度相等，两例均为变异株，共检出5 处核苷酸变异位点，其中4 处可导致氨基酸改变。中国山东地区宫颈癌病人中HPV16 E6E7 的基因结构与德国标准株的HPV16 E6E7 基因之间存在差异。
- 许雪梅宋国兴司静懿刘世德李昆
- 关键词：E6E7基因宫颈癌
- 北京地区人乳头瘤病毒16 E6E7基因变异和序列分析被引量：12
- 2003年
- 目的了解北京地区人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7结构特点,为研制HPV16疫苗奠定基础。方法从HPV感染组织中提取DNA,PCR鉴别其型别,从单独HPV16感染的标本中分离HPV16E6E7基因,克隆入载体pGEM-3ZF,进行双向测序,与德国标准株进行比较。结果构建了北京地区HPV16E6E7的重组质粒。测序结果表明该基因全长为776bp,与已发表的德国标准株长度相等,3处核苷酸发生变异,同源性99.7%。分别位于第60、96和565nt(相当于HPV16全长序列中第142、178和647nt),2处位于E6区,1处位于E7,其对应氨基酸分别为第20、32和188个氨基酸,分别由Pro(CCA)、Asp(GAT)和Asn(AAT)变异为Pro(CCG)、Glu(GAG)和Ser(AGT)。结论北京地区HPV16E6E7基因结构与德国标准株存在差异。
- 左亚刚王家璧许雪梅朱明昭刘方司静懿宋国兴
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6E7基因聚合酶链反应基因变异
- HPV16型E7C亚基因与共激活分子B7-1协同诱导E7特异性CTL研究被引量：5
- 1999年
- 目的利用去除Ｅ７的转化活性而保留其抗原性的Ｅ７Ｃ亚基因研制防治ＨＰＶ１６相关疾病的疫苗，并进一步探索利用Ｂ７－１研制更佳活化细胞免疫的加强疫苗。方法用ＰＣＲ方法扩增获得Ｅ７Ｃ后，插入真核表达质粒获得ｐＬＮＣＥ７Ｃ，体外真核细胞中证实其具有表达能力后，在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠后腿肌肉内直接进行裸ＤＮＡ接种免疫，或与ｐＬＮＣｍＢ７－１联合免疫接种，用５１Ｃｒ释放法体外分析经免疫鼠的细胞毒性Ｔ淋巴细胞活性。结果经免疫小鼠获得较好的Ｅ７特异性ＣＴＬ活性；若Ｅ７Ｃ与小鼠Ｂ７－１的表达质粒联合接种，则活性明显得到加强。结论Ｅ７Ｃ可以用于ＨＰＶ１６ＤＮＡ疫苗研制。
- 徐建青徐建青司静懿宋国兴张友会许雪梅宋国兴
- 关键词：人乳头瘤状病毒DNA疫苗
- 人乳头瘤病毒6型基因组晚期区序列分析被引量：4
- 2001年
- 目的初步分析我国尖锐湿疣患者病变组织分离的乳头瘤病毒6型(HPV-6)基因组晚期区编码序列变异情况。方法采用重叠PCR设计,分别从HPV-6阳性尖锐湿疣患者病变组织扩增出主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2基因片段,插入质粒载体克隆,经测序、拼接获得HPV-6基因组晚期区序列。结果得到的两条长2869bp的HPV-6晚期区序列(GenBank序列索取号AY015006,AY015008)均具有完整的L1和L2开放阅读框(ORF),与原型序列比较,在L1和L2ORF中共有9个核苷酸变异,其中错义突变4个(有3个发生在L2ORF,1个在L1ORF)。分子进化分析表明,克隆的晚期区序列属于HPV-6b亚型。结论HPV-6基因组晚期区编码序列非常保守(核苷酸变异率小于0.28%),并且L1ORF比L2ORF更为保守,其中位于L1ORF中7081位的A→G和7099位的G→A两处共有突变在我国HPV-6分离物中具有代表性。本研究首次从我国尖锐湿疣组织标本克隆了HPV-6基因组晚期区全长编码序列。
- 王淼张明策许雪梅陈连凤宋国兴
- 关键词：尖锐湿疣克隆
