王秋平
- 作品数：18 被引量：17H指数：3
- 供职机构：广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生机械工程更多>>
- 高效毛细管振荡流液滴PCR
- 振荡流PCR的特点是驱动反应液滴在不同温区往返运动，它结合了静态PCR和流动式PCR的优点。该技术一方面可以通过流速控制灵活调节反应时间和循环次数，另一方面其连续流动方式可以保证快速温度传导。本研究发展了一种在PTFE毛...
- 梁广铁刘大渔王秋平雷秀霞周小棉
- 关键词：PCR方法
- 一种温度可控的毛细管DNA快速提取方法的实验研究
- 目的优化一种基于毛细管的简便快速DNA磁珠法提取条件。方法以磁珠法原理在温度可控的毛细管中提取样品DNA,考察样品与裂解液的裂解时间、DNA与磁珠的结合时间、洗脱时间与洗脱温度对核酸提取的影响,采用正交试验对提取条件进一...
- 雷秀霞周小棉张琼梁广铁王秋平刘紫娟刘大渔
- 文献传递
- 基于DNA杂交CD式微流控芯片筛查苯丙酮尿症方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片技术,用于PKU基因突变快速筛查.方法 设计并加工一种具有12个微通道的CD式微流控芯片,芯片采用PDMS-玻璃双层结构,分别含有微通道和水凝胶结合探针区.探针区包括R243Q、V245V和空白对照.将PAH外显子7扩增产物加入芯片的进样孔,在离心力的作用下进入杂交微通道区.芯片在离心机中交替旋转或暂停从而进行杂交反应.杂交后将芯片置于荧光显微镜下观察结果并分析荧光信号.评价该方法检测特异性、检测限及重复性.对30例疑似PKU孕妇DNA标本进行检测,并将检测结果与测序比较.结果 利用基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片只需1.5μl样品,杂交时间为15 min,杂交检测限为0.7 ng/μl.对于PKU患者组与健康对照组,芯片检测结果与测序结果一致.挑选不同批次的5张芯片及每张芯片内5个微通道重复检测同一V245V突变PKU患者DNA标本,结果均为阳性,说明重复性较好.对30例疑似PKU孕妇标本进行检测,筛查出4例携带V245V突变,1例携带R243Q突变.结论 建立了一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片检测PKU基因突变的方法,该方法简便、快速、高灵敏,可以用于PKU产前筛查.
- 陈斌王秋平李春宇邹晓雷秀霞周小棉江剑辉刘大渔
- 关键词：苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶核酸杂交
- 3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的比较被引量：3
- 2011年
- 目的比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的灵敏度和特异度,初步探讨其用于HBV DNA检测的临床价值。方法用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎患者及30例阴性参比血清标本中的HBV DNA,以荧光定量PCR结果为标准,比较3种试剂检测灵敏度和特异度。结果 3种试剂盒的HBV DNA阳性检出率分别为93.3%(28/30)、96.7%(29/30)、100%(30/30);3种试剂检测HBV阴性的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/mL,B、C公司均为102 IU/mL。结论使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV DNA快速检测。
- 王秋平陈斌张琼雷秀霞周小棉匡艳华
- 关键词：乙型肝炎HBV
- 芯片电泳在免核酸提取PCR产物分析中的应用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨两种免核酸提取试剂联合应用DNA芯片电泳是否能快速、准确地用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的鉴定,了解该联合检测方法在流行病病原体快速鉴定中的应用价值,为流行性病原体的快速鉴定提供便捷手段。方法取1个(或0.1个)麦氏单位NDM-1(+)菌液加入免核酸提取试剂后直接进行PCR扩增,扩增产物用自制的芯片电泳进行产物分析,通过样品迁移时间与标准品比较精确计算出目的基因片段长度并大致推算产物的含量。结果两种免核酸提取试剂联合芯片电泳分析技术能快速、准确、高效地扩增出新德里金属酰胺酶NDM-1(+)细菌的目的基因片段,尤其湖南某厂家的试剂灵敏度更高。结论该联合检测方法在流行病尤其是突发性病原体的快速鉴定、监测中具有潜在的临床应用价值。
- 雷秀霞李卓然梁广铁龙幼敏陈英姿张小精王秋平
- 基于免核酸提取PCR联合微流控芯片电泳快速检测产NDM-1耐药菌方法的建立
- 目的建立一种基于免核酸提取PCR联合微流控芯片电泳快速检测产NDM-1耐药菌的方法。方法根据NDM-1的基因设计一对特异引物,对临床微生物检测的70株耐药肠道杆菌(厄它培南MIC≧2μg/ml)和55株鲍曼不动杆菌(亚胺...
- 王秋平周小棉
- 文献传递
- 银杏叶提取物对LPS诱导HeLa细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人宫颈癌细胞HeLa细胞凋亡的影响。结论将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组,各组细胞加入相应药物干预8～72h。采用MTT法检测GbE对细胞的毒性作用;计算各组细胞不同时间段细胞数,测定各组细胞的增殖情况;通过细胞形态学检测(AO/EB染色)测定细胞凋亡发生情况。结果在72h内不同浓度GbE对HeLa细胞无明显细胞毒性作用,细胞存活率在90%～100%之间,差异无统计学意义(P>0.05);LPS组经LPS诱导8h后细胞在各时间段增殖均较其他两组活跃,细胞数明显高于其他两组(tGbE+LPS=6.423,P<0.001;t对照组=3.976,P<0.005);GbE+LPS组培养48h后细胞凋亡数明显高于LPS组和对照组。结论 GbE具有抑制LPS诱导的HeLa细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。
- 雷秀霞张琼王秋平何国华杨玉娟李国豪
- 关键词：银杏叶提取物细菌脂多糖HELA细胞细胞凋亡
- 高效毛细管振荡流液滴PCR
- 振荡流PCR结合了静态PCR与连续流动式PCR的优点,包括表面抑制效应降低、热循环数灵活设定以及便于实现实时和高通量检测。此外,由于使用毛细管作为PCR反应器,可以有效降低分析成本。聚四氟乙烯毛细管具有化学性质稳定、
- 梁广铁刘大渔王秋平雷秀霞周小棉
- 文献传递
- 基于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒DNA提取被引量：2
- 2011年
- 基于毛细管液滴技术,建立了提取血液中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的方法。方法的基本原理是向聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时,由于表面张力作用,可以形成稳定的油包水型液滴。依次引入含有不同试样的液滴,在毛细管中完成进样、DNA结合、洗涤以及洗脱等过程。实验表明,采用蛋白酶K裂解和提高洗脱温度有利于提高DNA回收率。优化后的血清HBV DNA提取操作在25 min内完成,回收率大于60%。本方法的DNA提取量与常规方法相当,而相对标准偏差较大(23.3%vs 12.9%)。本方法具有简单、快速和低成本的优势,有望成为一种微全核酸分析系统样品前处理的有效解决方案。
- 梁广铁王秋平王维刘大渔周小棉
- 关键词：DNA提取液滴毛细管乙型肝炎病毒
- 乙型肝炎病毒YMDD变异检测方法的新进展被引量：3
- 2011年
- 乙型肝炎病毒（HBV）感染是导致肝硬化和肝癌的重要因素,但长期接受拉米夫定治疗的患者会产生耐药变异,一般服用拉米夫定〉6～9个月,部分患者可发生耐药变异,并随治疗时间延长而突变率逐渐增高。
- 王秋平周小棉
- 关键词：乙型肝炎病毒YMDD变异
