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王晴
作品数:
2
被引量:5
H指数:2
供职机构:
上海市儿童医院
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
生物学
医药卫生
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合作作者
曾溢滔
卫生部
颜景斌
上海市儿童医院
龚秀丽
卫生部
任晓叶
上海市儿童医院
蔡勤
卫生部
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作者
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曾溢滔
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王晴
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黄英
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医学分子生物...
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1篇
2012
1篇
2011
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不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究
被引量:2
2012年
目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子(P1A3),构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ(humancoagu—lationfactorⅧ,hFⅧ)全长cDNA载体(pcDNA3.1.P1A3-hFⅧ)和hFⅧB区缺失(humancoagulationfactorⅧB—domain.deleted,hFVⅧBD)的cDNA载体(pcDNA3.1-P1A3-hFⅧBD),研究它们在乳腺细胞中的表达情况,同时与巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)基因载体,转染小鼠乳腺上皮细胞(HC-11),应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本;对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后,采集试验母鼠乳汁,应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后,在mRNA水平均有表达;瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明,转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠,乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2.81μg/ml(CMV—hFⅧBD),2.01μg/ml(CMV—hFⅧ),1.82μg/ml(P1A3-hFⅧBD),1.20μg/ml(P1A3.hFⅧ)。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体,转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性:CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体,但由于后者具有乳腺特异表达的特点,更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验,为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。
王晴
任晓叶
蔡勤
龚秀丽
黄英
曾溢滔
关键词:
启动子
特异表达
血友病A基因治疗载体研究现状
被引量:3
2011年
血友病A是X染色体隐性遗传出血性疾病。其发病原因是患者血液中先天缺乏凝血因子FⅧ。用于血友病A基因治疗研究的载体有病毒载体和非病毒载体,目前研究较多的是病毒载体,主要有逆转录病毒载体和慢病毒载体,腺病毒载体及腺相关病毒载体等。非病毒载体主要有质粒、脂质体、转座子等。文章拟对血友病A基因治疗各载体的特点和研究进展作一综述。
王晴
颜景斌
曾溢滔
关键词:
血友病A
基因治疗
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