蔡勤
- 作品数：10 被引量：5H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 用KOSR优化山羊克隆胚的培养体系
- 2012年
- 体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山羊体细胞克隆重构胚胎的体外培养,并比较KOSR与FBS对重构胚的发育效率的影响。结果显示,KOSR组山羊重构胚培养体系的分裂率明显高于FBS组(80.67±0.63%.vs 49.02±4.85%,P<0.01),2组在重构胚重编程过程中的8细胞率具有显著差异(48.89±1.92%vs.28.59±3.13%,P<0.05);2组不同培养体系的受孕率也有明显不同(33.3%vs.10%,P<0.05)。研究结果表明,KOSR培养体系能有效提高山羊重构胚的发育效率,特别是有利于重构胚的早期重编程,为获得健康的转基因克隆山羊奠定了良好的基础。
- 陈威胡伟曹辉李凯王清泉蔡勤蔡琳琳刘宇习书斌李华陈美珏黄英黄淑帧曾凡一
- 关键词：重构胚重编程发育
- 外源基因转染山羊体细胞的整合效率研究被引量：1
- 2013年
- 为了探讨影响山羊体细胞中外源基因整合效率的因素,采集胎羊和小羊皮肤并制备成纤维细胞,采用"Lipofectamine LTX"脂质体转染试剂包埋外源基因,分别导入上述细胞中,比较同一种外源基因载体(人凝血因子Ⅸ)转染至不同个体和类型的羊细胞,以及不同载体(人凝血因子Ⅸ、人转铁蛋白和牛催乳素)转染至同一个体羊细胞的整合效率的差异.通过药物筛选得到单细胞簇,经定量PCR计算外源基因的整合效率.同一种外源目的基因载体转染小羊成纤维细胞的整合效率显著高于胎羊成纤维细胞(P<0.05);而不同目的基因载体转染同一个体羊细胞,其细胞的整合效率与转染载体的片段大小有关.由此可知,小羊成纤维细胞外源基因整合频率优于胎羊细胞,且载体片段的大小影响外源基因转染的整合频率.
- 蔡琳琳蔡勤许淼黄英
- 关键词：基因转染体细胞核移植技术
- 一例巨轴索神经病患者中发现巨轴突蛋白基因两种新型致病突变
- 目的：寻找1例疑似巨轴索神经病患者的致病突变位点,为疾病诊断提供科学资料.方法：应用目标序列捕获测序技术对患者进行遗传筛查,找到巨轴突蛋白基因(Gigaxonin,GAN)的可疑致病突变位点.同时,提取患者父母的外周血D...
- 王娟马晴雯蔡勤刘艳娜王伟任兆瑞
- 比较牛催乳素与生长激素对外源基因表达的影响
- 2013年
- 目的:用牛生长激素(bGH)和牛催乳素(bPRL)乳腺特异载体DNA分别转染携带人转铁蛋白(hTF)的转基因小鼠乳腺上皮细胞,比较这二种载体对外源基因(人转铁蛋白)的表达影响,为研制特异、高效表达外源蛋白转基因动物过程中载体的合理构建,提供有价值的理论和技术基础。方法:将构建β-酪蛋白启动子(P1A3)调控的bGH和bPRL乳腺特异表达载体分别转染体外培养的转基因小鼠乳腺上皮细胞;并将转染pcDNA3.1质粒和未转染细胞作为对照,收集不同代数的细胞及上清液,用RT-PCR及Elisa法分析mRNA及蛋白,分析比较二者对hTF表达水平的影响。结果:RT-PCR显示人转铁蛋白转录电泳条带明显;Elisa表明二者均能提高hTF蛋白水平的表达。结论:首次应用牛生长激素和催乳素对外源基因表达影响作用进行比较研究;β-酪蛋白启动子(P1A3)调控的bGH和bPRL均能促进在乳腺上皮细胞水平上外源蛋白表达。因此,在研制转基因动物———乳腺生物反应器中,采用bGH和bPRL促进乳汁中外源蛋白特异、高效表达的载体都将是可选择的新技术途径。
- 闫亚彬蔡勤蔡琳琳龚秀丽朱怡文管翌华黄英
- 关键词：牛生长激素乳腺生物反应器
- 一例巨轴索神经病患者中发现GAN基因两种新型致病突变
- 2016年
- 目的寻找1例疑似巨轴索神经病患者的致病突变位点，为疾病诊断提供科学资料。方法应用目标序列捕获测序技术对患者进行遗传筛查，找到巨轴突蛋白基因（Gigaxonin，GAIN）的可疑致病突变位点，并提取患者父母的外周血DNA，进行Sanger测序验证。同时对200名正常人的400个GAN基因进行Sanger测序。此外，应用生物信息学软件Polyphen对突变巨轴突蛋白进行了功能预测。结果在患者GAN基因中鉴定出2种新型突变：c．778G〉T（p．Glu260Ter）和c．277G〉A（p．Gly93Arg），为复合杂合突变；Sanger测序证实c．778G〉T（p．Glu260Ter）突变源于父方，c．277G〉A（P．Gly93Arg）突变则与母亲相同。在200名正常人GAN基因中未检测到同样的突变，排除其为多态性。生物信息学分析预测这两种新型GAN突变均可引发巨轴突蛋白功能异常。结论研究鉴定出了患者GAN的两种新型突变，它们均可能引起巨轴突蛋白结构和功能的异常，从而导致疾病的发生，为日后类似疾病的诊断提供了依据。
- 王娟马晴雯蔡勤刘艳娜王伟任兆瑞
- 一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法
- 2012年
- 目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型，同时通过直接测序法进行验证，评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测，共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只，HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染以及准确度高等优点，值得推广。
- 许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌Nanbert Zhong曾凡一黄淑帧
- 奶牛体外受精胚胎的性别控制研究被引量：1
- 2010年
- 为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因(SRY)核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。
- 李晓晨李华蔡勤曹辉黄英
- 关键词：体外受精胚胎移植性别控制
- 造血干细胞基因治疗β-珠蛋白异常疾病的研究与展望被引量：1
- 2019年
- β-珠蛋白异常疾病(B-globin disorders)是由于体内合成β-珠蛋白肽链缺陷,导致溶血性贫血等—系列的症状,严重影响了患者的生活质量。而造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)移植是根治此类疾病的唯一方法。现以β-珠蛋白异常疾病为主,阐述近年来依托造血干细胞为主的基因治疗手段的研究进展,并将基因治疗中所使用病毒载体、基因组编辑技术的优缺点和影响临床应用的要素以及未来的研究趋势综述如下。
- 刘亚楠杨冠恒蔡勤蔡勤
- 关键词：Β-地中海贫血基因治疗造血干细胞
- —例巨轴索神经病患者中发现巨轴突蛋白基因两种新型致病突变
- 目的:寻找1例疑似巨轴索神经病患者的致病突变位点,为疾病诊断提供科学资料。方法:应用目标序列捕获测序技术对患者进行遗传筛查,找到巨轴突蛋白基因(Gigaxonin,GAN)的可疑致病突变位点。同时,提取患者父母的外周血D...
- 王娟马晴雯蔡勤刘艳娜王伟任兆瑞
- 文献传递
- 不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究被引量：2
- 2012年
- 目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子（P1A3），构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ（humancoagu—lationfactorⅧ，hFⅧ）全长cDNA载体（pcDNA3．1．P1A3-hFⅧ）和hFⅧB区缺失（humancoagulationfactorⅧB—domain．deleted，hFVⅧBD）的cDNA载体（pcDNA3．1-P1A3-hFⅧBD），研究它们在乳腺细胞中的表达情况，同时与巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）基因载体，转染小鼠乳腺上皮细胞（HC-11），应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本；对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后，采集试验母鼠乳汁，应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后，在mRNA水平均有表达；瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明，转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠，乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2．81μg／ml（CMV—hFⅧBD），2．01μg/ml（CMV—hFⅧ），1．82μg／ml（P1A3-hFⅧBD），1．20μg／ml（P1A3．hFⅧ）。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体，转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性：CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体，但由于后者具有乳腺特异表达的特点，更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验，为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。
- 王晴任晓叶蔡勤龚秀丽黄英曾溢滔
- 关键词：启动子特异表达
