江冰
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国科学技术大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制被引量：8
- 2007年
- 大约30%的乳腺癌中有表皮生长因子受体家族蛋白HER2的过表达,HER2表达水平与病人的预后以及恶性程度密切相关。RNA干涉(RNAi)是最近发展起来能特异性抑制哺乳动物细胞中基因表达的新技术。在以往鉴定的对HER2有良好RNAi效应的靶序列的基础上,构建了一系列U6和H1双启动子小干涉RNA(siRNA)表达载体,并转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞定量测定了其HER2下调效应。随后,siRNA表达盒经LR重组反应被克隆入慢病毒载体中并成功包装成病毒。病毒感染SKBR3后经荧光定量PCR、蛋白印迹杂交和流式细胞仪一系列实验证明:慢病毒介导的RNAi确实能有效地下调肿瘤抗原HER2的表达,而且经慢病毒处理后细胞生长受到了抑制。为进一步阐明HER2与癌症恶化的关系以及发展新的基因治疗药物提供了新的工具。
- 程联胜查昭席甲甲江冰刘兢姚雪彪
- 关键词：RNA干涉小干涉RNA慢病毒基因治疗
- 抗ErbB2嵌合抗体chA21聚集现象的鉴定和分析被引量：3
- 2008年
- 聚集现象是目前基因重组抗体面临的挑战之一。采用高效排阻色谱(HPSEC)、动态光散射(DLS)、SDS-PAGE和间接ELISA鉴定抗ErbB2嵌合抗体chA21聚集的形式和性质,并比较温度和添加剂对抗体聚集程度、抗原结合活性的影响,用圆二色谱(CD)检测不同聚集条件下蛋白构象的变化,最后将抗体酶解分离分析聚集的部位。结果表明:chA21在溶液中可形成二聚和更高形式的聚集,聚集体是通过非共价键相互作用形成,并仍保留抗原结合活性,聚集程度和活性受温度和添加剂影响,而蛋白质的构象相对稳定,抗体可变区的相互作用可能是引起聚集的主要原因之一。对抗体聚集现象的分析有助于建立稳定的抗体保存条件,并为今后抗体进一步改造提供依据。
- 朱娟娟荣子烨江冰刘兢
- 关键词：嵌合抗体动态光散射圆二色谱
- 腺病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2的下调及生长抑制效应被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨采用腺病毒做为载体介导基于RNA干涉的针对高HER2肿瘤的基因治疗的可能性。方法:构建HER2-绿色荧光蛋白融合蛋白表达质粒pHER2-GFP,并与9种针对HER2不同靶序列的siRNA表达质粒分别共转染CHO-K1细胞,根据荧光蛋白表达量从中筛选出沉默效率最高的质粒。将筛选出的质粒转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞,检测它们对HER2表达的影响。随后,将siRNA转录单元克隆入腺病毒载体,成功包装病毒后感染SKBR3细胞,再次测定其下调HER2的效应及其对细胞生长的影响。结果:2种有效下调HER2表达的质粒被筛选出来。将此2种质粒所含siRNA转录单元包装入腺病毒后仍然保持了原有的基因沉默效应。HER2下调增加了SKBR3细胞中G1期细胞的比例,并且诱导部分细胞凋亡。MTT和细胞长期增殖抑制实验表明腺病毒介导的RNA干涉抑制了SKBR3细胞生长。结论:重组腺病毒介导的RNA干涉能够下调HER2的表达并且对高表达HER2的乳腺癌细胞有生长抑制作用。
- 程联胜查昭席甲甲江冰刘兢姚雪彪
- 关键词：RNA干涉小干涉RNA腺病毒基因治疗
