梁媛
- 作品数：21 被引量：75H指数：5
- 供职机构：广西动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广西青年科学基金广西科技创新能力与条件建设项目广西留学回国人员基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 山羊痘病毒糖蛋白基因ORF122的克隆及其原核表达被引量：1
- 2010年
- 以山羊痘弱毒疫苗毒株AV41的细胞培养物中提取的总DNA为模板,通过PCR扩增获得山羊痘病毒(GTPV)ORF122基因片段。另设计1对引物,经PCR扩增获得缺失跨膜功能区的ORF122基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-32a中,构建了重组表达质粒pET-ORF122,将其转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,成功表达出分子质量为32ku的融合蛋白。免疫印迹试验证实,表达的融合蛋白可以被GTPV阳性血清识别。经对该重组蛋白进行纯化,结果其纯度达到90%以上,产量达5.5mg/L。上述结果为GTPV重组诊断抗原的筛选和新型疫苗的研制奠定了基础。
- 李春艳郑敏黎宗强莫胜兰屈素洁梁媛李向涛秦保亮
- 关键词：山羊痘病毒克隆原核表达
- 广西种猪场CSF、PRRS、PCV2与PR监控效果研究被引量：4
- 2010年
- 采用PCR和RT-PCR对2004～2008年广西种猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病(PR)进行监控。结果表明,2004～2008年广西种猪场CSF、PRRS、PR、PCV2均有不同程度的发生,其中2004年阳性率最高,2008年阳性率最低(全部为阴性)。从2004～2008年,组织样品的PRRSV阳性率呈逐年下降趋势;CSFV和PRV的阳性率变化趋势相似,即2004年较高、2005年有所下降、2006年有所反弹、2007～2008年呈下降趋势;PCV2阳性率变化趋势则是在2005～2006年出现一个峰值。在公猪精液方面,PRRSV、PRV、PCV2阳性检出率呈逐年下降趋势。不同年份内不同疫病对种猪场的影响程度也存在差异。可见,以PCR和RT-PCR来监控种猪场疫病具有较高的可行性。
- 胡杰陈义祥陆文俊梁媛莫胜兰屈素洁郑敏施开创磨龙春黄夏刘棋
- 应用正向间接血凝(IHA)与阻断ELISA方法检测猪瘟抗体的比较试验被引量：1
- 2011年
- 目前国内在对猪群进行猪瘟免疫效果评估时,多采用CSF正向IHA方法与CSFV抗体ELISA方法,但这两种方法在检测CSF抗体存在一定差异。本试验分别运用正向间接血凝（IHA）与阻断ELISA方法检测550份猪血清中猪瘟抗体水平。
- 胡杰梁媛莫胜兰屈素洁陈义祥陆文俊郑敏李军施开创磨龙春黄夏刘棋
- 关键词：ELISA方法正向间接血凝猪瘟抗体CSFV
- 山羊痘病毒糖蛋白基因ORF112的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 为探索山羊痘病毒(GTPV)糖蛋白基因ORF112在疫苗和诊断中的应用,应用PCR技术扩增GTPV弱毒疫苗株AV 41ORF112基因,将其克隆到pET-32a载体,转化感受态细胞BL21,经IPTG诱导后获得与预期大小相符的约37ku的融合蛋白,为可溶性和包涵体表达。应用镍离子亲和树脂对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,然后用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体。免疫荧光试验表明该多克隆抗体可以与GTPV反应,为GTPV新型疫苗和诊断试剂的研究奠定了基础。
- 郑敏李春艳陆文俊莫胜兰屈素洁粟艳琼梁媛施开创李军
- 关键词：山羊痘病毒原核表达多克隆抗体
- 2株H3N8亚型禽流感病毒HA和NA基因遗传变异分析被引量：5
- 2011年
- 采用RT-PCR技术扩增了2株H3N8亚型流感毒株A/duck/Guangxi/69/2009和A/chicken/Guangxi/2117/2010的HA和NA基因,并与GenBank中收录的其他毒株序列进行比较分析和遗传进化分析。结果表明,分离株的HA与NA基因全长分别为1 733 bp、1 432 bp。A/duck/Guangxi/69/2009株的HA基因与A/duck/Siberia/100/01株的相似性最高,A/chicken/Guangxi/2117/2010株的HA基因与A/white munia/HongKong/4519/00株的相似性最高;而A/duck/Guangxi/69/2009株的NA基因与A/duck/Eastern China/91/09株的相似性最高,A/chicken/Guangxi/2117/2010株的NA基因与A/aquaticbird/Korea/KN-1/04株的相似性最高。2株H3N8禽流感病毒位于同一分支,同源关系较近。2株H3N8禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-Q-T-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列。
- 屈素洁郑敏梁媛莫胜兰陆文俊粟艳琼胡杰李军刘棋
- 关键词：禽流感病毒HA基因NA基因
- PRRSV+CSFV+PCV2+HPS混感病例的病理学研究
- 2012年
- 从PCR鉴定为"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份猪只病例中选取病变较典型脾、肺、肝以及淋巴结等组织,肉眼观察其剖检病变之后,制成病理切片,在显微镜下观察其病理变化,并将观察结果与PCR鉴定结果相对照。结果显示:"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份病例无论是在剖检还是在镜下都具有相似的病变并且与PCR鉴定基本相符;7份病例的病变与其他猪呼吸道疾病引起的病变有很大的共性。可见病理学研究,为我们诊断猪群疫病提供了诊断方向和必不可少的依据,但却不是唯一的依据,更多的时候还要通过临床诊断和实验室诊断。
- 梁媛陈芳芳温丽霞
- 关键词：病理学
- PRRSV+CSFV+PCV2+HPS混感病例的病理学研究被引量：1
- 2012年
- 从PCR鉴定为"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份猪只病例中选取病变较典型脾、肺、肝以及淋巴结等组织,肉眼观察其剖检病变之后,制成病理切片,在显微镜下观察其病理变化,并将观察结果与PCR鉴定结果相对照。结果显示:"PRRSV+CSFV+PCV-2+HPS"混合感染的7份病例无论是在剖检还是在镜下都具有相似的病变并且与PCR鉴定基本相符;7份病例的病变与其他猪呼吸道疾病引起的病变有很大的共性。可见病理学研究,为我们诊断猪群疫病提供了诊断方向和必不可少的依据,但却不是唯一的依据,更多的时候还要通过临床诊断和实验室诊断。
- 梁媛陈芳芳温丽霞
- 关键词：病理
- 广西规模猪场猪呼吸道疾病综合征的病原学调查被引量：14
- 2010年
- 为了解猪呼吸道疾病综合征(PRDC)在广西规模场猪群中的感染状况,采用PCR和RT-PCR方法,对2007～2009年期间采自广西13个市65个规模猪场的281份疑似PRDC感染组织样品进行了12种病原体检测。结果显示:73.85%(48/65)的猪场和71.87%(202/281)的组织样品为PRDC感染,其中,被猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪链球菌(SS)、猪伪狂犬病毒(PRV)、败血性波氏杆菌(Bb)、猪附红细胞体(E-su is)、猪流感病毒(SIV)、产毒素多杀性巴氏杆菌(T+PM)、副猪嗜血杆菌(HP)、猪细小病毒(PPV)和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染(包括混合感染)的阳性样品分别占49.11%(138/281)、34.52%(97/281)、9.60%(27/281)、8.19%(23/281)、6.41%(18/281)、6.41%(18/281)、6.05%(17/281)、6.14%(15/281)、4.63%(13/281)、3.91%(11/281)、0.36%(1/281)和0.00%(0/281);单纯感染占28.11%(79/281);混和感染占43.77%(123/281)。二重、三重和四重混合感染分别占28.11%(79/281)、12.46%(35/281)和3.20%(9/281)。其中,以PRRSV+PCV2(+其他)混合感染形式较多见,占所有混合感染样品的52.03%(64/123)。细菌性病原体感染样品占20.28%(57/281),其中19.22%(54/281)为混合感染。可见:广西地区规模猪场普遍存在PRDC感染,其中PRRSV和PCV2是引起PRDC的主要病原;感染类型复杂多样,以PRRSV+PCV2(+其他)混合感染最为常见。
- 刘翠权梁媛梁媛陈义祥谭福林郑敏陆承平
- 关键词：规模猪场猪呼吸道疾病病原学猪传染性胸膜肺炎放线杆菌产毒素多杀性巴氏杆菌猪附红细胞体
- 广西鸭圆环病毒全基因组的序列分析被引量：2
- 2011年
- 采用PCR方法从广西临床发病番鸭组织中分段扩增获得了鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)LZ/11/09株的全长基因组,将扩增片段分别克隆,获得重组质粒。测序结果表明,LZ/11/09株基因组全长1 994bp,含有4个开放阅读框(ORF),其中V1和C1是主要的2个ORF,分别编码Rep蛋白和Cap蛋白;在V1和C1的5′端之间存在与启动滚环复制有关的1个茎环结构和2个正向重复序列。遗传进化分析发现,DuCV可分为2个遗传分支,LZ/11/09株与YS07、FJzq290、MH25、Zhejiang、33753-52和Germany株等同处一个进化分支,而与WF0802和TC1/2002株的关系较远。
- 粟艳琼郑敏莫胜兰屈素洁梁媛陆文俊胡杰苏凯陈玉华李军刘棋
- 关键词：鸭圆环病毒全基因组
- 猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2012年
- 为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒(EMCV)的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。
- 施开创梁媛陈芳芳屈素洁莫胜兰李军
- 关键词：促炎细胞因子脑心肌炎病毒TAQMAN探针
