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杨志霞
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徐州医学院药学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室
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相关领域:
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含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽的白细胞介素-24突变体真核表达载体的构建及其体外抗肝癌作用
2009年
目的构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的白细胞介素(IL)-24突变体(RGD-IL-24)真核表达质粒,观察其对肝癌细胞的抑制作用。方法利用重叠PCR技术在IL-24cDNA中插入GGT三个碱基,获得RGD—IL-24cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1/RGD—IL-24。将pcDNA3.1/RGD—IL-24及作为对照的pcDNA3.1/IL-24转染肝癌细胞HepG2,逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测IL-24mRNA表达;Westernblot检测IL-24蛋白表达;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;FITC-AnnexinV染色检测细胞凋亡;Westernblot检测bax、bcl-2表达。结果测序证明pcDNA3.1/RGD—IL-24构建成功。RT—PCR、Westernblot证实转染pcDNA3.1/RGD—IL-24的肝癌HepG2细胞表达IL-24。pcDNA3.1/RGD—IL-24、pcDNA3.1/IL-24处理组HepG2细胞存活率分别为(0.382±0.064、0.563±0.038),凋亡细胞阳性率分别为(0.346±0.049、0.163±0.087),两组差异均有统计学意义。Westernblot证实pcDNA3.1/RGD—IL-24促进bax表达、抑制bel-2表达作用强于pcDNA3.1/IL-24。结论RGD-IL-24真核表达质粒不仅不影响IL-24表达,且能显著增强IL-24诱导肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤生长作用。
徐为
张宝福
杨志霞
邸洁慧
李海龙
孙晓磊
高超
刘俊杰
顾玉明
韩正祥
李望
郑骏年
关键词:
IL-24
突变体
RGD肽
肝癌治疗
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