刘俊杰
- 作品数：82 被引量：130H指数：6
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 荷载Ki67 siRNA的条件增殖型腺病毒抑制肾癌生长的体内外实验研究
- 目的研究荷载Ki67基因小干扰RNA的条件增殖型腺病毒(ZD-Ki67)对肾癌786-0细胞及其移植瘤的影响,为肾癌基因病毒治疗提供实验基础。方法1.ZD-Ki67、溶瘤腺病毒ZD-EGFP、表达Ki67-siRNA的增...
- 郑骏年孙方浩李望毛立军刘俊杰温儒民陈家存
- 文献传递
- 反义肽核酸抑制人肾癌细胞系Ki-67基因的研究
- 2007年
- 目的探讨Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸对人肾癌细胞Ki-67基因表达及生长的影响。方法人工合成反义肽核酸,脂质体转染肾癌细胞系786-0,采用免疫印迹法(Western blot)、3H-TdR掺入试验和原位末端标记(TUNEL)法检测肾癌细胞Ki-67抗原的表达、细胞增殖和凋亡情况。结果在反义肽核酸浓度大于1.0μmol/L情况下,western blot实验发现Ki-67抗原表达下降,3H-TdR掺入试验表明掺入率减低,TUNEL法显示细胞凋亡增加。结论Ki-67基因翻译起始区反义肽核酸能阻遏人肾癌786-0细胞系Ki-67抗原的表达,抑制肿瘤细胞增殖和生长,加快其凋亡,并且有明显的剂量依赖性。
- 蔡维奇郑骏年方先林孙晓青刘俊杰
- 关键词：KI-67基因反义肽核酸细胞增殖
- 增殖及非增殖腺病毒载体介导的RNA干扰对肾癌细胞杀伤作用被引量：6
- 2007年
- 目的比较荷载Ki67基因小于扰RNA(Ki67-siRNA)的增殖腺病毒ZD55-Ki67及非增殖腺病毒Ad-Ki67对肾癌细胞的杀伤作用。方法MOI=10的ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染肾癌786-0细胞,2d后收集细胞,蛋白印迹法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹法、免疫细胞化学法检测Ki67表达;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡。4 d后噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,7 d后结晶紫染色法检测细胞毒性作用。结果感染ZD55-Ki67的786-0细胞表达E1A,感染Ad-Ki67的细胞不表达E1A。ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染的786-0细胞Ki67 mRNA表达率分别为(37.9±2.3)%、(64.1±1.9)%;Ki67蛋白表达率分别为(42.5±2.4)%、(60.1±2.2)%;Ki67染色阳性率分别为(20.8±2.8)%、(32.3±2.5)%;786-0细胞存活率分别为(22.2±3.0)%、(60.4±3.4)%;凋亡率分别为(53.0±3.7)%、(35.3±2.5)%,两种病毒处理之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论ZD55-Ki67抑制786-0细胞Ki67表达及增殖、诱导凋亡及细胞毒性作用均显著优于Ad-Ki67。增殖腺病毒介导的RNA干扰杀伤肾癌细胞作用优于非增殖腺病毒。
- 郑骏年毛立军温儒民刘俊杰李望薛松孙晓青韩瑞发马腾骧
- 关键词：腺病毒RNA干扰肾癌
- 端粒酶催化亚基(hTERT)小干扰RNA抑制肾癌细胞增殖作用
- 目的:端粒酶的激活使癌细胞染色体端粒维持在一定长度,一方面使细胞获得永生,另一方面使细胞周期缩短、生长变快。人端粒酶由端粒酶RNA成分、端粒酶相关蛋白、端粒酶催化亚基(hTERT) 组成,其中hTERT为端粒酶激活的限速...
- 郑骏年李望毛毅军孙晓青陈家存温儒民杨文发刘俊杰
- 文献传递
- 后腹腔镜输尿管离断成形术治疗腔静脉后输尿管
- 目的:探讨经腹膜后途径行腹腔镜输尿管离断成型术治疗腔静脉后输尿管(RCU)的临床经验与疗效.方法:回顾性分析2009年1月至2012年4月我院泌尿外科收治的下腔静脉后输尿管患者的临床资料.本组6例,均为男性,平均年龄22...
- 李望陈家存温儒民毛立军刘俊杰王军起
- 肿瘤Ki-67抗原HLA—A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定
- 2009年
- 目的鉴定Ki-67抗原HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位，为制备肿瘤疫苗提供依据。方法根据BIMAS和SYFPEITHI数据库对人Ki-67抗原CTL表位综合评分结果，合成7条候选肽。通过T2-肽结合实验检测候选肽与HLA—A2分子亲和力；通过酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测HLA—A2阳性CTL细胞分泌IFN-γ能力，评价候选肽免疫原性。结果合成的候选肽及阳性对照肽HIV-1pol476484纯度均超过95％。T2-肽结合实验结果显示280—288位置Ki-67氨基酸序列LQGETQLLV与HLA-A2分子结合力较强，其能够诱导特异性CTL活化。结论LQGETQLLV（280～288）是Ki-67抗原的HLA—A2限制性CTL表位。
- 徐为郭贞宋文哲李海龙孙晓磊姚元虎张宝福刘俊杰刘斌顾玉明高超郑骏年
- 关键词：KI-67抗原细胞毒性T淋巴细胞表位
- Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究被引量：12
- 2005年
- 目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用,探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67siRNA对应模板DNA序列,煺火处理后克隆至pSliencer3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786-0细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。
- 郑骏年马腾骧孙晓青陈家存温儒民曹敬毅杨文发李望刘俊杰
- 关键词：表达质粒786-0细胞BLOT检测癌基因治疗增殖基因
- 横裁包皮岛状皮瓣法在尿道下裂治疗中的应用被引量：5
- 2010年
- 2003年1月至2009年12月,本院采用横裁包皮岛状皮瓣法（Duckett法）治疗尿道下裂69例,效果满意,现总结如下：
- 丁勇魏华孔燕王银春刘俊杰张成静
- 关键词：尿道下裂外科手术
- G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性
- 目的构建含人G250基因启动子的表达载体,探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性。方法采用RT–PCR方法从人宫颈癌Hela细胞提取总DNA,扩增出G250基因两段不同长度的启动子片段,并将其克隆到pGL3-Bas...
- 郑骏年郝林吴阳薛松李望毛立军刘俊杰陈仁富陈家存
- 文献传递
- ^(125)I偶联反义核酸对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用被引量：3
- 2005年
- 目的观察125I偶联K i67基因反义核酸(ASODNs)对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用。方法合成K i67基因ASODNs,氯胺-T法125I偶联ASODNs(125I-ASODNs)。BALB/c种系裸鼠接种人肾癌786-0细胞。125I-ASODNs治疗组12只瘤体注射125I-ASODNs 0.1 m l(7.4 MBq/L、10 nmol),ASODNs治疗组12只瘤体注射ASODNs 0.1 m l(10 nmol),连续4 d。治疗后第3、6、12 d每组分别处死小鼠4只,取瘤组织检测肿瘤体积,免疫组化、W estern b lot技术检测K i67表达,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡率。结果125I-ASODNs组治疗后3、6、12 d小鼠肿瘤体积分别为(51.8±13.7)、(76.1±22.9)、(636.9±73.8)mm3,与ASODNs处理组(70.3±18.9)、(185.7±37.7)、(868.9±128.2)mm3比较,差异有统计学意义(P<0.01);K i67抗原表达率分别为(16.5±2.1)、(20.8±1.0)、(28.6±2.4)%,ASODNs组为(26.8±2.3)、(29.2±1)、(33.6±2.6)%,K i67蛋白量比分别为(54.8±2.6)、(58.6±2.9)、(63.9±3.5)%,与ASODNs组(72.6±5.1)、(79.7±3.4)、(85.7±4.4)%比较差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率分别为(22.6±2.0)、(24.9±2.0)、(27.7±2.2)%,与ASODNs组(15.1±1.6)、(17.8±1.9)、(18.3±2.3)%比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论125I-ASODNs比ASODNs具有更强的抑制裸鼠肾癌移植瘤生长及促进凋亡作用。
- 郑骏年马腾骧孙晓青陈家存吴松李望刘俊杰
- 关键词：裸鼠肾癌移植瘤
