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鼻病毒逆转录实时荧光定量PCR．方法的建立及应用被引量：1: 2014年; 目的建立同时检测A、B、C三型鼻病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链（RT-PCR）方法，并检测临床样本。方法合成能够同时检测A、B、C三型鼻病毒的引物和探针，制备RNA标准品并建立标准曲线，检测灵敏度、特异性和重复性，并对222份临床标本进行回顾性检测。结果鼻病毒A、B、C三型的线性范围分别是10^（9）～10拷贝／μl、10^（9）-10拷贝／μl、10^（9）～10^（3）拷贝／μl，标准曲线相关系数分别是0．999、0．997、0．999，扩增效率分别是96．10％、93．45％、96．98％。组内CV值小于3％。RT-PCR方法的检出率是27．02％，与传统PCR结果对比，RT—PCR方法的敏感性和特异性分别是100％和98．18％。结论该RT．PCR方法是灵敏度、特异性和重复性均较好的能够同时检测鼻病毒A、B、C三型的分子诊断方法。; 周杰英孙亚萍曹海燕谢志萍段招军曹友德; 关键词：聚合酶链反应

Taqman荧光定量RT—PCR在呼吸道感染患者临床标本非SARS冠状病毒检测中的应用被引量：1: 2013年; 目的建立检测四种常见人非SARS冠状病毒核酸特异的快速、敏感的TaqManqRT—PCR检测方法，应用于急性呼吸道感染患儿的感染分析。方法分别应用TaqManqRT—PCR与普通RT—PCR平行检测248份呼吸道标本，对方法的灵敏性、特异性和稳定性以及临床标本的适用性进行比较评价，阳性标本以体外转录RNA为标准品进行病毒载量定量。结果本方法可对HKU1、NL63、229E、OC43四种冠状病毒进行特异性诊断，与其他病毒无交叉反应，检测灵敏度可达10拷贝／μl，检测线性范围可达10^1～10^8拷贝／μl，248份标本中HKU1、NL63、229E、OC43阳性率依次为1．2％，0．8％，1．2％，1．6％，其中OC43荧光RT—PCR法检出率高于普通RT—PCR，其余三种病毒两种方法检测结果一致。非SARS冠状病毒阳性标本均检出于12月至次年5月。结论建立的TaqManRealtimeRT-PCR法具有特异性强、灵敏性高的特点，是开展非SARS冠状病毒的临床检测与疾病监测的有效技术手段。; 孙亚萍周杰英曹海燕谢志萍段招军; 关键词：冠状病毒属荧光抗体技术

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曹海燕