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兰州地区2004-2005年度婴幼儿病毒性腹泻的病原学研究被引量：111: 2006年; 目的了解兰州地区主要四种腹泻病毒的流行病学特点。方法收集兰州大学第一医院儿科2004年7月至2005年6月5岁以下全部住院腹泻患儿400例的粪便标本,分别采用Dako公司酶免疫试剂盒检测轮状病毒、星状病毒、腺病毒,杯状病毒检测采用酶免疫法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法。对轮状病毒、星状病毒阳性标本用RT-PCR进行毒株分型鉴定。结果400份标本中四种病毒检测阳性率依次为轮状病毒47.3%、杯状病毒15.5%、星状病毒9.5%、腺病毒7.5%。其中有混合感染的病例数占13.5%。轮状病毒毒株G血清型分型结果为G2(34.4%)、G3(32.8%)、G1(1.1%)、不同型混合感染(5.8%)、未能分型(25.9%),P基因型分型结果为P[4](45%)、P[8](22.1%)、未能分型(32.9%)。G型与P型组合P[4]G2(43.6%)、P[8]G3(25.6%),P[4]G3(13.8%)、P[8]G2(3.2%)、P[4]G1和P[8]G1各1例。星状病毒血清分型结果为1型(57.8%)、3型(2.6%)、8型(2.6%)、未能分型(36.8%)。病毒性腹泻的高发季节轮状病毒最为明显为10-12月份。发病年龄主要为2岁以下婴幼儿,轮状病毒的高发年龄是6-23月龄。结论兰州地区婴幼儿病毒性腹泻的病原复杂,轮状病毒仍是最主要病原,该年度轮状病毒的主要流行株为P[4]G2,与往年明显不同,病原混合感染比例较大,值得重视。; 叶新华金玉方肇寅孙亚萍谢华萍章青XiJiangDuncanSteeleRogerGlass; 关键词：轮状病毒病毒性腹泻婴幼儿

某学校一起轮状病毒感染性腹泻暴发疫情调查被引量：1: 2013年; 2012年12月18-26日,杭州市余杭区某学校发生一起感染性腹泻暴发疫情,共报告病例74例,罹患率5.32%,病原学检测为A组轮状病毒。经采取控制传染源、切断传播途径和健康宣教等综合防控措施,疫情很快得到控制。; 赵俊孟祥杰孙亚萍耿辉宋士利何金林韩荣荣; 关键词：轮状病毒感染性腹泻

一起幼儿园猩红热疫情的实验室检测分析被引量：2: 2014年; 目的对一起幼儿园猩红热疫情进行病原菌分离和实验室分析。方法按照国家行业标准WS 282-2008进行病原菌分离和鉴定,应用PCR法扩增致热外毒素基因,药敏试验采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片扩散法,脉冲场凝胶电泳分析参照PulseNet发布的单核细胞增生李斯特菌的PFGE操作程序。结果 21份咽拭子中检出5株A群链球菌。分离株均扩增出致热外毒素基因speA、speB和speC。菌株对青霉素、头孢拉定、氨苄西林、左氧氟沙星、氯霉素和万古霉素均敏感,对红霉素、克拉霉素、阿奇霉素和四环素均耐药。PFGE分析显示其来源相同。结论加强重点人群和重点场所的管理是预防猩红热的主要措施,及时判定疫情、确定传染源是控制猩红热疫情的必要手段,实验室检测特别是病原菌同源性分析将为疫情的控制提供可靠的保证。; 徐云龙孙亚萍孟祥杰赵俊罗芸; 关键词：化脓性链球菌药敏试验脉冲场凝胶电泳

2016-2019年杭州市余杭区973例严重急性呼吸道感染病例呼吸道合胞病毒检测结果被引量：14: 2021年; 收集2016年1月至2019年12月杭州市余杭区第一人民医院的严重急性呼吸道感染病例鼻咽分泌物标本,采用荧光定量PCR方法进行RSV病毒核酸检测;检测后分析不同年龄组、不同月份RSV阳性检出情况。结果显示,共收集并检测973份鼻咽拭子标本中,63份标本RSV核酸检测阳性,阳性检出率为6.47%;核酸检出率男性大于女性,但两者差异无统计学意义( P=0.230);RSV检出率与年龄呈负相关,0~1岁婴幼儿和1~2岁婴幼儿年龄组检出率最高,分别为15.2%和12%;RSV的流行有明显的季节性差异,每年冬季和春季是RSV流行高峰期。; 宋士利李明强孙亚萍; 关键词：呼吸道感染呼吸道合胞病毒呼吸道疾病

牡蛎和粪便中GⅠ、GⅡ型诺如病毒实时聚合酶链反应检测方法的建立被引量：2: 2008年; 目的建立适用于牡蛎和粪便中快速、特异、灵敏的GⅠ、GⅡ型诺如病毒（NV）定量分型诊断方法。方法通过对GⅠ、GⅡ型NV基因组保守序列的比对分析，设计高度特异的引物和探针，建立以TaqMan探针为基础的实时聚合酶链反应方法（TaqMan Real—time RT—PCR）。结果该方法对NV核酸检测高度特异，且GI和GⅡ型之间无交叉反应，最低检出限达10^2 copies／ul。对90份新鲜牡蛎样品和37份腹泻粪便标本分别用常规RT—PCR和笔者建立的TaqManReal—time RT—PCR进行NV检测，发现牡蛎样品中后者的检出率明显高于前者，而粪便标本中两者无明显差别。同时对阳性标本的测序分析证实结果准确可靠。结论研究中建立的TaqMan Real—time RT—PCR方法可用于海产品标本及粪便中NV定量及分型检测，可作为应对NV胃肠炎暴发的有效诊断方法。; 孙亚萍程民宋士利张心会李蓉; 关键词：实时聚合酶链反应诺如病毒基因型

GⅡ型诺如病毒装甲RNA质控品研制被引量：2: 2021年; 目的采用MS2噬菌体装甲RNA技术构建内含GⅡ型诺如病毒RNA的装甲RNA质控品,为诺如病毒核酸检测提供安全稳定的标准品。方法将MS2噬菌体成熟酶蛋白、包膜蛋白和调节位点基因(PAC基因)及GⅡ型诺如病毒520 bp片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒p ET-PAC,pET-PAC转入大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞进行原核表达,表达产物纯化后鉴定并进行定量及稳定性分析。结果研究成功构建和表达了耐RNA酶、内含GⅡ型诺如病毒片段的装甲RNA——AR-GⅡ。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示AR-GⅡ病毒颗粒的蛋白分子量约为14.4 kD,纯化后的AR-GⅡ无宿主菌DNA、RNA等杂质残留,每1 m L LB培养基可诱导约1.5×10^(12)copies的AR-GⅡ。AR-GⅡ在37℃、4℃条件下可以稳定8周以上,-20℃反复冻融8次RNA病毒浓度也无明显衰减,稳定性良好。结论基于MS2噬菌体制备的AR-GⅡ拷贝数高,稳定性好且能耐受RNA酶攻击,可以作为标准样品用于监控诺如病毒核酸提取、反转录和扩增等全过程。; 宋士利李明强孙亚萍; 关键词：MS2噬菌体质控品

诺如病毒GⅡ型感染的流行病学研究被引量：3: 2012年; 诺如病毒（norovirus，NV）属于杯状病毒科，是引起病毒性腹泻最常见的病原体之一，根据其基因特征被分为5个基因群（genegroup，G）：GI、GII、G III、GIV及GV。2011年，杭州市某幼儿园发生了一起GII型NV引起的胃肠炎疫情，为进一步了解其感染的有关情况，笔者开展了深入的调查，现将结果报告如下。; 孟祥杰孙亚萍赵俊何金林; 关键词：诺如病毒流行病学病毒性腹泻基因特征病原体

Taqman荧光定量RT—PCR在呼吸道感染患者临床标本非SARS冠状病毒检测中的应用被引量：1: 2013年; 目的建立检测四种常见人非SARS冠状病毒核酸特异的快速、敏感的TaqManqRT—PCR检测方法，应用于急性呼吸道感染患儿的感染分析。方法分别应用TaqManqRT—PCR与普通RT—PCR平行检测248份呼吸道标本，对方法的灵敏性、特异性和稳定性以及临床标本的适用性进行比较评价，阳性标本以体外转录RNA为标准品进行病毒载量定量。结果本方法可对HKU1、NL63、229E、OC43四种冠状病毒进行特异性诊断，与其他病毒无交叉反应，检测灵敏度可达10拷贝／μl，检测线性范围可达10^1～10^8拷贝／μl，248份标本中HKU1、NL63、229E、OC43阳性率依次为1．2％，0．8％，1．2％，1．6％，其中OC43荧光RT—PCR法检出率高于普通RT—PCR，其余三种病毒两种方法检测结果一致。非SARS冠状病毒阳性标本均检出于12月至次年5月。结论建立的TaqManRealtimeRT-PCR法具有特异性强、灵敏性高的特点，是开展非SARS冠状病毒的临床检测与疾病监测的有效技术手段。; 孙亚萍周杰英曹海燕谢志萍段招军; 关键词：冠状病毒属荧光抗体技术

鼻病毒逆转录实时荧光定量PCR．方法的建立及应用被引量：1: 2014年; 目的建立同时检测A、B、C三型鼻病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链（RT-PCR）方法，并检测临床样本。方法合成能够同时检测A、B、C三型鼻病毒的引物和探针，制备RNA标准品并建立标准曲线，检测灵敏度、特异性和重复性，并对222份临床标本进行回顾性检测。结果鼻病毒A、B、C三型的线性范围分别是10^（9）～10拷贝／μl、10^（9）-10拷贝／μl、10^（9）～10^（3）拷贝／μl，标准曲线相关系数分别是0．999、0．997、0．999，扩增效率分别是96．10％、93．45％、96．98％。组内CV值小于3％。RT-PCR方法的检出率是27．02％，与传统PCR结果对比，RT—PCR方法的敏感性和特异性分别是100％和98．18％。结论该RT．PCR方法是灵敏度、特异性和重复性均较好的能够同时检测鼻病毒A、B、C三型的分子诊断方法。; 周杰英孙亚萍曹海燕谢志萍段招军曹友德; 关键词：聚合酶链反应

中国七个地区1998-2005年急性腹泻住院患儿中星状病毒感染研究被引量：54: 2006年; 目的研究中国5岁以下腹泻住院患儿中星状病毒感染的流行病学特点,确定流行毒株血清型。方法选择国内7个地区收集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本,应用酶联免疫或PCR方法检测星状病毒,对星状病毒阳性标本应用RT-PCR方法分型并经测序确证。结果1998-2005年在7个地区的凋查点共收集1668份急性腹泻粪便标本,检测出星状病毒阳性标本91份,平均检出率为5．5％;病例全年均有发生,发病高峰主要集中在10月份到次年1月份;95％患儿年龄在2岁以下,其中以9-11月龄儿童发病最多,检出率为7.4％,12-17月龄、6-8月龄、0-6月龄儿童的检出率依次为6．1％、5.6％、5．6％。确定型别的49份标本中45份为HAstV-1型,1例为HAstV-3型,2例为HAstV-5型,1例为HAstV-8型。结论星状病毒是中国婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行毒株以1型为主,同时存在多个型别的散在流行。; 方肇寅孙亚萍叶新华王慧章青段招军Xi JiangDuncan SteeleRoger Glass; 关键词：星状病毒巢式逆转录聚合酶链反应流行病学

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