施媛萍
- 作品数：21 被引量：28H指数：3
- 供职机构：苏州大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金常州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生交通运输工程更多>>
- 游离脂肪酸下调载脂蛋白M的表达及其机制被引量：1
- 2013年
- 游离脂肪酸（FFA）是构成人体的重要成分,参与血脂代谢.研究表明,FFA水平升高可导致外周胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗的个体载脂蛋白M（ApoM）水平下降[1].本研究旨在观察FFA水平升高是否会直接下调ApoM并探讨其机制.一、材料和方法大鼠血浆FFA浓度检测、肝脏组织中mRNA的提取、逆转录、实时定量聚合酶链反应和PCR芯片（Qiagen公司）反应严格参照试剂盒说明书操作.大鼠ApoM和内参照基因β-肌动蛋白的引物和探针由上海生工生物工程有限公司合成.统计学分析参照文献[2].
- 施媛萍冯悦华牟琴峰张俊于洋张晓膺徐宁罗光华
- 关键词：载脂蛋白M游离脂肪酸实时定量聚合酶链反应Β-肌动蛋白APOM大鼠血浆
- 肥胖儿童血清载脂蛋白A5水平与瘦素和空腹胰岛素的相关性研究被引量：7
- 2013年
- 选择79例肥胖和64名正常体重儿童，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清载脂蛋白A5（ApoA5）和瘦素水平，放射免疫分析法（RIA）检测空腹胰岛素（FINS），采集身高、体重、腰围、血压、血脂、血糖等临床资料，计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA．IR）。结果显示，肥胖组儿童瘦素、FINS水平均明显高于对照组[19．15（13．01～25．08）ng／ml对3．29（1．45～6．02）ng／ml和15．44（12．05—20．26）μg/L对10．12（8．60—12．60）μg/L，均P〈0．01]，ApoA5水平则低于对照组[134．5（105．9—172．7）ng／ml对205．9（164．3。265．3）ng／ml，P〈0．01]。相关性分析显示儿童血清ApoA5与瘦素、FINS呈显著负相关性（均P〈0．01）。
- 张俊罗光华潘丽莉魏江施媛萍郑璐
- 关键词：肥胖症载脂蛋白A5瘦素空腹胰岛素
- 葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中的表达及其与白血病多药耐药的关系被引量：6
- 2007年
- 目的观察葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因在人红白血病多药耐药细胞株K562/AO2的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系。方法运用Alamar BlueTM多功能细胞染色法证实K562/AO2的多药耐药性;采用RT-PCR技术检测K562/AO2及其亲本K562细胞株的GCS基因、MDR1基因、bcl-2基因、bax基因的表达水平及其差异。结果(1)阿霉素(ADR)对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为75μg/ml和0.65μg/ml,耐药指数为115;长春新碱(VCR)对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为8μg/ml和0.22μg/ml,耐药指数为36。(2)K562/AO2细胞GCS基因和MDR1基因的表达明显强于K562细胞;K562/AO2细胞bcl-2基因表达强于K562细胞,而bax基因表达弱于K562细胞。结论GCS基因可能在白血病多药耐药中起着重要的作用,而细胞凋亡基因的表达异常可能是它导致肿瘤多药耐药的主要分子病理机制之一。
- 施媛萍谢平谢可鸣葛素梅张滨穆会君沈云峰
- 关键词：多药耐药细胞毒性试验
- 载脂蛋白M在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的表达差异及其作用被引量：1
- 2022年
- 目的:探讨载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)在大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的表达差异及作用。方法:利用安宁包缺氧体系构建大鼠H9C2心肌细胞H/R损伤模型,采用CCK-8、细胞凋亡检测试剂盒、caspase-3活性检测试剂盒检测H9C2细胞H/R后细胞增殖、凋亡的差异,同时检测ApoM和1-磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine-1-phosphate receptor1,S1PR1)在H/R条件下的表达情况。建立体外过表达ApoM(apoM overexpression,ApoM-OE)的H9C2细胞,采用CCK-8检测心肌细胞存活率,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,蛋白质印迹法检测心肌细胞cleaved caspase-3、caspase-3表达情况,分析ApoM在H/R诱导的心肌细胞损伤中的可能作用。结果:在H/R处理后,H9C2心肌细胞活力逐渐降低,细胞凋亡率、caspase-3活性升高,证实大鼠H9C2心肌细胞H/R损伤模型构建成功;在H/R处理后,心肌细胞中ApoM和S1PR1mRNA表达水平显著上调(均P<0.01)。与对照组相比,ApoM-OE组心肌细胞存活率、LDH活性、SOD活性、及cleaved caspase-3表达水平均无明显变化(P>0.05)。结论:ApoM和S1PR1在H9C2细胞H/R损伤中表达水平升高,但ApoM对H/R诱导的H9C2细胞损伤无明显的保护作用。
- 程港丽姚霜施媛萍张俊罗光华郑璐
- 关键词：载脂蛋白M1-磷酸鞘氨醇
- 过表达人载脂蛋白M基因对GK大鼠胰岛素敏感性的影响
- 2014年
- 目的 探讨过表达人载脂蛋白M（ApoM）基因是否改善Goto-Kakizaki （GK）大鼠胰岛素敏感性.方法 以慢病毒（LV）为载体,构建含人ApoM基因的重组慢病毒[LV4 （GFP）-ApoM].转染293T细胞24 h后,采用聚合酶链反应（PCR）芯片分析2型糖尿病相关基因;将10只GK大鼠随机分为ApoM阴性慢病毒组和ApoM阳性慢病毒组,每组5只.尾静脉注射5＆#215;108 TU慢病毒,用实时定量PCR（Real-time PCR）法检测ApoM mRNA水平,胰岛素耐量实验评价GK大鼠胰岛素敏感性.结果 （1）相较于ApoM阴性慢病毒组,293T细胞ApoM阳性慢病毒组ApoM mRNA水平增加79.43倍（P＜0.01）;同时,与胰岛素抵抗相关的基因丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）下调了2.11倍（P＜0.05）,胰岛素样生长因子2（IGF2）下调1.23倍（P＜0.05）.（2）ApoM阳性慢病毒组GK大鼠肺组织中人ApoM mRNA表达较为明显;第14天GK大鼠空腹血糖水平和对照组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）,但胰岛素耐量实验结果显示ApoM阳性慢病毒组GK大鼠血糖浓度下降50％的时间（60 min）明显早于ApoM阴性对照组（90 min）.结论 过表达ApoM基因有可能增强2型糖尿病个体的胰岛素敏感性.
- 冯悦华牟琴峰施媛萍张俊秦莉张晓膺徐宁罗光华
- 关键词：载脂蛋白M2型糖尿病胰岛素敏感性
- 实时荧光定量聚合酶链反应检测人锌指蛋白23方法的构建
- 2013年
- 目的建立检测人锌指蛋白23(human zinc finger 23,ZNF23)的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术。方法采用Primer Express Versions 3.0设计引物及TaqMan探针,检测ZNF23基因。将扩增的ZNF23基因片段纯化后与pMD19-T载体连接,克隆构建含ZNF23基因片段的重组质粒,作为定量检测ZNF23基因表达的标准品。结果 PCR扩增产物经测序分析证实为ZNF23特异性片段。本法灵敏度为650 copies/μL,线性范围为(6.50×102)-(6.50×107)copies/μL,相关系数R2为0.999,扩增效率E为97.28%,批间变异系数为0.78%～7.53%。结论成功建立了检测人ZNF23的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、通量高。
- 牟琴峰施媛萍郑璐魏江罗光华
- 关键词：聚合酶链反应
- 棕榈酸下调载脂蛋白M表达及其机制研究
- 2014年
- 目的明确棕榈酸对载脂蛋白M（apolipoproteinM，ApoM）表达的影响及其机制。方法用不同浓度棕榈酸处理人肝癌细胞株（HepG2细胞），采用实时定量PCR及PCR芯片分析棕榈酸对ApoM表达的影响和可能的机制。分别用棕榈酸（1mmol／L）和（或）PI-3K抑制剂LY294002（LY，10μmol／L）、蛋白激酶C抑制剂GFl09203X（GFX，2μmol／L）以及PPARβ／δ的拮抗剂GSK3787（10μmoL／L）处理HepG2细胞，实时定量PCR检测ApoM相关基因表达水平。结果0、0．25、0．5及1mmol／L棕榈酸分别作用于HepG2细胞后，ApoMmRNA表达水平显著下降，且呈剂量依赖性（P〈0．01）。人胰岛素信号通路PCR芯片检测结果显示，棕榈酸通过其中的6条信号途径影响HepG2细胞的增殖。LY对HepG2细胞ApoMmRNA表达的影响差异无统计学意义（P〉0．05），且LY不能逆转棕榈酸下调HepG2细胞ApoMmRNA的表达。GFX明显降低ApoMmRNA的表达水平（P〈0．05），但GFX不影响棕榈酸降低ApoMmRNA的效应。1mmol／L棕榈酸显著升高HepG2细胞PPARp／8mRNA水平（P〈O．001）；PPARB／8拮抗剂GSK3787对ApoMmRNA表达的影响无统计学意义（P〉0．05）；但其能够显著抑制棕榈酸降低HepG2细胞ApoM mRNA的效应（P〈0．05）。结论棕榈酸通过PPARβ／δ途径下调HepG2细胞ApoM基因表达，详细机制还需进一步研究。
- 施媛萍冯悦华牟琴峰于洋张俊张晓膺徐宁罗光华
- 关键词：载脂蛋白M棕榈酸实时定量PCR
- 去甲肾上腺素对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察去甲肾上腺素(NE)对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞和L-02细胞,分别加入不同浓度NE处理,继续培养,采用MTT法观察细胞增殖情况,HE染色和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果经0.1、1、10、50μmol/L NE处理24、48 h,HepG2细胞OD值显著下降(P均<0.05),L-02细胞OD值无明显变化。10μmol/L NE作用于HepG2细胞可见典型的凋亡形态学改变,胞质收缩、深染,核染色质浓缩;L-02细胞在NE作用前后形态学均无明显改变。HepG2细胞加入10μmol/L NE后部分细胞呈绿色(为早期凋亡表现),加入50μmol/L NE后部分细胞膜呈绿色,细胞核呈红色(为晚期凋亡表现);L-02细胞均未显示有荧光。0.1、1、10μmol/L NE作用于HepG2细胞24 h后,其凋亡率均显著高于对照组(0μmol/L NE),且呈剂量依赖关系(P均<0.05);而上述浓度NE作用于L-02细胞24 h后,其凋亡率较对照组先增高后降低(P均<0.05)。结论 NE可以抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,而对L-02细胞增殖和凋亡没有影响,提示其在特定类型肝癌临床治疗中具有潜在价值。
- 施媛萍施媛萍罗光华郑璐魏江
- 关键词：去甲肾上腺素人肝癌细胞HEPG2
- 高糖输注及罗格列酮干预对大鼠载脂蛋白M表达的影响
- 2014年
- 目的观察高浓度葡萄糖输注对大鼠载脂蛋白M（apoM）mRNA的表达的影响及罗格列酮干预的作用，并探讨相关机制。方法雄性SD大鼠随机分为5％葡萄糖组（对照组）、25％葡萄糖组（H组）、罗格列酮＋5％葡萄糖组（RN组）、罗格列酮＋25％葡萄糖组（RH组）4组。分两批独立的实验完成，一批应用高胰岛素．正常血糖钳夹（HEC）实验评价葡萄糖输注率（GIR），一批直接取肝脏提取总RNA，检测apoMmRNA表达水平及肝X受体途径（LXR）基因和PPAR-β/δ基因表达情况。结果葡萄糖和罗格列酮对GIR均有影响（均为P〈0．01），并且两者的交互作用差异有统计学意义（P〈0．01）。25％葡萄糖下调大鼠肝脏apoMmRNA表达（P〈0．05），而罗格列酮明显增高大鼠肝脏apoMmRNA的表达（P〈0．0001），但两者的交互作用差异无统计学意义（P〉0．05）。25％葡萄糖显著抑制大鼠肝脏LXR-β（P〈0．01）、SHP1（P〈0．01）、LRH1（P〈0．01）、ABCA1（P〈0．01）、PPAR．13／8（P〈0．01）基因的表达；而罗格列酮仅降低SHP1（P〈0．01）及ABCA1（P〈O．05）基因的表达。罗格列酮显著抑制正常大鼠肝脏ABCA1mRNA的表达（P〈0．05），但在高血糖状态下，罗格列酮则明显升高大鼠肝脏ABCA1mRNA水平（P〈0．01）。双因素方差分析表明罗格列酮和25％葡萄糖对大鼠肝脏ABCA1mRNA影响的交互作用差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高浓度葡萄糖和罗格列酮对apoM的调节作用是相对独立的，高浓度葡萄糖有可能主要通过LRH1和（或）ABCA1途径下调apoM基因的表达。
- 张俊施媛萍冯悦华潘丽莉牟琴峰张晓膺罗光华
- 关键词：罗格列酮载脂蛋白M
- 环孢素A联合苯基棕榈酰胺吗啡丙醇对K562/AO2细胞GCS基因表达的影响及对逆转多药耐药被引量：4
- 2008年
- 目的研究环孢素A(CsA)和苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)联合应用对人白血病多药耐药细胞株K562/AO2的葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因表达的影响及对白血病多药耐药的逆转作用,探索逆转白血病细胞耐药的策略。方法应用Alamar BlueTM多功能细胞染色法测定阿霉素(ADR)对K562和K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)及判断CsA的非细胞毒性剂量;采用RT-PCR法检测GCS基因和mdr1基因的mRNA表达。结果CsA浓度低于4.5μg/ml对K562/AO2细胞无细胞毒性。ADR对K562和K562/AO2细胞的IC50分别为(0.84±0.04)μg/ml和(89.24±1.27)μg/ml;当1μg/ml CsA和25μmol/L PPMP单用或联合作用于K562/AO2细胞时,ADR的IC50分别为(7.81±0.74)(、17.49±0.53)(、2.82±0.07)μg/ml;而低浓度CsA(0.01μg/ml)和PPMP(10μmol/l)联合作用时IC50为(16.08±1.25)μg/ml。CsA联合PPMP可明显降低GCS基因的mRNA表达,低浓度CsA和PPMP联用也有此作用。结论CsA联合PPMP可通过抑制K562/AO2细胞的GCS基因mRNA表达有效逆转其耐药,低浓度CsA联合PPMP在逆转其耐药的同时降低了细胞毒性。
- 白小明谢平谢可鸣施媛萍穆会君张滨
- 关键词：多药耐药环孢素A阿霉素
