张文举 作品数:20 被引量:43 H指数:5 供职机构: 上海大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市教育委员会创新基金 上海大学创新基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
检测花生过敏原用扩增内标、其构建方法及其应用 本发明涉及一种检测花生过敏原用扩增内标、其构建方法及其应用。该扩增内标基因的序列为SEQIDNO.1所示的碱基序列。这预示了在DNA水平检测已深加工食品中所含的过敏原物质是可能的。采用本发明的扩增内标进行花生过敏原的PC... 蔡琴 陈沁 张文举 关潇 邓志瑞文献传递 人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定 2013年 目的:制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素(hTSH)单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法:人工合成人促甲状腺激素(hTSH)上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白(BSA)构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果:建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于κ型,McAb腹水ELISA效价达1:1.6×105,与促黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论:本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。 乔元彪 王权 张文举 陈沁关键词:人促甲状腺激素 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 镉胁迫对匍匐剪股颖生长及生理生化的影响 被引量:11 2015年 本研究分析了镉胁迫对匍匐剪股颖种子萌发、幼苗和植株生长及生理生化的影响。结果表明,1)不同浓度的Cd2+(50~400mg·L-1)对匍匐剪股颖(Agrostis stolonifera)初期生长具有抑制作用,这种抑制作用随着Cd2+浓度的增加而增强。当Cd2+浓度为50mg·L-1时,发芽率、芽长、根长和苗鲜重分别只有对照(0)的47%、87%、54%和83%。当Cd2+浓度为400mg·L-1时,则完全抑制了种子的萌发;2)不同浓度的Cd2+(50~200mg·L-1)对幼苗叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化物酶(POD)活性具有显著影响。随着Cd2+浓度的升高,叶绿素含量逐渐下降,丙二醛含量不断上升,在200mg·L-1的Cd2+胁迫下,叶绿素和丙二醛含量分别是对照的37%和864%;在Cd2+浓度较低时(50 mg·L-1),SOD活性高于对照,达到1 314U·h-1·g-1,更高的浓度引起活性降低,但始终高于对照;POD的活性变化与SOD相似,在Cd2+浓度为100mg·L-1时最大值达到225U·s-1·g-1;3)Cd处理(2~100mg·L-1)播种后90d的植株,4个指标的变化趋势和Cd处理幼苗的变化基本一致。随着Cd2+浓度的升高及胁迫时间的延长,叶绿素和丙二醛含量分别不断下降和上升;SOD和POD活性均是先上升后下降。 邓一飞 徐佳敏 张文举 邓志瑞关键词:匍匐剪股颖 叶绿素 丙二醛 过氧化物酶 花生过敏原Ara h2.02原核表达方法条件的研究 被引量:3 2015年 将重组质粒pET-32a(+)-Arah2.02转化表达宿主菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE电泳分析,结果显示表达的蛋白大小约为38kDa。进一步用通用His标签抗体进行Western Blotting检测,结果表明成功克隆表达了花生过敏原Arah2.02。为获得较多的重组蛋白Arah2.02,分别对IPTG浓度、摇床转速、诱导温度和时间等条件进行选择,确定最佳条件为:IPTG浓度0.3mmol/L,摇床转速220r/min,诱导温度37℃,诱导时间2h。 蔡琴 张文举 陈沁关键词:花生 重组蛋白 ARA H 原核表达 镉对匍匐翦股颖成熟胚愈伤组织诱导及再生的影响 被引量:2 2013年 研究了不同浓度的镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织形成、生长和植株再生的影响.结果表明:当培养基中镉离子浓度在2.50mg/L以下时,愈伤组织的诱导频率高于对照,并在浓度为2.50mg/L时高达83.3%,说明低浓度镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织的形成可能具有刺激效应;随着镉离子浓度的进一步增加,愈伤组织的诱导频率明显下降,并在浓度大于50.00mg/L时完全抑制了愈伤组织的形成;在愈伤组织生长初期(0-30d),镉离子浓度为12.50mg/L时,愈伤组织生长形态最大,随着愈伤组织继续生长(30-45d),低浓度(2.50mg/L)的镉离子对愈伤组织生长的刺激效应强于更高浓度.在植株再生过程中,当镉离子浓度为1.25mg/L时的效果最佳,再生苗生长最好. 邓一飞 戴佳莺 吴雯君 张文举 陈沁 邓志瑞关键词:镉离子 匍匐翦股颖 愈伤组织 植株再生 花生内源过敏原蛋白Arah2的分离纯化及鉴定 被引量:5 2015年 Arah2蛋白是花生的主要过敏原蛋白之一,为获得高纯度的花生Arah2蛋白,以新鲜花生为原料,通过蛋白浸提、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)回收等方法分离得到目的蛋白,并运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI—TOF/MS)对其进行鉴定。结果表明:该方法可得到纯度较高的纯化蛋白;经质谱鉴定后确定该蛋白为Arah2蛋白,两个同种异型物分子量分别为18.5 kD(Arah2.01)和20.1kD(Arah2.02);层析柱分离和SDS—PAGE电泳回收的得率分别为31.4%和18.6%。 朱青青 张文举 蔡琴 陈沁关键词:花生 纯化 质谱 苏丹草种子醇溶蛋白提取和电泳条件优化 2012年 以苏丹草(Sorghum sudanense)种子为材料,以蛋白质提取率和电泳图谱效果为标准,分析不同提取剂、种子粉末质量(g)与提取剂体积(mL)的比例、还原剂二硫苏糖醇(dithiothreito,DTT)的浓度对种子醇溶蛋白提取效果的影响,同时研究上样量、不同胶浓度对SDS-PAGE检测蛋白的影响.结果表明,苏丹草的最佳提取剂为含有0.2%DTT的70%正丙醇,种子粉末质量与提取剂体积的最佳比例为1∶8.在上样量适当的情况下,12%分离胶电泳可以得到清晰的电泳图谱.以苏丹草种子为材料所建立的醇溶蛋白提取和电泳条件,也可应用于其他几种常见的禾本科种子醇溶蛋白的分析,并可得到较好的分辨率. 邓志瑞 孙晶晶 张文举 陈沁关键词:苏丹草 SDS-PAGE 含扩增内标的花生过敏原PCR和Real-time PCR检测方法 基于花生主要过敏原Ara h 1的基因序列设计引物.采用复合引物技术构建竞争性扩增内标.以314 copies/PCR为内标添加量,建立了含扩增内标的花生过敏原PCR和Real-time PcR检测方法。结果表明,PCR... 蔡琴 关潇 张文举 陈沁关键词:花生 PCR 扩增内标 文献传递 COMT基因多态性与肠易激综合征发病的关系 被引量:1 2015年 肠易激综合征(IBS)是一种常见的功能性肠病,以腹痛或腹部不适为主要症状,排便后可改善,常伴有排便习惯改变,缺乏可解释症状的形态学和生物化学异常,无论是在发达国家还是发展中国家,IBS都是常见疾病,占用医疗资源多,临床缺乏明确有效的治疗方法,因此有必要探索其发病原因。 魏双琴 施建平 钟良 金怒云 蔡琴 张文举 陈沁关键词:肠易激综合征 基因多态性 COMT 排便习惯 功能性肠病 腹部不适 花生IAC-Q-PCR检测方法的建立及热处理对花生过敏原Ara h2的影响 张文举 朱青青 蔡琴 陈沁