张学红
- 作品数：9 被引量：34H指数：3
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人细小病毒B19VP1蛋白表达及检测特异性抗体临床应用研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨检测人细小病毒B19IgM和IgG抗体国产试剂的敏感性、特异性以及诊断准确度,探讨其临床应用价值。方法标本来源为2006年5月至2008年6月第四军医大学西京医院收治的心肌炎、血液病、呼吸道感染等患儿165例,用重组质粒VP1-PQE30,转化大肠埃希菌M15,测序正确后发酵培养,IPIG诱导表达,通过SDS-PAGE及蛋白质印迹分析表达产物,表达蛋白经AKTAexplorer100快速纯化系统纯化。经滴定选择最佳抗原包被浓度及血清最佳稀释度,建立表达蛋白ELISA检测人细小病毒B19抗体方法,探讨其实用性。结果用表达纯化蛋白抗原建立的ELISA方法与腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、疱疹病毒的抗体阳性血清无交叉反应。其检测B19IgM和IgG的敏感性分别为87.50%、89.28%,特异性分别为90.34%、90.90%,诊断准确度为97.01%、95.54%。两种方法有较好的一致性。结论用国产的表达纯化B19病毒VP1蛋白,所建立的表达蛋白ELISA方法,检测人细小病毒B19IgM、IgG抗体,有较好的敏感性、特异性和诊断准确度。方法方便快捷、成本低,值得进一步深入研究、推广应用。
- 许东亮张国成聂晓晶李志宏孙新张学红
- 关键词：人细小病毒B19ELISA原核表达
- 西安地区手足口病与肠道病毒71型的关系被引量：14
- 2009年
- 目的获得2008年西安地区肠道病毒71型（EV71）流行株，探寻快速高效的检测技术，分析所获两安地Ⅸ流行株与安徽阜阳流行株的区别。方法采集手足口病患儿的疱液、咽部分泌物进行病毒分离和RT—PCR检测；利用免疫荧光技术进行病毒鉴定。结果56份咽部分泌物接种RD细胞和HEp-2细胞，病毒分离阳性率分别为5．4％（3／56）、1．8％（1／56）；56份疱液标本接种RD细胞和HEp-2细胞，病毒分离阳性率分别为12．5％（7／56）、5．4％（3／56）；RD细胞和HEp-2细胞分别于7d和10d出现细胞病变。检测了56例患儿的咽部分泌物和疱液标本，咽部分泌物RT—PCR结果阳性率为21．4％（12／56），疱液标本RT—PCR结果阳性率为33．9％（19／56）。14份出现细胞病变的细胞株通过免疫荧光鉴定9份为EV71感染。获得了2008年西安地区EV71流行株，将核苷酸序列提交NCBIGenbank，获得核苷酸登录号EU812461。结论本流行株可能嗜上皮细胞性弱、与2008年提交的安徽阜阳病毒株EU703812、EU703813、EU703814同源性达97％～98％；RT—PCR技术有快速、高效的优势，足EV71快速诊断的重要手段。
- 聂晓晶张学红张国成许东亮马超峰李亚绒孙新李小青
- 关键词：肠道病毒71型手足口病肠道病毒感染逆转录聚合酶链反应
- ELISA法检测B19病毒抗体及其临床应用
- 目的:建立检测人微小病毒B19的间接酶联免疫吸附（ELISA）法,评价其临床应用价值。方法:采用我科保存的XA-B19 VP1独特区蛋白包被ELISA板,优化该方法检测B19抗体的最佳实验条件。与聚合酶链反应（PCR）、...
- 聂晓晶李小青张国成许东亮孙新李志宏张学红
- 文献传递
- 急性呼吸道感染住院儿童人类博卡病毒感染的临床特征被引量：7
- 2009年
- 目的了解西安地区以急性呼吸道感染住院患儿的人类博卡病毒(HBoV)感染的临床特征。方法将2008年1月-12月以急性呼吸道感染住院患儿的咽拭及痰液标本252例分成2份,1份应用直接免疫荧光法检测RSV,甲、乙型流感病毒,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型副流感病毒和腺病毒常见的7种呼吸道病毒;另1份用于提取HBoV DNA,分析HBoV感染的临床特点及流行病学特征。随机抽取1份HBoV DNA阳性扩增产物进行序列测定,并通过Clustal W软件与GenBank中其他HBoV序列进行多序列比对分析。结果252份标本共检测到15份(6.0%)HBoV PCR阳性扩增产物。HBoV感染全年均有发生,冬春季多发;73.3%HBoV感染患儿的年龄为6个月至3岁;53.3%的患儿诊断为支气管肺炎(包括毛细支气管炎);53.3%患儿合并有其他呼吸道病毒的感染,HBoV单独感染与合并其他呼吸道病毒感染在临床特征方面无明显差别。HBoVNS1测序的291bp与GenBank中2个原型株HBoV Stockholm 1(st1,No.DQ00495)、HBoV Stockholm2(st2,No.DQ00496)和北京的2株(No.DQ988934.2及No.DQ988933.1)的同源性为99.0%。结论HBoV在15例以急性呼吸道感染住院患儿的咽拭及痰液标本中检出,HBoV感染以下呼吸道感染为著,与其他呼吸道病毒有较高的合并感染,HBoV单独感染与合并其他呼吸道病毒感染在临床特征方面无明显差别。
- 张学红张国成许东亮聂晓晶
- 关键词：人类博卡病毒住院儿童急性呼吸道感染
- 具有中和活性抗人类腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定及应用被引量：2
- 2009年
- 目的:制备具有中和活性抗人类腺病毒(HAdv)单克隆抗体(mAb),并进行鉴定与应用。方法:以活的人类腺病毒3型(HAdv-3)滴鼻免疫BALB/c鼠,用细胞融合技术制备抗HAdv的mAb细胞株,采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对mAb细胞株染色体进行分析;使用鼠mAb亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定,通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光技术进行特异性鉴定。建立HAdv-3感染动物模型,用获得的HAdv-3 mAb进行保护性研究。结果:细胞融合率为86%,抗HAdv抗体阳性孔率为51.4%。鉴定1株杂交瘤细胞(1A4),染色体数为98条,抗体亚类属IgG2a/κ,抗体腹水ELISA效价达10-5。ELISA、Western blot和间接免疫荧光证实该mAb特异性好。该mAb对HAdv-3感染动物有保护性作用。结论:成功地制备具有中和活性的抗HAdv mAb。该mAb识别的是HAdv六邻体蛋白,对HAdv-3感染动物有保护作用。
- 李思袖张国成许东亮聂晓晶李小青汪志华张学红
- 关键词：腺病毒单克隆抗体中和活性
- 西安地区EV71感染手足口病的临床特征被引量：11
- 2010年
- 目的了解西安地区EV71感染手足口病患儿的临床特征。方法采集手足口病患儿的疱液和(或)咽拭分泌物进行RT-PCR检测;分析EV71感染手足口病患儿的临床特征。结果 96例手足口病患儿中28例为EV71感染;男女比为1.8∶1;0～5岁27例(96.4%);19例为城区患儿(67.9%),其中幼托机构和小学患儿19例(67.9%)。临床表现中发热16例(57.1%),发热多发生在出疹之前;出疹部位为手足24例(85.7%)、臀部11例(39.3%)、肛周5例(17.9%)、膝部16例(57.1%)、肘部5例(17.9%),臀部皮疹以1岁以下患儿为主(81.8%,9/11);所有患儿均痊愈,病程5～11 d,无后遗症。获得了2008年西安地区EV71流行株,将核苷酸序列提交NCBI Genbank,获得核苷酸登录号EU812461。结论本次流行发生于春末夏初;5岁以下儿童是主要感染人群;幼托机构和小学患儿占比例高,可能与EV71经接触传播有关;给予对症治疗后均痊愈。
- 聂晓晶张国成李思袖李亚绒许东亮孙新张学红李小青
- 关键词：肠道病毒71型手足口病儿童
- ELISA法检测人微小B19抗体及其临床应用评价
- 2008年
- 目的建立检测人微小病毒B19的间接酶联免疫吸附(ELISA)法,评价其临床应用价值。方法采用原保存的XA-B19 VP1独特区蛋白包被ELISA板,优化该方法检测B19抗体的最佳实验条件。与聚合酶链反应(PCR)、parvovirus B19 ELISA方法进行比较,评价其一致性。结果最佳包被量为25 ng/孔,标本血清最佳稀释倍数为1∶200。建立的间接ELISA检测体系与腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、疱疹病毒抗体阳性血清无交叉反应。其检测B19 IgM敏感性为88.37%,特异性为96.15%,与PCR方法一致性好(kappa值>0.75,P>0.05);与parvovirus B19 IgM ELISA方法符合性好,符合率为96.8%。与parvovirus B19IgG ELISA方法比较kappa值>0.75,P>0.05,两种检测方法一致性好。结论建立的间接ELISA检测B19抗体的方法具有灵敏度高、特异性强、经济、快速、方便等优点,适合于流行病学调查和临床标本检测。
- 聂晓晶李小青张国成许东亮孙新李志宏张学红
- 关键词：人微小病毒B19酶联免疫吸附法
- B19病毒VP1基因变异对表达蛋白的结构及免疫的影响
- 人细小病毒B19(简称HPVB19)，可引起急性再障危象，急性血小板减少性紫瘢、关节炎、胎儿水肿、孕妇流产、死胎等多种疾病，我国B19病毒基因有特征性变异，VP1基因变异对表达蛋白的结构及免疫的影响，需要进一步探讨。本研...
- 张国成聂晓晶李小青许东亮李志宏张学红
- 关键词：人细小病毒B19VP1基因基因变异抗原位点免疫学特性
- 文献传递
- 抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
- 2008年
- 目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果:经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.6×106个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106,经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论:利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库,为进一步的研究奠定了基础。
- 汪治华张国成许东亮孙新李小青李思袖张学红聂晓晶豆玉凤
- 关键词：抗体库噬菌体展示技术FAB抗体呼吸道合胞病毒
