孙力华
- 作品数：11 被引量：22H指数：2
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划重庆市自然科学基金更多>>
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- 血管紧张素转换酶抑制剂促进短肠综合征大鼠肠黏膜的适应性代偿被引量：2
- 2010年
- 目的通过SD大鼠短肠综合征(SBS)模型,研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对肠黏膜的保护作用及其机制。方法成年雄性SD大鼠18只,采用随机数字表法分为3组:Sham组(空回肠单纯离断吻合)(n=6);SBS组(切除大约75%中段小肠,n=6);ACEI组[(SBS+ACEI)2 mg.kg-1.d-1](n=6)。术后10 d取材,测量大鼠小肠绒毛高度和黏膜层厚度,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况,RT-PCR技术检测肠黏膜ACE mRNA表达。结果术后ACEI组体质量恢复速度快于SBS组,但二者都明显慢于对照组(P<0.05)。SBS组黏膜绒毛较对照组明显增生肥大,绒毛高度和隐窝深度(总高度)增加约50%[(778±30)μmvs(502±40)μm,P<0.01],给予ACEI后,肠黏膜厚度较SBS组增高更明显[(870±29)μmvs(778±30)μm,P<0.01],75%小肠切除引起了残留肠段肠上皮细胞凋亡的显著增加[(5.46±0.95)%vs(1.01±0.49)%,P<0.05],给予ACEI显著抑制了肠切除所引起的残留肠段肠上皮细胞凋亡的增加[(2.39±0.70)%,P<0.05]。SBS组ACEmRNA水平较对照组明显增高,给予ACE抑制剂后ACE水平进一步增高(P<0.05)。结论肠切除后ACE的升高与上皮重塑密切相关,ACEI的应用可以抑制肠上皮细胞凋亡,促进肠黏膜适应性代偿。
- 王文生肖卫东张朝君陈炜孙力华杨桦
- 关键词：短肠综合征血管紧张素转换酶抑制剂肠黏膜
- 白细胞介素-22对缺氧条件下肠上皮屏障的保护作用及其机制被引量：7
- 2013年
- 目的观察白细胞介素-22（IL-22）对缺氧肠上皮T84细胞屏障功能的影响，探讨其分子机制。方法对T84细胞进行2％02缺氧6h（Hx组）及100μg／L重组IL-22（Hx＋rlL-22）处理，分别检测跨上皮电阻（TER），IL-22受体A1（IL-22RAl）及紧密连接蛋白：ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-4的mRNA与蛋白表达。结果缺氧引起IL-22RAl的mRNA及蛋白表达较常氧分别下降30．0％及63．0％，并引起TER降低54．7％，经rlL-22预处理使得TER较Hx升高43．8％。缺氧处理使ZO．1、Occludin、Claudin．1及Claudin-4表达明显降低，而rlL-22预处理则可缓解该现象（mRNA及蛋白表达较Hx组分别升高：44．3％、36．4％、77．6％、61．2％及109．3％、77，6％、153．3％、79．6％，P〈0．01）。结论IL-22与其受体作用后可以维持肠屏障功能，稳定渗透性，调控紧密连接蛋白的表达。
- 杨学超杨松巍杨光孙力华杨桦
- 关键词：白细胞介素-22肠上皮屏障紧密连接蛋白
- Hedgehog信号通路在缺氧肠上皮屏障功能调控的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨Hedgehog（Hh）信号通路在缺氧肠上皮屏障功能调控的作用。方法大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞分为3组：常氧组（21％氧浓度）、缺氧组（2％氧浓度）、缺氧＋环巴胺组（用5mmol／L的环巴胺预处理30min后，再给予2％氧浓度进行缺氧处理）。RT-PCR检测Hh信号通路IHH、PTCH、GLI-1mRNA的表达变化，电阻测定仪检测跨上皮电阻（TER），Westernblot检测IHH、紧密连接蛋白经典表达分子胞质附着蛋白（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、闭合蛋白（Claudin-1）的表达情况。组间比较采取单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。结果RT-PCR检测结果表明：常氧组Hh信号通路IHH、PTCH、GLI-1mRNA的相对表达量分别为0．056±0．009、0．459±0．087、0．142±0．023；缺氧组分别为0．303±0．052、0．678±0．073、0．483±0．061，两组比较，差异有统计学意义（t=一14．05，一11．85，一6．52，P〈0．05）。Westernblot检测结果显示：常氧组和缺氧组的IHH相对蛋白表达量分别为0．39±0．06和0．91±0．15，两组比较，差异有统计学意义（t=一8．08，P〈0．05）。常氧组、缺氧组和缺氧＋环巴胺组的TER分别为（134±5）Ohm／cm。、（100±6）Ohm／cm2、（118±5）Ohm／cm2，3组比较，差异有统计学意义（F=1．0d，P〈0．05）。与常氧组比较，缺氧组下降约27．7％（t=7．84，P〈0．05）；与缺氧组比较，缺氧＋环巴胺组回升约16．4％，但仍低于常氧组（t=4．23，P〈0．05）。常氧组胞质附着蛋白一1、咬合蛋白、闭合蛋白一1的表达分别为1．184-0．24、0．80±0．13、0．90±0．09，缺氧组分别为0．58±0．08、0．32±0．05、0．50±0．09，缺氧＋环巴胺组分别为0．92±0．21、0．43±0．10、0．82±0．11，3组比较，差异有统计学意义（F=4．95，2．88，10．09，P〈0．05）。缺氧组较常氧组分别降低48．7％、40．0％、55．6％（t=12．86，
- 杨光杨学超陈国庆孙力华杨桦
- 关键词：HEDGEHOG信号通路环巴胺紧密连接蛋白
- 缺氧条件下环磷酸腺苷对肠黏膜屏障功能的调控研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨缺氧条件下环磷酸腺苷（cAMP）水平的变化对肠黏膜屏障功能的影响。方法采用人结肠癌Caco．2细胞建立肠上皮细胞缺氧模型，分为常氧组、常氧加Forskolin组、缺氧8h组和缺氧8h加SQ22536（腺苷酸环化酶抑制剂）组。采用cAMP检测试剂盒，检测实验各组cAMP水平的变化；RT-PCR及Westernblot方法分别检测各组肠上皮紧密连接蛋白claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达水平的变化：Millipore电阻抗系统法检测各组肠上皮细胞跨上皮电阻（TER）的变化情况。结果缺氧8h组肠上皮cAMP含量较常氧组明显升高[（6．30±0．50）pmol／L比（2．38±0．18）pmol／L，P〈0．01]，而claudin．1和occludin的mRNA及蛋白表达水平均明显降低（均P〈0．05），TER值下降了6．30±0．64（P〈0．01）。与缺氧8h组相比，缺氧8h加SQ22536组肠上皮cAMP含量明显降低[（2．12±0．23）pmol／L比（6．30±0．50）pmol／L，P〈0．01]，claudin-1和occludinmRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0．01），TER值升高了32．96±2．16（均P〈0．05）。结论缺氧条件下cAMP水平升高，而下调cAMP水平可增加肠道紧密连接蛋白claudin-1及occludinmRNA及蛋白水平的表达，从而减轻缺氧对肠上皮屏障的损伤。
- 杨洋王文生邱远孙力华杨桦
- 关键词：缺氧环磷酸腺苷肠黏膜屏障紧密连接蛋白
- SIRT1在TNF-α介导的肠上皮屏障破坏中的作用及机制研究被引量：3
- 2014年
- 目的观察沉默信息调节因子1(SIRT1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的肠上皮Caco-2细胞屏障功能破坏的影响并探讨其分子机制。方法将Caco-2细胞分3组处理:对照组、TNF-α100ng/mL 24h处理组(TNF-α组)及TNF-α100ng/mL24h处理+白芦藜醇(Resveratrol)40μm预处理12h组(TNF-α+Res组)。分别检测跨上皮电阻(TER)、SIRT1及紧密连接蛋白:ZO-1、occludin的蛋白表达。结果对照组、TNF-α组、TNF-α+Res组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.81±0.02、0.43±0.04、0.60±0.03。3组的TER分别为(154.00±5.00)、(97.00±4.00)、(128.00±6.00)Ohm/cm2。TNF-α组SIRT1的蛋白表达较对照组下降47.00%,TER降低37.00%,经白芦藜醇预处理使TER较TNF-α组升高32.00%。对照组、TNF-α组、TNF-α+Res组的ZO-1和occludin蛋白相对表达量分别为0.62±0.06和0.57±0.03、0.23±0.05和0.33±0.04、0.41±0.03和0.50±0.02。TNF-α处理后紧密连接蛋白ZO-1、occludin表达显著降低(P<0.05),而白芦藜醇预处理可缓解该现象,蛋白表达较TNF-α组分别升高78.00%、51.00%(P<0.05)。结论 TNF-α处理条件下SIRT1水平降低,而升高SIRT1水平可增加肠道紧密连接蛋白ZO-1、occludin蛋白水平的表达,从而减轻TNF-α对Caco-2细胞构成的上皮屏障功能的损伤。
- 马远航杨松巍孙礼刚于敏孙力华王文生杨桦
- 关键词：上皮紧密连接蛋白
- γ干扰素对缺氧肠上皮屏障功能影响及其机制被引量：2
- 2012年
- 目的观察1干扰素（IFN-γ）对缺氧肠上皮细胞屏障功能的影响，探讨其分子机制。方法对HT-29细胞进行缺氧及IFN-γ处理，检测跨上皮电阻（TER）、缺氧诱导因子-1a（HIF-1a）蛋白及肠三叶因子（ITF）、黏蛋白3（mucin-3）、CD73、CD55、血小板活化因子受体（PAFR）mRNA表达的变化。结果缺氧＋IFN-γ使TER明显下降（较常氧和缺氧下降33．8％、28．3％），使HIF—1a蛋白较缺氧降低72．1％，使ITF、mucin-3、CD73、CD55、PAFRmRNA分别较缺氧降低53．3％、31．1％、74．6％、62．4％，但PAFRmRNA水平两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IFN-γ能使缺氧肠屏障功能降低，与IFN-γ使HIF-1a蛋白降低，并抑制HIF-1a下游的肠屏障调节因子密切相关。
- 梁鸿寅王文生杨洋孙力华杨桦
- 关键词：干扰素肠屏障功能
- 甘露糖结合凝集素对肠上皮细胞屏障功能的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察甘露糖结合凝集素(mannose binding lectin,MBL)对人结肠癌细胞株Caco-2屏障功能的影响并探讨其分子机制。方法体内实验:取14只C57小鼠,按随机数字表法分为假手术组和LPS组(经腹腔注射LPS,构建肠炎症损伤模型),通过免疫组化和Real-time PCR观察MBL的变化情况,HE染色观察肠黏膜的损伤情况。体外实验:Caco-2细胞分为对照组、空转染组和MBL shRNA组(应用MBL干扰质粒转染Caco-2细胞),采用Real-time PCR、Western blot检测紧密连接蛋白的表达情况,并检测其跨上皮电阻(TER)。结果体内实验TER显示LPS组肠黏膜通透性(80.32±5.43)比假手术组(140.45±4.78)明显增加(P<0.01),HE染色显示LPS处理后肠黏膜完整性比假手术组降低,免疫组化和Real-time PCR检测结果显示LPS处理组MBL表达升高(P<0.05)。在体外实验中,我们成功构建MBL shRNA质粒模型,MBL shRNA组细胞中MBL的蛋白和mRNA表达[(0.34±0.09),(0.42±0.12)]较对照组及空转染组明显降低(P<0.05)。MBL shRNA组的紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1的蛋白[(0.43±0.10)、(0.53±0.11)]和mRNA水平[(0.43±0.08)、(0.45±0.10)]明显低于其余组(P<0.05);MBL shRNA组TER值(80.33±7.64)降低较其余组明显(P<0.05)。结论下调MBL基因可减少肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1 mRNA及蛋白水平的表达,减弱肠上皮细胞的屏障保护功能。
- 许超彭科王文生于敏孙力华杨桦
- 关键词：甘露糖结合凝集素紧密连接蛋白LPS
- 甘露糖结合凝集素对肠上皮细胞凋亡的调控作用及机制研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨重组甘露糖结合凝集素(recombinant human mannose-binding lectin,rh MBL)对Caco-2细胞凋亡的影响及其机制。方法取14只C57小鼠,随机分为2组。经腹腔注射LPS,构建肠黏膜炎症损伤模型。通过免疫组化和RT-PCR观察甘露糖结合凝集素(MBL)的变化情况,使用TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况。体外以0、5、10、20μg/m L的rh MBL处理Caco-2细胞,流式细胞术分析Caco-2细胞的凋亡情况,Western blotting和Real-Time PCR检测Caco-2细胞中Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达情况,用Western blotting观察MAPK信号通路的变化并探讨其机制。结果经LPS刺激后,免疫组化和PCR观察到MBL在肠上皮细胞的表达增多,TUNEL染色显示肠上皮细胞凋亡增加。在体外不同浓度的rh MBL处理Caco-2细胞48 h后,20μg/m L rh MBL组的早期凋亡率高于其余组。选取20μg/m L的rh MBL以不同时间处理Caco-2细胞后,早期凋亡率增加。经20μg/m L处理48 h后,与对照组相比Bax/Bcl-2蛋白和基因表达比值升高,同时磷酸化P38、ERK蛋白表达增加。给予P38、ERK通路抑制剂后,与20μg/m L相比P38抑制剂能部分使Bax/Bcl-2蛋白表达比值降低,早期凋亡减少。结论高浓度rh MBL可促进肠上皮细胞细胞凋亡,并提示rh MBL可能是通过P38 MAPK途径参与细胞凋亡的调控。
- 许超彭科王文生于敏孙力华杨桦
- 关键词：甘露糖结合凝集素BAXBCL-2凋亡P38
- 6甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑通过下调角质细胞生长因子受体抑制结肠癌细胞增殖被引量：1
- 2015年
- 目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)及其配体6甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑(6-formylindolo[3,2-b]carbazole,FICZ)对结直肠癌上皮细胞表面角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor,KGFR)的调控和对细胞增殖的影响。方法选用免疫组化和荧光定量PCR技术分别检测KGFR在结直肠正常组织和相应癌组织中的表达和定位,免疫荧光观察AhR在两种结肠癌细胞株(Lo Vo,Caco-2细胞株)中的分布,使用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR检测AhR、细胞色素P4501A1(CYP1A1)、KGFR在FICZ处理组和对照组中的表达差异,使用细胞计数板分别检测对照组,KGF处理组,KGF+FICZ处理组和FICZ处理组各组的细胞数。结果 12个结直肠癌临床样本中有11个患者样品中KGF高表达,8个患者样品中KGFR显著增高且KGFR主要高表达于上皮细胞。体外实验发现,FICZ处理后的Lo Vo细胞中KGFR的蛋白水平和mRNA水平分别降低了50%和58.8%。在Caco2细胞中分别降低了52.6%和62.5%。这种调节过程能被AhR抑制剂CH223191阻断。同时,在两种结肠癌细胞系中,FICZ能够降低KGF对癌细胞的增殖作用(Lo Vo:34%;Caco-2:37%)。结论 AhR通过下调KGFR的表达,抑制KGF对癌细胞的增殖效应。
- 殷久恒韩宾蒲爱民盛百伐于敏孙力华王启萌杨坤秋杨桦
- 关键词：芳香烃受体细胞增殖
- ACEI促进短肠综合征大鼠肠上皮结构代偿的作用及机制研究
- 目的 短肠综合征(Short Bowel Syndrome,SBS)引发的肠道适应性代偿是SBS患者得以康复的基础和保证,如何促进肠道适应性代偿是防止肠功能衰竭的关键.研究发现,血管紧张素转换酶ACE在肺上皮和心肌细胞的...
- 王文生肖卫东孙力华杨桦
