孔凡彪
- 作品数：8 被引量：5H指数：1
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测被引量：1
- 2011年
- 目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础。方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoRⅠ和BamHⅠ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性。结论成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白。
- 孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交自激活
- RNA干扰鼠尾同源盒转录因子2基因沉默逆转人胃癌裸鼠耐药模型耐药性的研究
- 2013年
- 多药耐药（MDR）的产生是胃癌化疗失败的主要原因，而特异性核转录凶子鼠尾同源盒转录因子2（Cdx2）的高表达可阻碍化疗药物甲氨碟呤（MTX）破坏细胞[1]，但Cdx2沉默在胃癌多药耐药中的作用尚不明确。本实验旨在观察RNA干扰介导Cdx2基因沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901／DDP裸鼠皮下移植瘤模型化疗敏感性的影响。
- 韦尉元孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：RNA干扰介导基因沉默人胃癌耐药模型裸鼠鼠尾
- 慢病毒RNA干扰E2F-1对人胃癌裸鼠皮下瘤耐药性的影响
- 目的观察E2F-1基因沉默的重组慢病毒颗粒(Lv-shRNA-E2F-1)对人胃癌裸鼠皮下瘤生长及其耐药性的影响。 方法人胃癌SGC-7901/DDP耐药细胞株接种于裸鼠近腋右背侧皮下，建立人胃癌耐药裸鼠皮下瘤模型，将...
- 孔凡彪
- 关键词：胃癌耐药性
- 文献传递
- Cdx2逆转录病毒感染对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察Cdx2基因过表达的重组逆转录病毒载体(pLXSN-Cdx2)对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响。方法构建重组逆转录病毒载体pLXSN-Cdx2,建立裸鼠人胃癌皮下瘤模型,将30只裸鼠随机分为pLXSN-Cdx2组、空载体逆转录病毒颗粒pLXSN组和对照组,每组10只。向3组动物肿瘤内分别注射pLXSN-Cdx2、pLXSN或生理盐水0.2 mL,共7次,测量各组肿瘤体积的大小;15 d后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,应用RT-PCR检测肿瘤中Cdx2基因mRNA的表达,TUNEL检测细胞凋亡指数。结果 pLXSN-Cdx2构建成功;与对照组和pLXSN组比较,pLXSN-Cdx2组的肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05);pLXSN-Cdx2组肿瘤体积为(14.15±2.17)mm3,明显低于pLXSN组和对照组的肿瘤体积(P<0.05);pLXSN-Cdx2组Cdx2 mR NA的表达量为(2.71±0.65),高于pLXSN组和对照组(P<0.05)。pLXSN-Cdx2组的凋亡指数(14.4±5.3)%显著高于pLXSN组(7.6±2.2)%和生理盐水组(7.7±2.3)%(P<0.05)。结论重组逆转录病毒载体pLXSN-Cdx2瘤内注射可抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长。
- 孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：CDX2胃癌
- RNA干扰Cdx2基因沉默对人胃癌裸鼠耐药模型Survivin和C-myc表达的影响
- 2013年
- 目的观察携带人尾型同源盒转录因子2(Cdx2)基因沉默的重组慢病毒颗粒(Cdx2-RNAi-LV)对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901/DDP裸鼠皮下移植瘤中Survivin和C-myc表达的影响。方法建立人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901/DDP裸鼠皮下移植瘤模型,36只裸鼠随机分成3组(n=12):PBS组、LV-RNAi组、Cdx2-RNAi-LV组;各组瘤体内分别注射磷酸盐缓冲液、慢病毒颗粒(0.5×108TU/ml)、含Cdx2基因重组慢病毒颗粒(0.5×108TU/ml)相应药物100μl,1次/3d,共6次;同时所有裸鼠腹腔注射药物顺铂(25mg/kg),隔天1次,共10次;注射Cdx2-RNAi-LV病毒颗粒第20天后脱颈椎法处死裸鼠,完整切取肿瘤组织,并应用PT-PCR和Westernblot技术检测移植瘤中Survivin和C-myc基因的表达。结果 Cdx2-RNAi-LV组、LV-RNAi组和PBS组的细胞均有Survivin、C-myc的mRNA和蛋白的表达,但各组细胞对应的Survivin、C-myc的mRNA和蛋白的表达水平有差别;Cdx2-RNAi-LV组Survivin、C-myc的mRNA和蛋白的表达量较PBS组和LV-RNAi组明显下调(P<0.05),而PBS组和LV-RNAi组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Cdx2基因沉默重组慢病毒颗粒瘤内注射下调人胃癌耐顺铂细胞裸鼠移植瘤Survivin和C-myc表达,可能是Cdx2基因沉默逆转肿瘤的耐药性机制之一。
- 韦尉元孔凡彪王晓通肖强
- 关键词：胃癌CDX2SURVIVINC-MYC
- siRNA介导的E2F-1基因沉默对胃癌细胞MGC803中Rb蛋白表达水平的影响被引量：1
- 2012年
- 目的应用RNA干扰技术研究E2F-1基因沉默在人胃癌MGC803细胞中对Rb蛋白表达的影响。方法将重组质粒E2F-1-siRNA转染MGC803细胞,筛选稳定株,利用RT-PCR检测转染前后细胞E2F-1mRNA表达水平,并通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测各组细胞E2F-1蛋白的表达水平来验证质粒转入胃癌细胞的情况。采用Western blot检测三组细胞中总Rb蛋白和磷酸化Rb蛋白的表达情况,计算出非磷酸化Rb蛋白表达情况,统计各组间的差异。结果重组质粒E2F-1-siRNA成功转入胃癌细胞中;有效抑制了E2F-1 mRNA的表达,E2F-1蛋白水平显著下降,与阴性对照组及未转染组相比分别降低了83.2%和84.6%,去磷酸化Rb蛋白分别增加了61.22%(P<0.05)和66.60%(P<0.05),差异有统计学意义。结论沉默表达E2F-1基因后,可以有效降低Rb蛋白的水平,促进其活化形式去磷酸化Rb蛋白的产生。
- 孔凡彪王晓通韦尉元罗文肖强
- 关键词：E2F-1RB蛋白去磷酸化
- 双向凝胶电泳及质谱分析法在筛选人胃癌标记物中的应用
- 2012年
- 目的初步筛选人胃癌相关抗原,为进一步认识胃癌的发生、发展机制及其早期诊断、靶向治疗提供依据。方法采用双向凝胶电泳及免疫印迹法分离人胃癌组织的总蛋白质,以PD Quest 8.0软件分析图谱;用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱及蛋白质数据库搜索对差异蛋白点进行鉴定。结果获得分辨率高、匹配性好的人胃癌组织总蛋白双向凝胶电泳图谱,图像分析显示3块胶的点数为789±27、匹配点数为684±21、匹配率为86.7%;获得高分辨率的免疫印迹反应图谱,图像分析找出差异反应蛋白质19处,质谱鉴定共得到11种蛋白质(包括结蛋白、β微管蛋白、波形蛋白及胶转蛋白等)。结论利用血清蛋白质组分析可初步筛选、鉴定11种人胃癌相关抗原,此对进一步认识胃癌的发生、发展机制及其早期诊断、靶向治疗提供了依据。
- 孔凡彪王连振谢玉波肖强
- 关键词：双向凝胶电泳肿瘤标记物
- SOX2和CDX2在胃癌发生中的作用及相关性研究进展被引量：2
- 2012年
- 胃黏膜肠上皮化生（Intestinal metaplasia，IM）是肠型胃癌发病机制Correa惫级联反应的一个中间步骤，被认为是一种癌前病变，其机制尚未详细阐明。若想预防IM发展为胃癌，就有必要研究IM向胃癌发展过程中的相关基因。现对性别决定区Y框蛋白2（SRY—related high—mobility group box 2，SOX2）和尾型同源盒转录因子2（CDX2）在胃癌发生中的作用及相关性研究进展综述如下。
- 孔凡彪肖强
- 关键词：SOX2CDX2肠上皮化生
