王晓通
- 作品数：27 被引量：73H指数：6
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰介导的转录因子E2F-1沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 观察转录因子E2F-1基因RNA干扰（RNAi）的重组慢病毒载体（pLL-E2F-1-shRNA）对人胃癌裸鼠移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为pLL-E2F-1-shRNA组,pLL3.7组,生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共6次,并测量各组肿瘤体积.11 d后处死裸鼠,显微镜观察移植瘤组织形态变化;免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLL3.7组比较,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤生长速度明显减慢（P＜0.05）;病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果显示pLL3.7组和生理盐水组的肿瘤细胞细胞核内有少量棕褐色颗粒沉着,pLL-E2F-1-shRNA组肿瘤细胞细胞核内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果显示pLL-E2F-1-shRNA组E2F-1 mRNA表达较pLL3.7组和生理盐水组明显下降（P＜0.05）,E2F-1蛋白表达较pLL3.7组和生理盐水组减少75.2%和83.9%;pLL-E2F-1-shRNA组的凋亡指数（16.7±5.6）%明显高于pLL3.7组（10.5±4.1）%和生理盐水组（11.2±4.3）%（P＜0.05）.结论 慢病毒载体pLL-E2F-1-shRNA瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.
- 王晓通钱倩李雷谢玉波肖强
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰E2F-1胃癌
- E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。结果在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。
- 王晓通李雷肖强谢玉波王长青
- 关键词：胃癌E2F-1基因表达谱芯片差异表达基因
- Cdx2-siRNA对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响被引量：10
- 2012年
- 目的:观察Cdx2小分子干扰RNA(Cdx2-siRNA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡及Survivin、Caspase-9表达的影响。方法:设计合成针对Cdx2基因的siRNA寡核苷酸以及阴性对照siRNA。将人胃癌MGC-803细胞接种于培养板中,分为3组,正常对照组不作处理,阴性对照组和Cdx2-siRNA组分别用LipofectamineTM2000将阴性对照siRNA或Cdx2-siRNA成功转染进细胞内。应用流式细胞仪检测转染24h时MGC-803细胞凋亡的变化,并应用RT-PCR和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达。结果:Cdx2-siRNA组MGC-803细胞的凋亡率为(12.5±0.6)%,明显高于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);Cdx2-siRNA组Survivin mRNA和蛋白的表达量分别为(0.14±0.04)和(0.51±0.12),明显低于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);Cdx2-siRNA组Caspase-9 mRNA和蛋白的表达量分别为(0.98±0.24)和(1.78±0.41),明显高于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);而阴性对照组和正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Cdx2-siRNA促进人胃癌细胞的凋亡,其机制可能与其抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性有关。
- 杨杰王晓通谢玉波肖强
- 关键词：小分子干扰RNACDX2SURVIVINCASPASE-9
- Cdx2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的:构建尾型同源盒基因Cdx2RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定.方法:选取Cdx2基因的19nt特异性序列,设计针对Cdx2的shRNA序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组病毒质粒及其3种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM 2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度.结果:通过对pLL-Cdx2-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Cdx2基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞包装成功,收集293T细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为5×107TU/mL.结论:成功构建人Cdx2基因RNAi慢病毒载体,为研究Cdx2对胃癌生长的影响提供了稳定感染细胞载体.
- 钱倩王晓通谢玉波李雷肖强
- 关键词：慢病毒载体CDX2RNAI
- Cdx2小分子干扰RNA对胃癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察Cdx2小分子干扰RNA（Cdx2-siRNA）对人胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响。方法设计合成针对Cdx2基因的siRNA寡核苷酸以及阴性对照siRNA。将人胃癌MGC-803细胞接种于培养板中，分为3组，正常对照组不作任何处理，Cdx2-siRNA组和阴性对照组分别用Lipofectamine^TM2000将Cdx2-siRNA或阴性对照siRNA转染进细胞内。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot技术检测转染24h时胃癌MGC-803细胞中Cdx2mRNA和蛋白的表达，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测24、36、48、60、72h的细胞活力，应用克隆形成实验检测转染7d时MGC-803细胞增殖的变化，应用流式细胞仪检测转染24h时MGC-803细胞周期和细胞凋亡的变化。结果Cdx2-siRNA或阴性对照siRNA成功转染进胃癌MGC-803细胞内；Cdx2-siRNA组Cdx2mRNA和蛋白的表达量分别为（0．07±0．01）和（0．15±0．02），明显低于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；Cdx2-siRNA组细胞活力和增殖能力下降，24、36、48、60、72h的吸光度值分别为（0．125±0．003）、（0．193±0．005）、（0．223±0．005）、（0．267±0．003）、（0．315±0．006），克隆形成数为（51．4±3．2），均明显低于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；而且，Cdx2-siRNA组细胞凋亡率为（12．5±0．6）％，G。／G，期比例为（73．1±7．8）％，明显高于阴性对照组和正常对照组（P〈0．05）；阴性对照组和正常对照组比较，上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Cdx2-siRNA可抑制人胃癌细胞的活力和增殖能力，其机制与诱导细胞凋亡、使细胞周期停滞有关。
- 崔建华谢玉波王晓通肖强
- 关键词：胃癌RNA干扰CDX2增殖脱噬作用
- Cdx2-siRNA对胃癌MGC-803细胞黏附能力的影响被引量：2
- 2011年
- 我们选用人胃癌MGC-803细胞为实验对象，设计合成针对Cdx2的小干扰RNA（siRNA）并转染MGC-803细胞，观察Cdx2基因表达下调后对细胞黏附能力以及PTEN表达的的影响。
- 吴锟王晓通谢玉波肖强
- 关键词：胃癌MGC-803MGC-803细胞PTEN表达CDX2表达下调
- 5-FU联合人参黄芪复方对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响被引量：13
- 2012年
- 目的探讨中药人参黄芪复方联合5-氟尿嘧啶(5-FU),在体外对人胃癌MGC-803细胞的增殖、克隆、凋亡、迁移等生物学行为的影响。方法采用MTT方法检测细胞的增殖抑制率;并计算其中效浓度;流式细胞仪检测观察细胞的周期及凋亡;Giemsa染色检测细胞的克隆形成;细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的抑制作用。结果人参黄芪复方和5-FU均能抑制人胃癌MGC-803细胞生长,并随着药物浓度的增加而增强,5-FU联合人参黄芪复方对细胞生长的抑制率明显高于单用人参黄芪复方或5-FU组(P<0.05),并随着浓度的增加而增强;人参黄芪复方和5-FU均能诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞克隆形成、阻滞细胞于G0/G1期、并抑制细胞迁移,而两药联用时细胞凋亡率、G0/G1期细胞均明显高于两药单用(P<0.05),并阻滞细胞于G0/G1期;人参黄芪复方与5-FU联合应用时细胞克隆形成、细胞迁移面积均明显低于两药单用(P<0.05),且联合用药的中效浓度小于两药单用时的中效浓度之和。结论人参黄芪复方和5-FU联合应用与两药单用比较,能更好的抑制人胃癌MGC-803细胞增殖、抑制细胞克隆形成、促进细胞凋亡、阻滞细胞期于G0/G1期,并抑制细胞迁移。
- 韦尉元吴琨王晓通肖强
- 关键词：MGC-803细胞
- Cdx2-RNA基因沉默转染胃癌MGC-803细胞对中药人参黄芪复方药物敏感性的影响被引量：6
- 2013年
- 目的观察携带人尾型同源盒转录因子2(Cdx2)基因沉默的重组慢病毒颗粒(Cdx2-RNAi-LV)转染人胃癌MGC-803细胞对中药人参黄芪复方药物敏感性的影响。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测Cdx2基因表达;MTT方法检测细胞的增殖抑制率;Giemsa染色检测细胞的克隆形成;流式细胞仪检测细胞的凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果含Cdx2基因沉默的重组慢病毒颗粒转染人胃癌MGC-803细胞有效沉默Cdx2基因表达;中药人参黄芪复方能抑制人胃癌MGC-803细胞生长、抑制细胞克隆形成、诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移;Cdx2基因沉默转染胃癌MGC-803细胞组应用中药人参黄芪复方,其细胞增殖抑制率、细胞凋亡率明显高于单用中药未转染组(P<0.05),其细胞克隆形成、细胞迁移面积均显著低于单用中药未转染组(P<0.05)。结论 Cdx2基因沉默转染人胃癌MGC-803细胞,可明显提高胃癌细胞对中药人参黄芪复方的敏感性。
- 韦尉元吴琨王晓通谢玉波肖强
- 关键词：CDX2胃癌
- RNA干扰鼠尾同源盒转录因子2基因沉默逆转人胃癌裸鼠耐药模型耐药性的研究被引量：1
- 2013年
- 多药耐药（MDR）的产生是胃癌化疗失败的主要原因，而特异性核转录凶子鼠尾同源盒转录因子2（Cdx2）的高表达可阻碍化疗药物甲氨碟呤（MTX）破坏细胞[1]，但Cdx2沉默在胃癌多药耐药中的作用尚不明确。本实验旨在观察RNA干扰介导Cdx2基因沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901／DDP裸鼠皮下移植瘤模型化疗敏感性的影响。
- 韦尉元孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：RNA干扰介导基因沉默人胃癌耐药模型裸鼠鼠尾
- 应用酵母双杂交系统筛选E2F1相互作用蛋白
- 2012年
- 目的:应用酵母双杂交系统从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选E2F1转录因子的相互作用蛋白。方法:以pGBKT7-E2F1为诱饵质粒筛选人正常胃黏膜细胞的cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆进行测序及同源性分析。结果:从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选得到20个阳性克隆,经测序和同源性分析,筛除假阳性克隆,最终得到18个不同的候选基因序列。其中,17个为可知基因序列,它们分别是:组织蛋白酶B、SIVA1、干扰素调节因子7、鸟苷酸激酶1、ATP酶抑制因子1、核糖体蛋白SA、纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA结合蛋白、精氨琥珀酸合酶1、卵泡抑素类似物3、金属硫蛋白2A、内质网钙结合蛋白1、WNT1可诱导信号通路蛋白2、CDC42效应蛋白1、可溶性半乳糖凝集素结合蛋白1、中胚层发育候选2、外切酶体成分7和含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白1,尚有一未知基因片段。结论:应用酵母双杂交系统成功筛选出18种E2F1相互作用蛋白,为进一步探讨E2F1影响胃癌细胞生物学行为的分子机制奠定了基础。
- 廉超王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交系统胃肿癌相互作用蛋白
