姜浩武
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Fcγ和Fcε受体在小鼠三叉神经节的表达被引量：2
- 2015年
- 目的检测正常小鼠三叉神经节(TG)是否表达免疫球蛋白G(Ig G)和免疫球蛋白E(Ig E)Fc段Fcγ受体和Fcε受体,及其在过敏小鼠TG中的变化。方法通过腹腔注射OVA和铝剂,建立小鼠过敏性结膜炎(ACJ)模型。ELISA检测血清总Ig E。用Western blot和免疫荧光检测Fcγ受体和Fcε受体的表达。结果小鼠TG表达Fcγ受体和Fcε受体。其中Ig G激活型高亲和力受体FcγRI和抑制型低亲和力受体FcγRⅡ只表达在小鼠TG神经元上,而Ig G激活型低亲和力受体FcγRⅢ表达在小鼠TG中的卫星胶质细胞上。Ig E激活型高亲和力受体FcεRⅠ表达在小鼠TG神经元上,而Ig E低亲和力受体FcεRⅡ同时表达在小鼠TG神经元和卫星胶质细胞上。与正常小鼠比较,ACJ小鼠的血清总Ig E水平升高,TG的FcεRⅠ和FcγRⅡ表达增加(P<0.05)。而ACJ小鼠的FcεRⅡ和FcγRI表达下降(P<0.05)。FcγRⅢ在正常和ACJ小鼠TG中的表达无显著差别。结论小鼠TG表达的Fcγ和Fcε受体可能参与ACJ及其他过敏性疾病的发生和发展。
- 刘帆李春艳徐鲁斌陈纳泽周末姜浩武马超
- 关键词：FCΓ受体免疫球蛋白E
- 重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达被引量：4
- 2013年
- 旨在通过构建EGFL6的真核表达载体,在HEK293T细胞中进行表达,并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基,探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后,瞬时转染HEK293T细胞进行表达,荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示,酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功;EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达;增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖,对肿瘤细胞的促增殖率分别达到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达,结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。
- 亢中奎张晋霞姜浩武王宏宋其芳黄建芳邓宁
- 关键词：肿瘤细胞
- 抗FGF2人鼠嵌合抗体在HEK293T细胞中的表达优化
- 2014年
- 目的:FGF2是肿瘤血管新生过程中最重要的因子之一,因此通过制备抗FGF2人鼠嵌合抗体中和其发挥作用,以达到抑制肿瘤生长的目的。方法:利用分泌抗FGF2抗体的杂交瘤细胞株IgG9B9和人B淋巴细胞,分别克隆抗体轻链可变区V L、重链可变区V H和人重链恒定区C H基因,从pComb3λ载体中扩增出人λ链恒定区C L基因,通过重叠PCR,将V L,V H和C L,C H片段分别连接形成嵌合抗体的轻链L和重链H,将L/H链以单独构建或串联于同一载体的方式,构建抗FGF2嵌合抗体表达载体,并通过调控元件WPRE优化载体、共转染促生长因子aFGF以及调整表达温度等方式提高嵌合抗体在真核细胞中的表达。结果:成功构建了优化表达载体PLexmWPRE、PLexm-aFGF;L、H链基因也成功构建,并以L、H或L-F2A-H(2A连接肽将L和H连接起来)的方式分别成功连接到PLexm,PLexm-WPRE载体中。转染细胞上清的ELISA鉴定结果表明,L/H链单独构建要比串联构建的方式具有更高的表达水平,WPRE能有效促进抗体的表达而aFGF并不能促进其表达,与31、37℃相比,33℃时抗体的表达量最高,同时嵌合抗体表现出了很好的结合活性及中和活性,竞争IC50=6.25μg/ml。通过亲和层析获得了高纯度的抗FGF2嵌合抗体。结论:在33℃下,人鼠嵌合抗体基因在WPRE存在下表达量最高,且与抗原FGF2有很好的结合活性及中和活性,为临床应用奠定了基础。
- 王金胜姜浩武张晋霞潘磊赵凤芝于云飞蔡亚雄邓宁
- 关键词：碱性成纤维生长因子嵌合抗体真核表达载体
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体抑制人肺癌细胞生长的作用研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用,Western blot分析其作用于肿瘤细胞的机制,Transwell检测其对肿瘤细胞迁移侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积及裸鼠体质量变化。免疫组化法检测肿瘤组织CD31和LYVE1的表达情况,初步探讨抗b FGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。结果成功纯化得到具有抗原结合活性的ds-Diabody。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌A549细胞株的增殖。Western blot结果表明ds-Diabody能有效阻断与b FGF相关的MAPK和Akt通路。Transwell结果表明ds-Diabody可以显著抑制A549细胞的迁移及侵袭。裸鼠体内试验中,ds-Diabody抗体显著地抑制了肿瘤的生长,抑制率为86.54%。免疫组化的结果显示ds-Diabody抗体处理组肿瘤组织中微血管密度和淋巴管密度均有下降。结论抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体可有效地抑制人肺癌A549细胞的生长。
- 蔡亚雄张晋霞姜浩武于云飞姚双娥邓宁
- 关键词：人肺癌细胞淋巴管新生
- MiR-146a高表达对神经胶质细胞BV2炎性反应的影响被引量：6
- 2016年
- 目的观察高表达MiR-146a对细菌脂多糖(LPS)诱导后神经胶质细胞BV2炎性反应的影响。方法采用LPS刺激接受MiR-146a模拟物转染后的BV2细胞,Real-time PCR检测MiR-146a转染效率,ELISA检测促炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达水平,Real-time PCR和Western blot法检测TLR4信号通路上肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)的表达水平。结果与正常组比较,采用50 nmol/L的转染浓度对BV2细胞进行MiR-146a模拟物转染,可明显增加细胞内MiR-146a含量(t=5.846,P=0.0021);LPS刺激导致BV2细胞激活,可明显增加细胞内IRAK1和TRAF6表达,也可明显诱发细胞分泌更多的IL-6和TNFα;而与单纯采用LPS刺激相比,用MiR-146a模拟物转染后再接受LPS刺激作用可明显降低IL-6(t=5.200,P=0.0003)和TNFα(t=9.812,P<0.0001)的表达水平,同时明显降低细胞内TRAF6分子在基因(t=5.353,P=0.0007)和蛋白(t=6.980,P=0.0009)水平的表达,而非IRAK1的表达。结论 MiR-146a可能是通过调控TLR4信号通路中TRAF6分子的表达,负反馈抑制BV2细胞的炎性反应。
- 赵娜申乐姜浩武马超黄宇光
- 关键词：MIR-146A小胶质细胞神经病理性疼痛促炎症因子
- 人源性抗bFGF单链抗体表达载体的构建与酵母表达被引量：3
- 2012年
- 为了提高人源性抗bFGF抗体的表达量,从噬菌体抗体库筛选出的人源性抗bFGF抗体基因中亚克隆单链抗体(single chain fragment variable,ScFv)基因,并将其构建到酵母表达载体pPICZαA中。表达载体质粒经线性化后,电转化法转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化,并检测其生物学活性。酶切鉴定结果显示人源性的酵母表达载体构建成功。SDS-PAGE和Western blot结果显示,抗bFGF单链抗体获得了高效表达,表达量可达124mg/L,目的蛋白大小为36 kDa左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的目的蛋白可与bFGF特异性结合。CCK8检测结果显示,纯化的抗bFGF单链抗体可剂量依赖性地抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖。研究结果表明在毕赤酵母中可获得人源性抗bFGF单链抗体高效表达,表达产物具有很好的生物学活性。
- 吕卫东杜超超王宏姜浩武劳学军宋其芳邓宁
- 关键词：BFGF单链抗体
- 抗FGF-2抗体Dab-2及其应用
- 本发明公开了一种抗FGF-2抗体Dab-2及其应用。该抗FGF-2抗体Dab-2的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码重链可变区的基因序列如SEQ ...
- 邓宁王宏姜浩武王盼盼宋其芳唐勇黄建芳
- 抗FGF-2抗体Dab-2及其应用
- 本发明公开了一种抗FGF-2抗体Dab-2及其应用。该抗FGF-2抗体Dab-2的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码重链可变区的基因序列如SEQ ...
- 邓宁王宏姜浩武王盼盼宋其芳唐勇黄建芳
- 文献传递
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。
- 张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁
- 关键词：肺癌细胞
