夏雪琴
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金自治区科技支疆项目计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 新疆双峰驼抗血清中重链抗体的分离鉴定被引量：7
- 2010年
- 【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表达,纯化获得重组抗原GST-SpaA-N,免疫双峰驼制备抗血清,经Protein A和Protein G亲和层析从抗血清中分离重链抗体及常规抗体,Western blotting鉴定重链抗体的抗原结合特性,间接ELISA比较重链抗体与传统抗体的抗原结合活性。【结果】经过Protein A/G纯化得到了IgG2。对各组分进行分析初步表明重链抗体约占血清IgG的60%—80%。采用GST-SpaA-N免疫双峰驼可以诱导高滴度的IgG2型重链抗体,在5次免疫后,骆驼抗spaA-N特异的重链抗体IgG2多抗血清的效价为1﹕51200。Western blotting结果显示分离的多克隆重链抗体可特异结合SpaA天然抗原,且ELISA分析结果表明重链抗体与常规抗体具有相同的抗原结合活性。【结论】首次从双峰驼抗血清中成功分离获得具有与常规抗体相同生物学功能的多克隆重链抗体,提示重链抗体可能在骆驼免疫防御中发挥重要作用。
- 夏丽洁苏幼红张清华夏雪琴刘红春李江伟
- 关键词：双峰驼
- 新疆双峰驼天然单域抗体库的构建及初步鉴定被引量：3
- 2011年
- 旨在构建新疆双峰驼天然单域抗体库,及从中快速筛选VHH抗体。采用两种不同的抗原(溶菌酶和cAb-HEWL23)用天然文库进行筛选,成功筛选到了相应的抗体,并以溶菌酶筛选的VHH抗体(A3-1,A4-1和A10-1)进行表达和初步的ELISA检测。结果显示,A3-1和A10-1具有结合溶菌酶的能力。该方法简单方便、省时省力,可以快速从天然单域抗体库中筛选VHH抗体。
- 张清华夏雪琴克力比努尔.热合曼李江伟
- 关键词：溶菌酶噬菌体展示单域抗体VHH
- 甜瓜SRAP-PCR程序和反应体系的优化被引量：3
- 2009年
- 以甜瓜品种炮台红和皇后为试验材料,对影响甜瓜SRAP-PCR反应体系的各因子进行了梯度试验,并对退火温度进行了探索,得到扩增多态性高、重复性好、带型清晰的SRAP-PCR反应程序和体系。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;94℃变性1 min,51℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸10 min;4℃保存。反应体系(共25μL):DNA 45 ng,Mg^2+2.0mmol/L,dNTPs0.15 mmoL/L,primer 0.24/μmol/L,Taq polymerase 1.5 U。结果表明,该程序和体系能够较好的满足甜瓜基因组SRAP扩增的要求。
- 陈芸王贤磊夏雪琴常菊芹李冠
- 关键词：甜瓜SRAP
- 抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2013年
- 目的获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体。方法使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体。ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性。结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分别在相对分子质量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的条带。ELISA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHH FSHR-06的抗原结合活性最高。结论从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体。
- 夏雪琴木亚沙尔·买买提拉洪翟田甜李江伟
- 关键词：卵泡刺激素受体双峰驼
- 假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2013年
- 目的克隆假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因并在原核表达系统中表达.方法根据GenBank上登录的假结核耶尔森菌侵袭素蛋白核酸序列设计引物,用PCR方法扩增假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因,并将其插入克隆载体pMD18-T中,测序鉴定正确后再将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-inv.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测.结果假结核耶尔森菌提取的基因组,经PCR扩增,得到一段591 bp的片段,与预期结果一致;SDS-PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约46 kDa,与预期结果相同;重组菌体超声裂解后,经12%的SDS-PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为包涵体蛋白.结论克隆的侵袭素基因核心片段可以在原核细胞中高效表达.
- 杨春静芦清霞克力比努尔·热合曼刘红春夏雪琴李江伟
- 关键词：假结核耶尔森菌克隆原核表达
- 假结核耶尔森菌侵染素蛋白作为DNA疫苗佐剂的免疫效果被引量：1
- 2012年
- 目的探讨假结核耶尔森菌侵染素(invasin)羧基端397个氨基酸(Inv397)对抗原免疫原性的影响,以评价其作为DNA疫苗佐剂的效果。方法利用PCR扩增Inv397编码基因(inv397),分别构建编码猪丹毒丝菌表面抗原氨基端蛋白(spaA-N)和Inv397蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-spaA-N,pcDNA3.1-spaA-N-inv397。同时构建重组载体pET-30a-inv397,并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析纯化重组Inv397蛋白。将纯化后重组Inv397蛋白与包含spaA-N的重组真核质粒滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体水平,细胞增殖实验分析T淋巴细胞增殖反应。结果 Inv397蛋白与spaA-N重组质粒滴鼻免疫组的血清spaA-N特异性IgG水平明显高于spaA-N其它对照组(P<0.01),且T细胞增殖水平也高于其他各组,但无显著差异。结论 Inv397蛋白具有一定程度的免疫增强作用,有可能成为一种新的DNA疫苗佐剂。
- 李江伟杨春静芦清霞克力比努尔.热合曼夏雪琴刘红春
- 关键词：假结核耶尔森菌DNA疫苗佐剂
- 卵泡刺激素及其受体与肿瘤的相关性被引量：1
- 2015年
- 卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)被认为只表达在人和哺乳动物的睾丸支持细胞和卵巢颗粒细胞中,在生殖中具有重要作用。最近研究发现,FSHR在多种肿瘤血管内皮细胞表面特异表达,这引起了研究者对该受体与肿瘤尤其是与肿瘤血管形成之间关系的关注。本文主要对FSH和FSHR信号通路及其病理意义和在肿瘤中的作用等方面的研究进展进行综述。
- 木亚沙尔·买买提拉洪夏雪琴郭骏李江伟
- 关键词：卵泡刺激素卵泡刺激素受体肿瘤血管形成
- 骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究
- 2012年
- 目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体。方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子。经测序后亚克隆至pET30a并在E.coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化。ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性。结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆。构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,Mr 29 000和23 000有特异性目的条带。ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性;VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性。Western blot显示,重组VHH在Mr 66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白。结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础。
- 芦清霞庆格乐图杨春静夏雪琴李江伟
- 关键词：单域抗体热稳定性
