周金宝
- 作品数：11 被引量：47H指数：4
- 供职机构：杭州九源基因工程有限公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 荷人膀胱癌原位移植瘤裸小鼠动物模型的建立被引量：6
- 2006年
- 目的建立模拟人的原位裸小鼠模型,评价抗人膀胱癌免疫毒素临床前的疗效。方法将体外培养的人移行细胞癌细胞系(BIU-87)原位移植于经酸处理的裸小鼠膀胱内,定期用核磁共振成像(MRI)检查,并进行解剖、组织学检查和免疫细胞化学的检测。结果在第7～36天内,成瘤率为92．9％(52／56);其中第12～13天处死的裸小鼠中,95．2％(40／42)发展成移行细胞癌,以浅表性为主。组织学检查证实为Ⅱ～Ⅲ级;免疫细胞化学证实,该模型具有BIU-87细胞的特征。在肿瘤的发生发展中,MRI检查的结果与组织学检查的结果密切相关。接种后第7～9天可以检测出原位癌(CIS),其后发展成乳头状瘤或浸润性疾病。结论模拟人的原位裸小鼠模型重复性好,是临床前研究膀胱灌注治疗的理想模型。
- 李翀颜汝平袁国红奉友刚王剑松高翔黄岩山周金宝谢蜀生
- 酶联免疫吸附试验法研究PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF在小鼠体内的药代动力学被引量：15
- 2007年
- 研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、聚乙二醇修饰的重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)与重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白(rHSA-hG-CSF)在小鼠体内的药代动力学,验证两种方法对rhG-CSF半衰期(T1/2)的影响。小鼠分别皮下给药rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF后,在不同时间点采血并分离血清,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清中rhG-CSF的浓度,用3P87药动学软件进行曲线拟合并计算参数。结果显示,rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF的半衰期(T1/2)分别为2.1,14.2和10.6h,后两者半衰期分别为rhG-CSF的7倍、5倍;PEG-rhG-CSF和rHSA-hG-CSF的达峰时间Tpeak分别为rhG-CSF的15倍、13倍。通过ELISA法检测比较rhG-CSF,PEG-rhG-CSF与rHSA-hG-CSF在小鼠体内的药代动力学,表明PEG修饰与白蛋白融合技术可以延长rhG-CSF的半衰期。
- 马国昌陈枢青朱振洪黄岩山潘会强周金宝
- 关键词：人粒细胞集落刺激因子白蛋白药代动力学ELISA
- pH对HSA-IFNα 2β稳定性的影响
- 2008年
- 目的考察不同pH值对一类新药HSA-IFNα 2β稳定性的影响。方法采用SDS-PAGE电泳法测定溶液中HSA-IFN α2β的纯度,研究了不同pH值对HSA-IFNα 2β稳定性作用。方法HSA-IFNα 2β在pH6.5(10mmol)的磷酸缓冲体系中相对最稳定。
- 林斌刘龙孝马国昌黄岩山周金宝
- 关键词：IFNPHHSA
- 养阴通脑颗粒中生物碱对大鼠脑缺血后脑组织内皮素-1基因表达的影响
- 本实验先后对养阴通脑颗粒的成分进行分离分析,并利用原位杂交法,选用脑缺血后脑皮层内皮素-1基因表达指标,观察了养阴通脑颗粒中生物碱对其干预作用.
- 万海同周金宝刘沐荣杜月光别晓东杨洁红孟祥磊余道军
- 关键词：养阴通脑颗粒生物碱基因表达
- 文献传递
- 层析法去除重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白的内毒素被引量：16
- 2008年
- 用柱层析方法在生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白过程中去除产品中的内毒素。所用柱层析组合为Blue-sepharose亲和柱层析、SOURCE 15 ISO疏水柱层析、Q Sepharose F.F.离子交换柱层析、Sephadex G25 Coarse凝胶过滤柱。采用鲎试剂法检测柱层析各阶段得到蛋白中的内毒素含量;并用RP-HPLC方法测定柱层析各阶段得到蛋白的纯度与浓度,求出每毫克蛋白的内毒素含量。结果为每步柱层析过程式均有去除内毒素的作用,最终所得蛋白的内毒素含量降为1 EU/mg,去除率达到99.9%。因而生产重组人血清白蛋白干扰素a2b融合蛋白所用分离纯化柱层析技术在纯化蛋白的同时能有效的去除产品中内毒素,所得产品内毒素的含量远低于药典对注射剂的内毒素含量要求。
- 徐向荣马国昌王昌梅单剑峰沈玲黄岩山周金宝
- 关键词：人血清白蛋白干扰素Α2B柱层析内毒素
- 毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法
- 本发明公开了一种毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法，该方法包括反相柱层析、疏水柱层析、凝胶柱层析顺序组合纯化，能够大规模制备得到高纯度的药用重组人白细胞介素11蛋白。
- 黄岩山马国昌杨志愉李辉孙汉栋徐飞虎周金宝
- 文献传递
- 依诺肝素钠的研制
- 周金宝陈巍金飞李辉钟英唐占青陈亚红孙汉栋
- 我公司采用自主创新的生产工艺研制开发依诺肝素。 依诺肝素生产工艺难度很大，尤其是裂解工艺和脱色工艺是生产的关键，例如由于依诺肝素是亲水性多糖，其生产工艺中的色素问题就是个技术难题。又如生产过程中的任何一个变化均会影响药...
- 关键词：
- 关键词：依诺肝素肝素钠
- 毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法
- 本发明公开了一种毕赤酵母表达重组人白介素11的生产方法，该方法包括反相柱层析、疏水柱层析、凝胶柱层析顺序组合纯化，能够大规模制备得到高纯度的药用重组人白细胞介素11蛋白。
- 黄岩山马国昌杨志愉李辉孙汉栋徐飞虎周金宝
- 重组血小板第4因子在甲醇酵母中的高效表达被引量：4
- 2001年
- 目的 利用甲醇酵母高效表达重组人血小板第 4因子 (rhPF4)。方法 用PCR方法扩增出血小板第 4因子 (PF4)的cDNA序列 ,插入到穿梭质粒pPIC9的MFα信号肽后 ,在醇氧化脱氢酶 1(AOX1)启动子的下游 ,得到重组质粒pPIC9 PF4。转化到甲醇酵母宿主菌GS115 ,经筛选得到PF4高表达菌株进行表达 ,并测定表达产物氨基酸序列和生物学功能。结果 rhPF4氨基酸序列与天然PF4相同 ,可中和肝素抗凝作用 ,并呈剂量相关。结论 rhPF4可在甲醇酵母中获得生产规模表达 。
- 王昌梅谢异泓王同映杨武剑李春澍周金宝
- 关键词：血小板第四因子酵母基因表达聚合酶
- 重组HSA-hG-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2006年
- 为了延长G-CSF半衰期，利用甲醇酵母表达重组人血清白蛋白融合的集落细胞刺激因子（rHSA-G-CSF）。用PCR方法从人胎肝cDNA文库扩增出HSA cDNA序列，hG—CSFcDNA序列从大肠表达载体中酶切获取。将HSA和hG—CSF两片段连接后，克隆到酵母分泌型表达载体pGENYK中，酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合。工程菌经发酵罐培养表达，层析法分离纯化融合蛋白。纯化的融合蛋白经Western印迹分析表明具有HSA和G—CSF的免疫原性，体外生物学活性分析表明，同等尔数的融合表达产物的活性为E．coli表达G—CSF单体的活性的50％以上。体内动物实验研究表明，经HSA融合的G．CSF的半衰期为G—CSF单体的15～20倍。甲醇酵母表达的融合HSA的G-CSF具有比G-CSF更长的半衰期，有良好的临床应用前景。
- 王昌梅王同映杨志愉单剑峰刘晓妮马国昌戎亚雯方井晋黄岩山周金宝
- 关键词：毕氏酵母
