刘素丽
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金比尔和梅琳达·盖茨基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的特性研究被引量：9
- 2013年
- 牛支原体(M.bovis)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白。
- 邹晓辉李媛汪洋宋志强孙文静周玉梅白帆吴金迪刘素丽辛九庆
- 关键词：牛支原体原核表达ELISA
- 牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究被引量：3
- 2015年
- 为研究牛支原体(M.bovis)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以M.bovis及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒p EGFP-p65转染EBL细胞,以LAMPs刺激EBL细胞,通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光定量PCR结果显示,M.bovis及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL-1β的表达;而且LAMPs作用的最佳剂量为2μg/m L,最佳时间为12 h。同时,激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内,从而激活NF-κB信号通路,诱导IL-1β上调表达。
- 刘素丽汪洋李媛周玉梅高利萍邵佳日王琪陈莹辛九庆
- 关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白IL-1ΒIL-1Β
- Mycoplasma mycoides subsp.mycoides Ben-1株一个新的膜蛋白的特性研究
- 2014年
- 为研究Mycoplasma mycoides subsp.mycoides(Mmm)Ben-1弱毒疫苗传代致弱的机制,本研究通过比较Mmm Ben-1株和其兔体内传代致弱毒株Ben-470的全基因组序列,发现在Ben-470株中缺失了一个编码165个氨基酸(分子量约19 ku)的495 bp的假定蛋白基因,命名为p588,扩增该基因,并表达重组P588(rP588)蛋白,制备兔抗血清。经细菌膜蛋白不同组份的提取及western blot鉴定,结果显示P588是一种膜蛋白,并且rP588与CBPP国际标准血清呈阳性反应。通过激光共聚焦显微镜观察到rP588对牛肺细胞(EBL)具有明显的粘附作用,并且ELISA试验也证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附。上述结果表明P588蛋白是Mmm Ben-1的一个粘附蛋白。
- 周玉梅汪洋李媛邹晓辉刘素丽白帆吴金迪辛九庆
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎粘附
- 牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的鉴定及特性研究被引量：4
- 2014年
- 牛支原体(M.bovis)在感染和致病过程中其粘附蛋白起到关键的作用。为鉴定M.bovis膜表面粘附蛋白,本研究利用生物学软件对M.bovis全基因序列进行分析,预测其中一个891 bp的开放阅读框架编码一个约33 ku的具有粘附特征的假定蛋白,并将其命名为P33蛋白。我们通过PCR扩增该基因并进行原核表达,获得了重组目的蛋白(rP33)。Western blot鉴定结果显示,P33蛋白定位于M.bovis菌体表面;激光共聚焦检测表明,rP33具有吸附胎牛肺细胞(EBL)的能力,其吸附作用可以被抗rP33血清特异性抑制。而且,以rP33为包被抗原的ELISA对EBL细胞膜成份的检测能够被抗rP33血清抑制,并呈抗体浓度依赖关系。本研究结果表明P33是一个新发现的具有粘附作用的M.bovis膜表面相关蛋白。
- 吴金迪李媛白帆汪洋刘素丽周玉梅张秀英辛九庆
- 关键词：牛支原体原核表达粘附
- 山羊支原体山羊肺炎亚种黏附相关蛋白的特性被引量：2
- 2014年
- 为鉴定山羊支原体山羊肺炎亚种的黏附相关蛋白,通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因组编码的假定的膜蛋白基因(0297)进行扩增,并连接到pET-32a(+)载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,大小约为43ku,将该重组蛋白命名为P0297。用纯化的P0297免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。利用激光共聚焦显微镜观察到蓝色的细胞核周围有重组蛋白的绿色荧光存在,其外形与细胞膜的红色荧光基本重合,表明P0297对山羊气管上皮细胞有明显的黏附作用。夹心ELISA结果显示,重组蛋白P0297的黏附作用与蛋白浓度成正比,并且黏附作用可被多克隆抗体阻断,说明该重组蛋白的黏附为特异性黏附。上述结果表明,P0297蛋白是山羊支原体山羊肺炎亚种的一个黏附相关蛋白。
- 白帆李媛吴金迪汪洋刘素丽周玉梅赵权辛九庆
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种
- 鸡毒支原体S6株P25蛋白粘附特性的研究被引量：1
- 2016年
- 鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码225个氨基酸,分子量约25 ku,将其命名为P25)。通过MG膜蛋白组分的提取及western blot鉴定,结果显示P25分布在MG膜的表面。利用PCR扩增MG p25基因并通过定点突变将其序列中TGA终止密码子突变为TGG(编码色氨酸),通过原核表达其编码的重组P25蛋白(r P25),并以r P25作为免疫原免疫兔子制备高免血清。激光共聚焦显微镜观察显示r P25和MG均对鸡胚成纤维细胞系(DF-1)具有明显的粘附作用,而ELISA和流式细胞仪检测结果则表明r P25和MG对DF-1细胞的粘附为特异性粘附,其中r P25抗血清可以明显抑制r P25和MG对DF-1细胞的粘附作用,从而证明P25为MG的一个粘附相关蛋白。
- 高利萍李媛周长平刘素丽邵家日王琪陈莹王显兵辛九庆
- 关键词：鸡毒支原体激光共聚焦ELISA流式细胞仪
- 丝状支原体丝状亚种的脂质相关蛋白通过MAPK信号通路诱导EBL细胞分泌IL-1β的研究被引量：4
- 2016年
- 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是经典的细胞信号通路之一,主要包括JNK、P38、ERK 3条信号途径。为明确丝状支原体丝状亚种(Mmm)的脂质相关蛋白(LAMPs)是通过MAPK信号通路诱导胎牛肺细胞(EBL)IL-1β的分泌,本研究通过荧光定量PCR检测IL-1β的m RNA表达水平,结果显示LAMPs可以诱导EBL细胞分泌IL-1β,并确定Mmm的LAMPs刺激EBL细胞的最佳时间为6 h,最佳剂量为1μg/m L;将JNK、P38及ERK抑制剂分别加入培养的EBL细胞后,IL-1β的m RNA表达水平均受到显著抑制(p<0.05);将p CMV-HA-TLR2转染EBL细胞使其过表达和抗体封闭TLR2两种方式处理,并采用JNK、P38及ERK抑制剂分别处理EBL细胞,经检测过表达TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平上调,然而抗体封闭TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平下调,表明TLR2通过MAPK信号通路对IL-1β的分泌进行调控;采用牛IL-1β的ELISA试剂盒对细胞上清液中IL-1β浓度的检测结果显示,其与IL-1β的m RNA表达水平变化趋势一致。上述结果表明Mmm的LAMPs可以诱导EBL细胞,激活TLR2依赖的MAPK信号通路,从而引起IL-1β的分泌。
- 王琪汪洋李媛刘素丽邵家日陈莹高丽萍周长平李春艳辛九庆
- 关键词：MAPK信号通路IL-1Β
- 牛支原体脂质相关膜蛋白激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的研究被引量：2
- 2016年
- 为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原体LAMPs刺激EBL细胞诱导IL-1β表达中起重要作用。过表达TLR1、TLR2,LAMPs刺激EBL细胞,IL-1β的表达量增加。进一步研究表明,TLR接合体髓样化初级反应因子88(My D88)和IRAK4在LAMPs刺激IL-1β诱导中起重要作用。结果表明,牛支原体LAMPs刺激EBL由TLR2、TLR1、MyD88和IRAK4 MAPK信号通路细胞诱导IL-1β的表达。
- 邵家日王显兵汪洋李媛刘素丽王琪陈莹高丽萍周长平辛九庆
- 关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白MAPK信号通路
