李媛
- 作品数：102 被引量：507H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2022年
- 旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256000。IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。
- 曾金红徐青元沙玮萍吴爽李媛辛九庆王秀梅
- 关键词：单克隆抗体
- 丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建
- 2006年
- 根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppQ基因序列设计引物,从MmmSC HVRI X株中扩增出了LppQ N末端基因,并将其分别克隆到pUC18和pUC19上,利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG,经克隆与序列测定证实突变成功后,将已突变的LppQ N末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,成功地构建了LppQ N末端基因原核表达载体pET32a-LppQ,为其下一步体外表达奠定了基础。
- 高玉龙辛九庆李媛王砚范
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎脂蛋白定点突变
- 牛流行热病毒结构糖蛋白(G)基因的克隆及鉴定被引量：6
- 1999年
- 牛流行热是由病毒引起的牛和水牛的急性热性传染病。其G蛋白为81kDa的结构糖蛋白，它位于病毒表面并含有中和抗原位点，可使牛产生免疫保护。本研究利用RT-PCR法从牛流热病毒北京血毒JB76H总RNA中，扩增并克隆了其G蛋白基因（1.9Kb）。限制性内切酶酶切分析结果显示，与澳大利亚分离株BB7721差异较大。脱氧核糖核苷酸序列分析表明，该基因与澳大利亚分离株BB7721同源性高达91％。
- 金红李媛于康震严隽端刘宝全
- 关键词：牛流行热病毒RT-PCR核苷酸序列糖蛋白克隆
- 牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的特性研究被引量：9
- 2013年
- 牛支原体(M.bovis)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白。
- 邹晓辉李媛汪洋宋志强孙文静周玉梅白帆吴金迪刘素丽辛九庆
- 关键词：牛支原体原核表达ELISA
- 临床分离牛支原体的耐药性分析
- [目的]牛支原体(Mycoplasma bovis, M.bovis)是一种能引起牛支原体肺炎和乳房炎的病原菌.近年来,该病原菌在世界范围内呈快速传播态势[1].临床上对于牛支原体病的预防主要通过加强饲养管理,提高机体抵...
- 王秀梅辛九庆李媛
- 关键词：牛支原体耐药性CCU
- 鸡病毒性传染病的快速诊断和预防被引量：1
- 2001年
- 近年来 ,由于免疫失误和病毒变异 ,导致了一些病死鸡难以找到书中所介绍的典型症状和病灶 ,给诊断工作造成了很大的困难。利用血凝抑制试验 (HI)和琼脂扩散试验 (AGP)检查死鸡体内的抗原 ,对新城疫、禽流感、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡痘、马立克氏病、传染性法氏囊炎、产蛋下降综合症、禽脑脊髓炎和病毒性关节炎等病 ,可以在数小时至 2 4小时内确诊疫情。传染病的发生常是先由个别或少数鸡开始发病或死亡 ,若能对此及时快速确诊 ,立即接种疫苗和采取防制措施 ,则可阻断传染病的扩散 ,将传染病扑灭于萌芽开始阶段 ,将会减少因疫病扩散而造成的重大经济损失。查抗原的方法简单易行 。
- 李维义李媛金红于康震
- 关键词：病毒性疾病传染病
- 丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ基因的序列分析被引量：2
- 2003年
- 根据基因库发表的丝状霉形体丝状亚种SC型 (MmmSC)脂蛋白LppQ基因序列设计引物 ,采用PCR对国内MmmSC分离株HVRI X株的脂蛋白LppQ基因进行扩增 ,将扩增产物与pMD18 T载体连接并测序。核苷酸序列比较结果显示 ,HVRI X株的LppQ基因序列与基因库发表的核苷酸序列同源性为 99.8% ;由其推导的氨基酸序列同源性为 99.3%。
- 高玉龙李媛王砚范辛九庆
- 关键词：PCR传染性胸膜肺炎
- 猪肺炎支原体P97 C末端蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析被引量：4
- 2010年
- 以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最小抗原决定区域,并通过生长抑制试验及抗黏附特性试验对抗原表位进行了分析。结果显示,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株A3C9和B4D5,并成功鉴定出P97C末端蛋白的2个独立线性表位F905PMAFSY911和G991TPNQGKKAE1000。2株单抗对猪肺炎支原体的生长均有一定的抑制作用,但对其黏附特性没有显著抑制作用。
- 张美晶王亮李媛董慧姜海芳陈超曹培丽郭丹辛九庆
- 关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体抗原表位
- 牛流行热病毒G蛋白基因RT-PCR最适条件的确立被引量：2
- 1999年
- 牛流行热是一种由病毒引起的急性热性传染病。本病的特征是突然高热、呼吸迫促、消化机能障碍、全身虚弱、步态僵硬、跛行等。本病虽然致死率不高，但传播迅速，使乳牛产奶量和奶的品质下降，使耕牛役用能力降低或丧失，部分怀孕母牛流产，给养牛业造成重大的经济损失。牛...
- 李媛金红韩毅冰于康震
- 关键词：流行热病毒
- 应用重组抗原建立检测牛传染性胸膜肺炎的间接ELISA方法被引量：7
- 2006年
- 目的丝状支原体丝状亚种SC(MycoplasmamycoidessubspmycoidesSC,MmmSC)是引起牛传染性胸膜肺炎(contagiousbovinepleuropneumonia,CBPP)的病原体。成熟的脂蛋白LppQN端是亲水性的,在自然感染和人工感染时,特异性免疫反应产生早,持续时间长,抗体滴度高,因此有理由相信脂蛋白LppQN端片段将有可能成为一种理想的CBPP诊断抗原。方法由于TGA密码子在支原体中编码色氨酸(Trp),而在细菌中则为终止密码子,故利用一步重叠延伸PCR突变方法体外诱变中国生产抗原用毒株HVRIⅩ的lppQ基因进行原核表达,利用重组抗原建立间接ELISA方法。结果序列分析表明,将lppQ基因第198位的A成功突变为G,并将突变后的脂蛋白LppQN端基因片段插入原核表达载体pET32a的多克隆位点,构建了原核表达载体。重组菌经诱导后,表达出了分子量约为42kD、带有6个组氨酸标签的重组融合蛋白,纯化后蛋白质纯度高达95%,Westernblot结果显示,重组蛋白具有很好的免疫活性。将纯化的蛋白质稀释至0.35μg·ml-1,包被酶标反应板,优化反应条件,P/N为4.8(0.934/0.193)。应用TG-ROC统计软件分析确定阴阳性血清临界OD值为0.376,敏感性为95.8%(46/48),特异性为98.9%(161/163)。应用间接ELISA和补体结合试验(CFT)对来自3个省自治区3817头份牛血清进行了检测。结论Kappa值为0.63,两种方法存在中、高度一致性。
- 辛九庆高玉龙李媛王砚范钱爱东
- 关键词：牛传染性胸膜肺炎突变ELISA
