刘亮明
- 作品数：80 被引量：254H指数：10
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市松江区科技攻关项目广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早期百草枯中毒大鼠的急性肝损伤研究被引量：11
- 2014年
- 目的 探讨百草枯中毒大鼠肝细胞凋亡、炎症因子表达情况及其发生机制.方法 按随机数字表法将40只Wistar大鼠分为对照组（n=8）与模型组（n=32）.模型组腹腔注射20％百草枯浓缩液30 mg/kg;对照组则给予等量生理盐水.制模后0.5、1、3、7d分别处死8只大鼠,收集下腔静脉血及肝组织,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-1β、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和p53的mRNA表达;采用底物显色法检测3d时肝组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase-3、-8、-9、-12）的活性;经苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肝组织病理学改变.结果 模型组肝组织出现碎片状坏死、毛细血管扩张、炎性细胞广泛浸润等现象,且随时间延长明显加重.模型组0.5 d时血清IL-1β、TNF-α水平即明显高于对照组[IL-1β（ng/L）：220.13±69.74比0.14±0.03,TNF-α（ng/L）：102.66±26.43比0.16±0.02,P＜0.01和P＜0.05],分别于3d、1d时达高峰[IL-1β：（423.72±153.11） ng/L,TNF-α：（690.35±229.64） ng/L],随后均逐渐降低,7d时仍明显高于对照组[IL-1β：（357.47±87.28） ng/L,TNF-α：（12.39±5.06） ng/L,均P＜ 0.05].模型组肝组织IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达均较对照组明显升高,其峰值分别出现在1d、1d、3d时[IL-1β mRNA（灰度值）：1.569±0.057比0.123±0.016,TNF-α mRNA（灰度值）：0.683±0.077比0.261±0.025,iNOS mRNA（灰度值）：3.259±0.135比0.002±0.001,P＜0.05或P＜0.01].模型组早期p53 mRNA表达与对照组无差异,均为低表达,染毒7d时p53 mRNA表达显著增高（灰度值：2.959±0.086比0.263±0.032,P＜0.01）.模型组3d时肝组织caspase活性（pmol/mg）显著高于对照组（caspase-3：857.25±309.26比169.73±48.21,caspase-8：199.18±61.41比32.26±11.09,caspase-9：321.62±80.73比90.38±29.76,caspase-12：41
- 郭宏兴高珂罗亮邓庆文张艳平罗杰刘亮明
- 关键词：急性肝损伤天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶诱导型一氧化氮合酶
- IRF3基因干扰对LPS刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。
- 朱彤涂文娟谈志丽刘亮明
- 关键词：干扰素调节因子3基因干扰固有免疫
- 胸水中尾加压素Ⅱ检测在肿瘤性、结核性胸腔积液鉴别诊断中的应用被引量：4
- 2020年
- 目的观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)检测在肿瘤性胸腔积液(MPE)、结核性胸腔积液(TPE)鉴别诊断中的应用价值。方法收集80例胸腔积液患者,其中MPE 30例、TPE 50例;采用酶联免疫吸附法检测两种患者胸水中UⅡ,绘制ROC曲线分析UⅡ鉴别诊断两种疾病的最佳截点、灵敏度、特异度、阳性预测值、准确度。结果 MPE、TPE患者胸水中UⅡ水平分别为(24. 906±22. 427)、(8. 525±8. 214) ng/m L,两者比较,P <0. 05。鉴别诊断MPE和TPE的UⅡ最佳截点为12. 635 ng/m L,曲线下面积为0. 779(95%CI 0. 672~0. 886),灵敏度为63. 3%,特异度为86%,阳性预测值为70. 37%,阴性预测值为79. 24%,正确诊断MPE 19例,TPE 42例,准确度为76. 25%。结论MPE患者胸水中UⅡ水平高于TPE患者,检测胸水中UII指标有助于MPE和TPE的鉴别诊断。
- 谢平白茹陈彩萍何玉杨雪杨雪刘亮明
- 关键词：胸腔积液肿瘤性胸腔积液结核性胸腔积液
- UT受体拮抗剂urantide对急性肝功能衰竭小鼠肝组织NF-κB信号通路分子的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨urantide对急性肝功能衰竭(ALF)小鼠肝内NF-κB信号通路分子的影响。方法 24只雄性BALB/c小鼠被随机分为4组(6只/组),分别行urantide或0.9%氯化钠溶液尾静脉注射预处理。半小时后,以脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-GalN)或0.9%氯化钠溶液腹腔注射进行攻击。12h后采集肝组织标本,分别进行胞质蛋白和核蛋白抽提;蛋白质表达采用Western印迹方法;NF-κB与DNA的结合活性通过EMSA检测。结果胞质IκB-α蛋白水平在4组之间的差异无统计学意义(P>0.05),而p-IκB-α蛋白水平在模型组(urantide-,LPS/D-GalN+)和预处理模型组(urantide+,LPS/D-GalN+)较正常对照组(urantide-,LPS/D-GalN-)和预处理对照组(urantide+,LPS/D-GalN-)显著升高[(0.63±0.10)、(0.31±0.05)比(0.14±0.02)、(0.14±0.01),P<0.01],且在预处理模型组较模型组显著降低[(0.31±0.05)比(0.63±0.10),P<0.01];NF-κBp65蛋白水平在模型组和预处理模型组较正常对照组和预处理对照组显著升高[(1.11±0.32)、(0.69±0.14)比(0.10±0.03)、(0.13±0.01),P<0.01],而与模型组相比,预处理模型组p65蛋白水平降低[(0.69±0.14)比(1.11±0.32),P<0.05];NF-κB与DNA的结合活性在模型组和预处理模型组较正常对照和预处理对照组显著升高[(4.68±1.03)、(1.60±0.37)比(1.00±0.16)、(1.01±0.10),P<0.01],而与模型组相比,预处理模型组NF-κB的DNA结合活性则显著降低[(1.60±0.37)比(4.68±1.03),P<0.01]。结论 UT受体拮抗剂urantide可抑制LPS/D-GalN攻击诱导的NF-κB通路分子的表达和活性。
- 刘亮明叶长根梁冬雨于芳苹赵亮孙水林张吉翔
- 关键词：URANTIDENF-ΚBIΚB-Α小鼠
- IRF3 shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应被引量：1
- 2016年
- 目的重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响。方法采用酶切和连接方法构建p Adeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 sh RNA质粒;借助Ad MaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测。结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入p Adeno-U6-CMV-EGFP质粒AgeⅠ和Eco RⅠ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 m RNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响。结论成功构建并包装了IRF3 sh RNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 m RNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响。
- 涂文娟朱彤谈志丽刘亮明
- 关键词：干扰素调节因子3短发夹RNA腺病毒RAW264.7细胞
- 大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达被引量：10
- 2008年
- 目的探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制。方法56只大鼠分为0h对照组与1、2、4、6、24和48h脂多糖＋D-氨基半乳糖胺处理组。在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清，肝组织苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察；ELISA法检测血清细胞因子表达；反转录（RT）-PCR法检测TNF-α、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和p53基因表达；收集24h肝组织用底物显色法检测Caspase-3、8、9、12活性。组间比较用方差分析。结果经药物处理后，肝组织出现碎片状坏死、大量炎性细胞浸润等表现，从6h开始，24h和48h显著加重。血清TNF-α浓度在1h处理组为（727．8±261．3）ng／L，显著高于对照组及其他处理组（F=49．82，P〈0．01），2h处理组为（156．4±52．2）ng／L，显著低于1h组，但高于对照组（F=30．23，P〈0．01）；血清IL-1β浓度逐渐上升，24h处理组最高，为（360．5±121．6）ng／L（F=18．61，P〈0．01）。24h处理组肝组织Caspase-3、8、9、12活性明显高于对照组（F=84．96，P〈0．01）。iNOS基因在对照组无表达，药物作用后6h达最高，24h和48h则显著下降（F=34．07，P〈0．01）；p53基因在24h和48h处理组表达明显增高（F=37．43，P〈0．01）；TNF-α和IL-1β基因表达均较对照组升高（F=2．94，P〈0．05），其峰值均出现在1h处理组。结论小剂量脂多糖可诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝损伤；Caspase-3、8、9、12活性明显增强是其特征性改变之一；肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高水平表达有密切关系。
- 郭宏兴刘亮明张吉翔罗杰徐江晶陈建勇熊高飞
- 关键词：内毒素类白细胞介素1
- 羧酸酯酶1及其在肝脏代谢性疾病中的作用
- 2020年
- 羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)是丝氨酸水解酶多基因超家族的一员,在肝脏内高度表达。CES1参与了肝内许多物质代谢反应,如参与内源性物质包括胆固醇酯、甘油三酯等的水解反应,催化水解多种外源性物质诸如某些临床药物和环境毒素,并在机体的防御体系中有重要作用。近年研究提示CES1还与许多肝脏疾病相关,包括酒精性肝损伤、非酒精性肝脂肪变性及肝癌等。
- 杨雪刘亮明
- 关键词：酒精性肝损伤脂代谢药物代谢
- 干扰素调节因子3在感染性疾病固有免疫机制中的研究进展
- 2015年
- 固有免疫系统是机体天然的免疫防御系统，是抵抗病原微生物感染的第一道防线。固有免疫功能发挥的一个重要机制在于固有免疫细胞模式识别受体（pattern recognition receptors,
- 朱彤刘亮明涂文娟谈志丽
- 关键词：干扰素调节因子3感染性疾病免疫机制模式识别受体免疫系统
- 浅谈自噬对急性肝衰竭的保护作用及其机制被引量：1
- 2018年
- 自噬是真核细胞内广泛存在的一种依赖溶酶体对物质进行降解的过程，能维持细胞内稳态，对抗细胞损伤。自噬在急性肝衰竭发生发展中有重要保护作用，其机制涉及到肝组织氧化应激和内质网应激减轻、固有免疫炎性反应受抑和肝凋亡与肝再生平衡打破等。
- 钟欢何玉谈志丽刘亮明
- 关键词：急性肝衰竭自噬内质网应激炎症肝再生
- RIPK3在LPS/D-GalN诱导急性肝衰竭中的作用研究
- 2024年
- 目的研究受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinases 3,RIPK3)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)中的作用。方法体内实验使用SPF级雄性BALB/c小鼠15只,随机分为对照组(Control),模型组(LPS/D-GalN),抑制剂预处理组(GSK872+LPS/D-GalN),每组5只。ALF动物模型采用LPS联合D-GalN腹腔注射的方式制备。药物腹腔注射前1 h,分别以0.1%DMSO和RIPK3特异性拮抗剂GSK872(溶于0.1%DMSO)尾静脉注射进行预处理。肝损伤程度采用血生化检测和肝脏组织学变化来评估;基因mRNA表达采用PCR检测,蛋白表达采用蛋白质印迹和免疫组化分析。结果动物实验结果显示,与正常对照组(Control)相比,模型组(LPS/D-GalN)小鼠肝组织见显著炎症出血坏死性损伤,肝内F4/80+细胞浸润增多,血清ALT和AST水平明显升高(P_(均)<0.01)。同时,肝组织F4/80、Mcp-1、Tnf-α、Il-6、Ripk3和Mlkl mRNA,以及RIPK3蛋白和p-MLKL/MLKL蛋白比值均上调,差异均存在统计学意义(P_(均)<0.05)。与模型组相比,预处理组(GSK872+LPS/D-GalN)小鼠肝脏炎症损伤程度明显减轻,肝内F4/80+细胞浸润明显减少,且血清ALT和AST水平显著下降(P_(均)<0.01)。肝组织F4/80、Mcp-1、Tnf-α、Il-6、Ripk3和Mlkl mRNA,以及RIPK3蛋白和p-MLKL/MLKL蛋白比值下调,差异均有统计学意义(P_(均)<0.05)。结论在LPS/D-GalN联合诱导的小鼠急性肝衰竭模型中,RIPK3抑制剂的应用可能直接通过靶向肝细胞,减少肝细胞的坏死性凋亡,从而减少巨噬细胞浸润,最终改善肝脏炎症状态。这提示RIPK3可能通过对肝细胞坏死性凋亡通路分子的影响促进ALF的发生和发展。
- 于倩边姝张钰婷赵赛刘亮明
- 关键词：急性肝衰竭肝细胞
