何川
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 黄孢原毛平革菌乙醇脱氢酶基因的克隆和表达被引量：2
- 2009年
- 乙醇是黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)在限氧培养条件下重要的代谢物之一,为了更好的理解P.chrysosporium在低氧条件下的代谢机制,文章从P.chrysosporium中克隆到一个长1071 bp的乙醇脱氢酶基因PCAdh1 cDNA,该基因编码一个由356个氨基酸组成的蛋白质,它与其他生物的乙醇脱氢酶的氨基酸序列的相似性很低,但酶催化活性位点序列却高度保守。将PCAdh1在大肠杆菌中表达,并获得有酶活性的重组蛋白。纯化的蛋白质用于制备抗体。半定量RT-PCR和Western blot分析结果显示,在限氧条件的培养过程中,PCAdh1基因在mRNA水平和蛋白水平上都保持相对稳定,表明该基因的表达是组成型的;但从菌丝体提取的粗蛋白中的乙醇脱氢酶活性却随着培养时间的增加及氧气含量的持续降低而逐渐升高,这暗示P.chrysospo-rium中存在其他低氧诱导型乙醇脱氢酶基因的表达。
- 何川吴近名张希根吴波张义正
- 关键词：黄孢原毛平革菌乙醇脱氢酶基因克隆基因表达RT-PCR蛋白质印迹
- 粗毛栓菌cDNA文库的构建和漆酶基因的表达分析被引量：3
- 2009年
- 粗毛栓菌(Trametesgallica)能够分泌多种胞外氧化酶并且快速降解木质纤维素.为了快速高效分离鉴定粗毛栓菌木质纤维素降解酶相关基因,用Trizol试剂提取不同培养条件下粗毛栓菌总RNA,用CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit和Advantage 2PCR Kit成功构建了该菌全长cDNA文库.原始文库滴度为1.5×105cfu,重组率达99%,插入片段在0.7～2.0kb之间,平均大小约1kb.随机取16个重组子进行测序,全长cDNA序列完整性率为85.7%;并筛选到1个漆酶基因,编码区长1551bp,预测的蛋白质由517个氨基酸残基组成,分子量为55.41kD,等电点为4.76.用半定量RT-PCR法分析了该漆酶基因在不同培养条件下的表达水平.结果显示,高浓度的碳源,氮源,Cu2+均能诱导此基因的表达,该结果为漆酶基因的表达调控机制的深入研究奠定了基础.
- 张希根何川张义正
- 关键词：粗毛栓菌CDNA文库漆酶基因表达
- 不依赖基因序列和连接反应克隆(SLIC)方法的改进被引量：6
- 2010年
- SLIC(Sequence and Ligation Independent Cloning)是一种不依赖于基因序列和连接反应的高效基因克隆新方法.为了进一步提高该方法的重组效率,将T4连接酶缓冲液改换成退火缓冲液,并使用相应的退火程序,可使重组效率提高至少10倍.此外,参加重组的若干DNA片段在同一反应体系中用T4 DNA聚合酶处理,再使用相同的方法退火,其重组效率仍然可以提高至少10倍.因此,利用本研究所建立的SLIC改进方法,不仅可以提高重组效率,而且还可以用于多DNA片段的高效重组,减少研究者的时间和节约实验成本.
- 王广珺何川张义正
- 关键词：SLICDNA重组
