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解脲脲原体四型MB抗原基因的克隆测序及其在大肠埃希菌中的表达被引量：2: 2003年; 李闻文贺辉肖建华万志刚曾桥余俊龙; 关键词：解脲脲原体测序大肠埃希菌基因扩增基因工程

日本血吸虫表达序列标签的获取和分析被引量：2: 2004年; 目的　运用表达序列标签 (expressedsequencetag,EST)技术 ,从日本血吸虫成虫cDNA文库中分离、鉴定和分析表达基因序列 ,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点。方法　构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行测序 ,将获取的EST登录GenBank ,并进行生物信息学分析。结果　随机挑取 382个阳性克隆进行测序 ,获得 1 49个EST(登录号分别为 :CA747382～CA747391 ,BU91 70 5 5～BU91 70 5 8,CA30 5 30 7～CA30 5 30 9,BU5 81 980 ,BU5 82 4 0 0～BU5 82 4 0 3,BU66690 6和CA9465 4 8～CA946666) ,同源性比较发现 ,部分序列与血吸虫的生活史的不同阶段和不同性别序列有一定的同源性。结论　EST技术有助于快速、经济地获取和研究日本血吸虫表达基因。; 曾桥肖建华万志刚张愉快刘传爱杨秋林; 关键词：CDNA文库表达序列标签

日本血吸虫核苷二磷酸激酶基因的获得和序列分析: 2004年; 目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中筛选日本血吸虫新基因 ,为日本血吸虫病的防治提供药物靶标或候选疫苗。方法　筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行DNA测序 ,再对新基因序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并利用生物信息学技术对其进行分析。结果　获得了 1个编码日本血吸虫核苷二磷酸激酶新基因的cDNA序列(AY2 2 6980 ) ,全长 5 94bp ,编码 1 5 7个氨基酸 ,编码蛋白与人类或鸽、鸡、鼠及果蝇的核苷二磷酸激酶高度同源。结论　利用表达序列标签法、步移法测序和生物信息学技术三者相结合 ,成功获得了编码日本血吸虫核苷二磷酸激酶基因的cDNA序列。; 张愉快肖建华梁瑜曾桥万志刚廖力; 关键词：日本血吸虫二磷酸核苷激酶 CDNA文库表达序列标签生物信息学

日本血吸虫大陆株泛蛋白缀合酶E(SjUCEE)基因的A-T克隆: 2004年; 目的　日本血吸虫中国大陆株泛蛋白缀合酶 E (ubiquitin- conjugating enzyme E ,Sj UCEE)的基因克隆和鉴定。方法　特定寡核苷酸引物 PCR扩增目的基因 ;应用分子克隆常规操作方法将扩增产物克隆至载体 pu Cm - T中。结果　 PCR特异性扩增出 Sj UCEE编码区基因序列 ,其片段大小为 75 7bp;经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的质粒 pu Cm - T/Sj UCEE中含有所扩增的基因序列。结论　 PCR扩增的 Sj U CEE抗原编码区基因序列与预期长度相符合 ,成功构建了含目的基因的原核质粒 pu Cm- T/Sj U; 廖力肖建华刘彦曾桥万志刚曾谷清; 关键词：日本血吸虫 PCR 基因克隆

日本血吸虫表达序列标签和新基因的获取和分析被引量：2: 2004年; 目的分离、鉴定和分析日本血吸虫表达基因序列,为日本血吸虫病提供侯选疫苗分子和药物靶点。方法筛选日本血吸虫成虫 cDNA 文库,对重组阳性克隆进行测序以获取的 EST;对可能成为新基金的克隆进行步移法测序获取全长 cDNA,并进行生物信息学分析。结果共获得149个 EST,分析发现某些 EST 与血吸虫的生活史的不同阶段和不同性别序列有一定的同源性。共获取18个日本血吸虫新基因,大部分为管家基因,其中部分基因可作为日本血吸虫的侯选疫苗分析和药物靶点。结论EST 技术可用于快速、经济地发现日本血吸虫成虫新基因。; 曾桥肖建华万志刚张愉快杨胜刘传爱杨秋林; 关键词：新基因表达序列标签成虫CDNA文库日本血吸虫病全长CDNA 阳性克隆

SARS病毒S蛋白部分片段B-细胞表位的多参数预测被引量：2: 2003年; 目的　预测SARS病毒S蛋白 (spikeglycoprotein)部分片段 (aaNo .40 0～ 60 0&aaNo .1 1 0 0～ 1 1 95 )的B -细胞表位。方法　应用多种参数和方法进行综合分析 ,包括跨膜分析、保守区分析、同源性比较、Hopp&Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β -转角、万氏法等综合预测方法。结果　显示B -细胞识别的表位可能在 436～ 45 6和 1 1 36～ 1 1 46残基或其附近 ,这两个被预测的表位均含有β-转角和不规则卷曲结构。结论　本研究为应用合成肽抗原制备抗SARS病毒S蛋白抗体、诊断非典型肺炎 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS); 曾桥万志刚肖建华吴移谋谭立志万艳平张文波杨秋林尹卫国刘双全胡四海

日本血吸虫7个基因全长cDNA的获取和分析: 2004年; 目的　从日本血吸虫成虫cDNA文库中分离、鉴定和分析全长cDNA序列 ,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点。方法　从构建日本血吸虫成虫cDNA文库中挑取重组阳性克隆进行 5’测序获取表达序列标签 (ExpressedSe quenceTag ,EST) ,在此基础上进行引物延伸法 (primerextension)测序 ,直至获取全长cDNA序列 ,将获取的基因登录Gen Bank ,并进行生物信息学分析。结果　获得 7个日本血吸虫全长cDNA序列 (GenBank登录号分别为AY336 4 93～AY336 4 99) ,其中 6个为日本血吸虫新基因 :类转录因子BTF3(similartotranscriptionfactorBTF3)、延长因子 1-α(elongationfactor 1-alpha ,EF1-α)、富含谷氨酰胺四联重复肽 (smallglutamine-richtetratricopeptide ,TRP)、鸟氨酸氨基转移酶 (ornithineaminotransferase,OA)、内皮差异相关因子 1(endothelialdifferentiation -relatedfactor 1,EDF - 1)和类基因转录增强因子 (similartotestisenhancedgenetranscriptprotein ,TEGT) ;另 1个是精氨酸酶 (arginase)基因 ,比原发现的基因序列长 4 5 6bp。生物信息学分析发现类基因转录增强因子为跨膜蛋白 ,具有 6个跨膜区 ;各基因与人、鼠、蟾和曼氏血吸虫等物种的基因有 37%～ 85 %的同源性 ;; 曾桥肖建华万志刚张愉快廖力刘传爱杨秋林; 关键词：日本血吸虫 CDNA文库基因生物信息学

日本血吸虫pcDNA3.1(-)/Sj20.8真核表达及其对小鼠保护性免疫作用被引量：1: 2006年; 为检测日本血吸虫新基因Sj20.8作为核酸疫苗能否诱导小鼠产生保护性免疫作用,用PCR法扩增Sj20.8基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1(-)/Sj20.8,肌肉注射免疫小鼠后检测发现,Sj20.8能在小鼠肌肉中短时间存在并有微弱表达,但未能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫。; 曾桥肖建华万志刚廖力张愉快刘传爱杨秋林; 关键词：日本血吸虫 CDNA文库

日本血吸虫BBC1基因的克隆、表达及鉴定被引量：1: 2005年; 目的克隆和表达日本血吸虫BBC1(SjBBC1)基因,为寻找新的抗日本血吸虫感染候选抗原分子提供实验基础。方法用PRIMER5.0引物设计软件自行设计引物,PCR扩增SjBBC1基因,将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白筛选、双酶切分析和PCR鉴定后,亚克隆入pQE30原核表达载体中。对原核表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果PCR扩增产物约为650bp,与预期大小相符。将该基因克隆入原核表达载体pQE30,表达蛋白分子质量单位约为23.6ku,并能被日本血吸虫感染兔血清识别。结论构建了pQE30/SjBBC1原核表达重组体载体,表达了具有抗原性的BBC1抗原。; 万志刚肖建华曾桥张愉快; 关键词：血吸虫基因克隆

日本血吸虫新基因BBC1的获得和分析: 2004年; 目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因 ,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点。方法　构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并进行生物信息学分析和登录。结果　获得了 1个日本血吸虫新基因 -BBC1基因 (AY2 2 0 747) ,长 62 3bp ,编码 1 84个氨基酸 ,其编码蛋白的理论分子量为 60 .8kDa ,等电点为 5 .1 3。结论　步移法测序和生物信息学技术相结合有利于发现日本血吸虫新基因。; 万志刚肖建华曾桥杨秋林张愉快杨胜; 关键词：日本血吸虫 CDNA文库生物信息学

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万志刚

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