魏佳军
- 作品数：30 被引量：158H指数：7
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市青年科技晨光计划更多>>
- 相关领域：医药卫生哲学宗教更多>>
- 小脑微量注射cdc2-siRNA对C型尼曼-匹克病小鼠共济运动的影响被引量：1
- 2017年
- 目的观察抑制cdc2基因的异常激活对C型尼曼-匹克病（Niemann-PickdiseasetypeC，NPC）小鼠共济运动的影响。方法包装携带ode2-siRNA的重组腺相关病毒（rAAV），将该病毒注射至2周龄npc-/-小鼠的小脑中，8周龄时采用足印实验、垂直屏实验检查小鼠的共济运动，并用HE染色及蛋白免疫印迹法分别检查小脑浦肯野细胞数量及微管相关蛋白Tau的磷酸化（由PHF-1抗体识别）情况。结果（1）足印实验显示cdc2-siRNAnpc组的步长[（4．92±0．31）cm]比空载体npe。组[（4．05±0．19）em]显著增加（P〈O．05）。（2）垂直屏实验显示cdc2-siRNAnpc。一组小鼠转头向r、爬至网屏上边缘的时间[（26．01±1．82）s、（50．93±1．98）s]分别比空载体npc组[（31．96±3．47）s、（56．89±2．97）S]明显缩短（均P〈0．05）。（3）cde2-siRNAnpe。一组小鼠小脑浦肯野细胞数目[（11．0±2．5）个]较空载体npc组[（5．1±2．2）个]显著增加（P〈0．05）。（4）cdc2-siRNAnpc。组小鼠cdc2及磷酸化Tau蛋白免疫反应条带相对灰度值（1．42±0．22、0．95±0．31）分别较空载体npc-/-组（2．11±0．29、2．61±0．62）明显降低（均P〈0．05）。结论抑制cdc2基因的异常激活可通过挽救浦肯野细胞的脱失和减轻小脑Tau蛋白的过度磷酸化以改善npe-/-小鼠的共济运动。
- 魏佳军曾非降风
- 关键词：浦肯野细胞
- 携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装
- 2009年
- 背景:细胞分裂周期2(cell division cycle2,cdc2)在神经变性疾病如阿尔茨海默病的神经元变性过程中扮演了重要角色。以腺相关病毒为载体对cdc2基因进行沉默,可能对神经变性疾病的神经元起保护作用。目的:包装携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)。设计、时间及地点:空白对照实验,于2007-10/2008-08在武汉同济医院神经科实验室完成。材料:HelperFree腺相关病毒系统(pAAV-MCS-EGFP、p-RC、p-Helper)及AAV-293细胞为Stratagene公司产品。方法:应用分子生物学方法构建生成pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP表达质粒;用磷酸钙法将该质粒和p-RC、p-Helper质粒共转染AAV-293细胞,包装生成携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)。病毒感染AAV-293细胞后行WesternBlot检测cdc2-siRNA对细胞内cdc2基因的沉默效果,并用斑点杂交方法测定该病毒的滴度。主要观察指标:pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP质粒中插入片段U6-cdc2-siRNA的测序;3质粒pAAV-MCS-U6-cdc2-siRNA-EGFP、p-RC、p-Helper共转染AAV-293细胞;rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP感染AAV-293细胞后cdc2的表达。结果:①DNA测序证明U6-cdc2-siRNA已成功构建到表达质粒pAAV-MCS-EGFP中。②AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白,共转染成功。③包装得到的重组腺相关病毒(rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP)感染AAV-293细胞后能显著下调AAV-293细胞cdc2基因的表达量。④rAAV-U6-cdc2-siRNA-EGFP的滴度为1x1012v.g/mL。结论:携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒的包装获得成功,它具有沉默cdc2基因表达的功能。
- 魏佳军王卓然
- 关键词：小干扰RNA重组腺相关病毒基因治疗
- 用于包装腺相关病毒293细胞的培养(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:腺相关病毒作为一种主要的基因工程载体,已被广泛应用。但腺相关病毒是缺陷性病毒,需要包装细胞提供E1蛋白。腺相关病毒293细胞作为重要的腺相关病毒特异性包装细胞,能反式产生E1,但腺相关病毒293细胞娇嫩,培养困难,生物学特性易发生改变。因此,有必要建立一种腺相关病毒293细胞的培养方案以满足基因工程的需要。目的:建立一种体外培养腺相关病毒293细胞的方法。设计:开放性实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科。材料:腺相关病毒293细胞株购于Stratagene公司。高糖型DMEM粉(Gibco公司),AAV Helper-Free系统三质粒(Stratagene公司)。方法:实验于2006-10/2007-04在武汉同济医院神经内科实验室完成。在体外将腺相关病毒293细胞复苏,用高糖型DMEM生长培养基培养,当细胞单层融合度达到50%时传代和冻存,并倒置显微镜下观察细胞的生长状态,记录生长曲线。荧光倒置显微镜下观察,根据腺相关病毒293细胞在共转染腺相关病毒系统三质粒后以及被腺相关病毒上清感染后能否激发出绿色荧光,鉴定其包装腺相关病毒的生物学特性。主要观察指标:①腺相关病毒293细胞形态学观察。②生长曲线。③腺相关病毒包装。结果:①倒置显微镜下显示,腺相关病毒293细胞贴壁生长良好,呈现不规则的多角形,胞浆透亮,胞核隐约可见。②生长曲线显示,细胞传代后第1天为生长适应期,2～5d为生长活跃期,6d后细胞进入生长平台期。③荧光倒置显微镜下观察到,腺相关病毒293细胞激发绿色荧光,共转染腺相关病毒系统三质粒成功。腺相关病毒293细胞被腺相关病毒上清感染后激发出绿色荧光,腺相关病毒包装成功。结论:本实验的培养方法简单有用,培养的腺相关病毒293细胞可保持良好的腺相关病毒包装功能。
- 魏佳军张苏明徐金枝
- 关键词：腺相关病毒细胞培养
- 重症肌无力的中西医结合治疗被引量：7
- 2008年
- 目的:观察中西医结合治疗重症肌无力(MG)的疗效。方法:确诊为MG的患者109例,分为对照组51例和中西组58例,在给予西药泼尼松及吡啶斯的明治疗的基础上,中西组同时增加中药复方扶正强筋片治疗。统计比较2组治疗后的总有效率、基本痊愈率、复发率及不良反应发生率。结果:治疗干预1年后,总有效率比较,2组差异无显著性意义,但痊愈及基本痊愈率比较,中西组明显高于对照组(P<0.05);复发率及不良反应发生率比较,中西组明显低于对照组(P<0.05)。结论:中西药联合应用治疗MG能明显提高痊愈及基本痊愈率,降低复发率及不良反应率,是一种较好的治疗措施。
- 魏佳军张旻杨明山卜碧涛张苏明徐金枝马丽丽张晓凡
- 关键词：中西医结合重症肌无力泼尼松
- 抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5表达对C型尼曼-皮克病小鼠的神经保护作用
- 2008年
- 目的:观察抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cdk5)的表达对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠(npc-/-)的治疗作用。方法:采用携带cdk5特异性小干扰RNA(cdk5-siRNA)的重组腺相关病毒rAAV-cdk5-siRNA-GFP,对出生三天内的npc-/-小鼠进行双侧侧脑室注射,以rAAV-GFP注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=6～10/组);采用免疫组织化学染色、HE染色和小鼠衣架悬挂试验来评价小鼠脑内的神经病理改变和运动功能。结果:rAAV2-cdk5-siR-NA-GFP能显著减少轴突球状体的数量,延缓浦肯野细胞的死亡并改善npc-/-小鼠的运动功能。结论:降低cdk5的活性对npc-/-小鼠的神经元有一定的保护作用。
- 郝又国张旻徐金枝李俐娟魏佳军王雪贞
- 关键词：C型尼曼-皮克病小分子干扰RNA重组腺相关病毒
- 颈性眩晕患者血浆内皮素和降钙素基因相关肽测定的临床意义被引量：44
- 2005年
- 目的 通过测定颈性眩晕患者血浆内皮素(endothelin,ET)、降钙素基因相关肽(calcitoningene relatedpeptide,CGRP)水平,探讨其临床意义。方法 用放射免疫法检测48例颈性眩晕患者血浆ET、CGRP含量,并与对照组比较。结果 颈性眩晕患者血浆ET含量为(92.30±28.90)pg/ml,ET/CGRP比值为2.81±0.45,均显著高于对照组(P<0.01),而血浆CGRP含量为(33.26±8.58)pg/ml,显著低于对照组,具有统计学差异(P<0.01)。结论 血浆ET、CGRP可能是颈性眩晕发病的重要物质基础,其两者失衡对颈性眩晕的发生发展起着重要作用。
- 魏佳军章军建肖劲松
- 关键词：颈性眩晕内皮素降钙素基因相关肽
- S100β与血管性认知损害的关系被引量：4
- 2005年
- 目的:探讨S100β与血管性认知损害(VCI)的关系。方法:①认知功能评价:运用简易智能状态量表(MMSE)及临床记忆量表(CMS)评估认知功能;②分组:轻度VCI组25例,中、重度VCI组33例;无认知损害脑梗死组30例及正常对照组30例;③用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者及对照组血清S100β含量。结果:中、重度VCI组的血清S100β浓度[(0.64±0.06)μg·L-1]显著性高于轻度VCI组[(0.42±0.08)μg·L-1]、无认知损害脑梗死组[(0.41±0.12)μg·L-1]及正常对照组[(0.39±0.11)μg·L-1],均具有显著性差异(P<0.05);轻度VCI组的血清S100β浓度稍高于无认知损害脑梗死组及正常对照组,但无显著性差异(P>0.05);相关性分析示中、重度VCI组MMSE总分及记忆商(MQ)值皆与血清S100β含量呈显著性负相关(P<0.05),而轻度VCI组MMSE及MQ值均与血清S100β含量无显著性相关(P>0.05)。结论:血清S100β有可能作为观察中、重度血管性认知(包括记忆)损害的生化指标。
- 魏佳军章军建李华钢
- 关键词：S100Β血清轻度负相关
- 血管性认知损害患者白质损伤与髓鞘碱性蛋白的关系被引量：7
- 2005年
- 魏佳军章军建熊丽周红伟万鸿平
- 关键词：血管性认知损害白质损伤髓鞘碱性蛋白
- 血管性认知损害与S100β和髓鞘碱性蛋白的关系被引量：9
- 2007年
- 目的探讨S100β和髓鞘碱性蛋白(MBP)与血管性认知损害(VCI)的关系。方法①分组:将67例VCI患者分为轻度VCI组,25例;中度VCI组,23例;重度VCI组,19例;对照组为正常健康者30名。②用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组对象血清的S100β蛋白和MBP含量。③认知功能评价:运用简易智能状态量表(MMSE)及临床记忆量表(CMS)评估认知功能。结果轻、中、重度VCI组的血清S100β浓度分别为(0.42±0.08)、(0.59±0.06)及(0.64±0.06)μg/L,对照组为(0.39±0.11)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,中、重度VCI组血清S100β含量与MMSE总分及记忆商值皆呈显著性负相关(r=-0.55,r=-0.57;r=-0.63,r=-0.65,),而轻度VCI组血清S100β含量与MMSE总分及记忆商值无显著相关性。轻、中、重度VCI组的血清MBP浓度为(3.94±0.68)、(3.44±0.76)及(5.21±0.96)μg/L,对照组为(1.75±0.47)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,重度VCI组血清MBP含量与MMSE总分及记忆商值均呈显著性负相关(r=-0.67,r=-0.61),轻、中度VCI组血清MBP含量与MMSE评分和记忆商值均呈显著性负相关(r=-0.62,r=-0.58;r=-0.63,r=-0.57)。结论血清S100β和MBP浓度有可能作为观察中、重度血管性认知(包括记忆和脱髓鞘变化)损害的生化指标。
- 文志华魏佳军袁先厚章军建
- 关键词：S100Β蛋白髓鞘碱性蛋白
- 经颅多普勒对椎-基底动脉延长扩张症患者椎-基底动脉血流动力学的分型分析被引量：7
- 2017年
- 目的:分析椎-基底动脉延长扩张症(VBD)患者椎-基底动脉的血流动力学特点。方法:应用经颅多普勒(TCD)检查47例VBD患者(VBD组)椎-基底动脉血流动力学指标,包括收缩期峰流速度(Vs)、舒张末期峰流速度(Vd)、平均血流速度(Vm)和搏动指数(PI),并根据PI值将VBD组患者分成3个亚组:高阻力型组(n=20)、正阻力型组(n=12)和低阻力型组(n=15)。分析各亚组基础疾病、大脑后动脉狭窄/扩张及后循环梗死发生率的差异。选择有头晕呕吐、行走不稳等椎-基底动脉系统症状但行头颈CT血管造影检查椎-基底动脉无异常的同期住院患者作为对照组(n=21)。结果:VBD患者椎-基底动脉Vs、Vd、Vm较对照组下降(P<0.01)。VBD三亚组间椎-基底动脉延长分呈高阻力型组>正阻力型组>低阻力型组,扩张分呈低阻力型组>正阻力型组>高阻力型组(均P<0.01),高阻力型组高血压病及高脂血症发生率高于正阻力型组及低阻力型组(P<0.05或P<0.01),而低阻力型组高血压病及高脂血症的发生率低于正阻力型组(P<0.05)。各亚组间糖尿病和高同型半胱氨酸(HCY)血症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。高阻力型组大脑后动脉狭窄及后循环梗死的发生率显著高于正阻力型组及低阻力型组(P<0.05)。低阻力型组大脑后动脉扩张的发生率高于正阻力型(P<0.05),而其后循环梗死的发生率显著低于正阻力型(P<0.05)。结论:VBD存在后循环血流动力学障碍,对其血流动力学进行分型分析有助于理解后循环梗死的发病机制及指导临床治疗实践。
- 魏佳军曾非毛善平张兆辉曾庆杏
- 关键词：椎-基底动脉延长扩张症经颅多普勒血流动力学
