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高惠宝: 作品数：31 被引量：100H指数：6; 供职机构：上海交通大学医学院更多>>; 发文基金：美国洛克菲勒基金国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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FasL启动子调控的报告基因表达质粒的构建及活性分析被引量：1: 2006年; 目的扩增FasL启动子并构建带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒,并评价在皮质酮(啮齿类动物体内的糖皮质激素)作用的睾丸Leydig细胞中,由FasL启动子调控的荧光素酶的表达活性。本研究将为进一步分析Leydig细胞中FasL启动子转录调控的作用机制奠定基础。方法采用DNA重组技术构建由FasL启动子调控的荧光素酶报告基因的表达质粒。此重组质粒经阳离子脂质体LipofectAMINE介导,瞬时转染入Leydig细胞中,36h后细胞经皮质酮处理,并于48h时收集细胞。测定荧光素酶的相对表达活性。结果(1)酶切及测序证实成功扩增FasL基因启动子并构建了带有FasL基因启动子的报告基因表达质粒；(2)皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子调控的荧光素酶表达质粒的表达活性显著增高。结论构建成功的带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒可准确地评价FasL启动子在凋亡过程中的作用。; 柴蔚然高惠宝; 关键词：报告基因 LEYDIG细胞皮质酮

Egr参与调控皮质酮处理的睾丸Leydig细胞中FasL启动子的活性: 2006年; 目的观察转录因子Egr(early growth response factor,早期生长反应因子)是否参与调控皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性。方法经RT-PCR检测皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的mRNA的水平,采用双荧光素酶报告基因系统评价Egr-2和Egr-3表达载体对Leydig细胞中FasL启动子活性的影响。结果Leydig细胞经皮质酮处理后,细胞内Egr-2及Egr-3在转录水平呈显著上调。双荧光素酶报告基因检测发现,Egr-2及Egr-3表达载体均可上调皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性,并以Egr-3的作用为显著。结论Egr-2及Egr-3参与调控皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性。; 冯星柴蔚然高惠宝; 关键词：EGR LEYDIG细胞皮质酮

人精液免疫抑制因子的固相酶联免疫测定法被引量：3: 1990年; 本工作首次建立了人精浆免疫抑制因子-DF_2的固相酶联免疫测定法,并用于测定正常人精浆DF_2的含量。结果表明,本法灵敏度1μg/ml,方法稳定,操作简便。53例正常中国人精浆DF_2平均含量为1.32±0.72mg/ml,为今后免疫不育及性传播性疾病研究提供了有价值的技术与基础数据。; 李伟毅高惠宝彭伟奏石晓王一飞; 关键词：免疫抑制因子

皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究被引量：4: 2005年; 目的我们新近的研究表明,超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)可通过激活caspase-3诱导大鼠Leydig细胞凋亡。本研究拟评价在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡过程中,caspase-3的激活是否有其上游的caspase-8和caspase-9的参与。方法采用荧光分光光度法检测经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-8活性,以DNA梯状电泳条带作为评价细胞凋亡的指标,观察caspase-8抑制剂是否能够抑制细胞凋亡,采用RT-PCR检测皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平。结果在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中出现caspase-8活性增高,以12h最为显著,升高的caspase-8的活性可被caspase-8抑制剂抑制,并导致Leydig细胞的凋亡过程被阻断。Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平在皮质酮作用下上升,同样以12h最为显著。结论皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡与caspase-8和caspase-9有关。; 王骞陈亮高惠宝; 关键词：皮质酮 LEYDIG细胞 CASPASE-8 CASPASE-9

活化T细胞核因子的研究进展被引量：4: 2006年; 活化T细胞核因子（nuclear factor of activated Tcells，NFAT）蛋白在许多免疫细胞中，如：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上均有表达，在机体免疫反应中对诱导细胞因子和其它基因的转录起着重要作用。在免疫系统外，如心肌、骨骼肌、睾丸和卵巢中也有广泛的分布，提示它在这些组织和细胞中也具有重要功能。NFAT蛋白的活性受钙调蛋白磷酸酯酶（calcineurin，; 柴蔚然高惠宝; 关键词：NFAT CAN T细胞核因子

皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程被引量：1: 2004年; 目的超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)能诱导大鼠Leydig细胞凋亡。但有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮是否经caspase-3激活的途径诱导大鼠Leydig细胞凋亡。方法采用WesternBlot方法检测不同时间点上经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-3酶原及裂解的caspase-3酶表达情况。运用荧光发光法检测不同时间点上经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-3酶活性。结果caspase-3酶原表达水平在皮质酮处理6h时开始上升,12h及24h时表达量下降,而具生物活性的、裂解的caspase-3酶于12h时开始出现,24h时的表达水平最为显著。caspase-3酶活性在皮质酮处理12h时明显升高,以24h时最为显著。Caspase-3抑制剂DEVD-CHO对经皮质酮处理12、24及48h的Leydig细胞中的caspase-3酶活性均具有明显的抑制作用,加caspase-3抑制剂的处理组其细胞基因组DNA电泳未见有凋亡特征性的梯状条带。结论皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程。; 游海燕高惠宝; 关键词：皮质酮 LEYDIG细胞

Ca^(2+)和CaN凋亡信号通路参与皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡中FasL的表达被引量：4: 2006年; 目的观察在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中,Ca2+和钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路是否参与FasL表达的调控。方法利用钙定性探针Fluo-3/AM检测皮质酮作用下的Leydig细胞中Ca2+浓度变化。通过酶底物法测定CaN活性。以Westernblot检测FasL表达。用Annexin-Ⅴ-FITC和PI双标评价Leydig细胞凋亡率。结果经超生理剂量皮质酮处理的Leydig细胞中出现Ca2+浓度升高,CaN活性增加及FasL表达增加。环孢菌素A可抑制CaN活性,使FasL表达下调,细胞凋亡率下降。结论Ca2+和CaN依赖的信号通路参与了皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡;CaN介导了由Ca2+引发的FasL表达,Ca2+和CaN在大鼠Leydig细胞凋亡过程中起重要作用。; 陈亮王骞高惠宝; 关键词：皮质酮 LEYDIG细胞凋亡

皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡中Egr的表达及其作用被引量：1: 2007年; 目的评价皮质酮是否通过活化钙调神经磷酸酶(CaN)来诱导Leydig细胞中转录因子Egr-2及Egr-3的表达及两种Egr对皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法检测CaN的抑制剂环孢菌素A(CsA)对经皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的mRNA表达水平;用Annexin-Ⅴ-FITC和PI双标法评价Egr-2和Egr-3的表达载体对Leydig细胞凋亡率的影响。结果皮质酮能诱导Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的表达,且该诱导作用可被CsA抑制;过量表达的Egr-2及Egr-3均可使经皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡率增加,并以Egr-3的作用较为显著。结论高浓度的皮质酮可通过活化CaN诱导Leydig细胞中Egr-2和Egr-3的表达,两种Egr对经皮质酮诱导的Leydig细胞的凋亡均具有促进作用。; 冯星高惠宝; 关键词：皮质酮莱迪希细胞细胞凋亡 EGR

有关睾丸中FASL的研究被引量：5: 2005年; FasL为Fas的天然配体,是一种诱导细胞凋亡的Ⅱ型跨膜蛋白,属TNF超家族,能特异性地与靶细胞膜上的Fas结合诱导细胞凋亡.; 冯星高惠宝; 关键词：FASL FAS 睾丸凋亡免疫豁免肿瘤

人精浆中与精子前向运动相关蛋白的研究——蛋白的分离及活性检测被引量：3: 2001年; 我们运用ConA包被珠的蛋白质亲和层析分离技术、蛋白质超滤技术对热处理后的人精浆进行蛋白分离、浓缩 ,结果发现 :蛋白亲和层析洗脱浓缩液加茶碱的实验组与公牛附睾头部的精子共同孵育后 ,经计算机辅助的精子分析技术显示精子的前向运动速度显著高于仅用茶碱的对照组 (P <0 .0 1)。蛋白亲和层析洗脱浓缩液经聚丙酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙酰胺凝胶电泳及Coomassieblue染色后显示 :蛋白条带由聚丙酰胺凝胶中的高分子量解离成SDS 聚丙酰胺凝胶中的低分子量 ,经SDS 聚丙酰胺凝胶电泳分离的主要蛋白其分子量分别为 46 .8和 5 7.5kDa。; 丁之德高惠宝吴明章张永莲; 关键词：附睾精子

高惠宝

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