马岩岩
- 作品数：11 被引量：22H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化被引量：2
- 2011年
- 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 张嘉萱卢嘉欣王蕊赵振岭韩波彭鑫磊陈伟刘忠任哲王绍祥马岩岩刘凯胜王一飞
- 关键词：克隆原核表达BL21
- 脐带间充质干细胞治疗大鼠骨质疏松的初步研究被引量：1
- 2013年
- 选取40只雌性SD大鼠,分为4组,每组10只。除正常组(A组)外,模型组(B组)、干细胞移植组(C组)和仙灵骨葆组(D组)均灌胃维甲酸70 mg/(kg·d),连续灌胃14 d,A组用等量无菌水灌胃。B组注射生理盐水,C组尾静脉注射2×106脐带间充质干细胞,D组灌胃20 mg/kg仙灵骨葆。给药21 d后,测量各组大鼠血清钙离子和磷含量的变化以及ALP和StrACP水平,剥离大鼠右侧股骨并称量,双能X线骨密度仪测量右侧股骨骨密度,左侧骨切片进行电镜观察结构。结果表明,维甲酸诱导的大鼠血清钙离子、磷含量及ALP活性比正常组显著升高,C组和D组治疗后比模型B组有所下降;B组StrACP活性较A组高,C组与A组无显著性差异。B组骨湿重比正常A组显著减少,C组和D组骨湿重与A组无显著性差异;造模后B组骨密度显著下降,给药后C组和D组骨密度与A组无显著性差异;B组骨胶原纤维排列杂乱无序,结构松散并呈丝状,C组与B组相比,骨胶原纤维排列呈束状,走向一致,排列规则、紧密,恢复到与A组骨胶原相近形态和排列。结果提示,注射脐带间充质干细胞对改善维甲酸诱导的大鼠骨质疏松有一定的治疗效果。
- 刘秋英利奕成何绍清罗振宇马岩岩林永亮罗勇钱垂文王一飞
- 关键词：脐带间充质干细胞骨质疏松细胞治疗维甲酸
- 人瘦素基因的原核表达载体构建及其蛋白结构分析被引量：3
- 2016年
- 目的克隆人源Leptin的成熟肽编码序列后基因并构建其原核重组表达菌株,对其产物进行纯化鉴定;生物信息学分析其蛋白质结构并预测功能。方法提取人脂肪干细胞中的总RNA,经RT-PCR反转录获得c DNA序列,PCR扩增Leptin基因并将其克隆入表达载体p ET-28a（＋）原核质粒,构建该基因的重组原核表达载体p ET-28a-Leptin。随后进行双酶切和测序鉴定。在E.coli BL21（DE3）中诱导表达目的蛋白,通过WB检测Leptin蛋白的表达;利用在线网络生物信息学相关数据库和分析软件对测序结果进行分析,并对重组蛋白结构及功能等进行验证和预测。结果 PCR扩增得到Leptin目标DNA片段;成功构建重组表达质粒p ET-28a-Leptin,经IPTG诱导表达后,目的蛋白在宿主E.coli BL21（DE3）中高效表达Leptin融合蛋白,相对分子质量18 000。生物信息学检索该基因编码蛋白的氨基酸序列与理化参数显示,蛋白无跨膜区,有6个Ser、1个Thr可能为蛋白激酶磷酸化位点,第1~21位可能为信号肽区域。在Leptin氨基酸序列中：α-螺旋93处,无规则卷曲43处,延伸链17处,β-转角14处,分别占总二级结构的55.69%、25.75%、10.18%和8.38%。结论成功克隆了人的Leptin基因。利用原核载体表达系统成功表达并进一步纯化的Leptin蛋白具有免疫原性。其生物信息学分析及结合蛋白质结构与功能预测结果可为深入研究Leptin蛋白的活性作用提供有益借鉴。
- 周朋君马岩岩王一飞陈宏远
- 关键词：LEPTIN基因分子克隆
- GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究被引量：2
- 2013年
- 食管癌在中国是高发性肿瘤,并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质,葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatedprotein,GRP78)作为分子伴侣,在蛋白质的折叠、组装、修饰和错误折叠蛋白的降解过程中发挥着重要作用。该研究通过构建pGRP78-EGFP-N1重组质粒,瞬时转染ECA-109细胞,研究GRP78过表达对细胞增殖能力的影响;采用RNA干扰技术,瞬时转染靶向GRP78的siRNA,研究敲低GRP78对细胞增殖能力的影响。该研究发现GRP78过表达后,更多的细胞从G1期进入S期和G2/M期,细胞增殖速率加快,细胞克隆形成率亦明显提高;敲低GRP78后,细胞更多地被阻滞在G1期而无法进入S期和G2/M期,细胞增殖速率减慢,细胞克隆形成率降低。GRP78可能通过调节细胞周期而促进ECA-109细胞的增殖。
- 丁伟超马岩岩邱贤秀王绍祥王莹任哲
- 关键词：GRP78过表达增殖ECA-109细胞
- GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究
- 食管癌在中国是高发性肿瘤,并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质,葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)作为分子...
- 丁伟超马岩岩邱贤秀王绍祥王莹任哲
- 关键词：GRP78过表达增殖ECA-109细胞
- 文献传递
- GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究
- 目的:研究过表达或低表达GRP78后对食管癌细胞增殖的影响。方法:构建GRP78过表达重组质粒,瞬时转染ECA-109细胞,研究过表达对细胞增殖能力的影响。采用RNA干扰技术,瞬时转染靶向GRP78的干扰RNA,研究低表...
- 丁伟超马岩岩邱贤秀郑楷任哲王一飞
- 关键词：GRP78过表达RNA干扰增殖
- 文献传递
- hSCGF-α穿膜肽的构建及其对hUCMSCs增殖作用的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF),研究其对人脐带间充质干细胞的增殖作用。方法:采用基因工程技术将hSCGF-α基因重组插入pET-28a(+)质粒DNA,构建TAT-SCGF-28a重组DNA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效表达,包涵体纯化后,通过实验比较hSCGF-α及hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF)对人脐带间充质干细胞的增殖刺激作用。结果与结论:成功构建TAT-SCGF-28a重组DNA;纯化的蛋白纯度达90%以上;TAT-SCGF较不具有穿膜功能的SCGF对人脐带间充质干细胞有更强的增殖效果。
- 彭鑫磊马岩岩荣靖任哲陈海佳王一飞
- 关键词：人脐带间充质干细胞穿膜肽包涵体
- 穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响
- 目的 :构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用。方法 :采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a...
- 马岩岩荣靖彭鑫磊刘秋英舒辉萍陈海佳王一飞任哲
- 关键词：穿膜肽克隆原核表达纯化
- 文献传递
- 人干细胞生长因子-α基因的克隆、表达及其协同rhGM-CSF对人脐带间充质干细胞的增殖作用被引量：2
- 2011年
- 为了研究hSCGF-α对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的作用,采用基因工程技术获得重组人干细胞生长因子-α(Recombinant human Stem Cell Growth Factor-α,rhSCGF-α)。针对SCGF基因的高GC含量,采用PCR两步法获得hSCGF-α基因,插入pET-28a(+)载体质粒,构建重组质粒pET-28a-SCGF-α,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株。低温20℃诱导24 h,目标重组蛋白人干细胞生长因子-α以可溶性表达为主。通过Ni2+-NTA柱纯化,获得目标重组蛋白,电泳谱带扫描分析蛋白纯度可达90%以上。以巨噬细胞/粒细胞(Granulocyte/macrophage,GM)集落形成实验鉴定重组蛋白的生物学活性,并协同重组人巨噬细胞/粒细胞集落刺激因子(Recombinant human GM-colony stimulating factor,rhGM-CSF)研究其对人脐带间充质干细胞的影响。结果显示,纯化的重组蛋白rhSCGF-α具有生物学活性;hSCGF-α及rhGM-CSF对hUCMSCs均有刺激增殖活性,但协同作用效果最强。
- 彭鑫磊马岩岩荣靖赵振岭韩波陈伟向阳飞刘秋英王一飞任哲周向荣陈海佳
- 关键词：干细胞生长因子人脐带间充质干细胞集落
- 三七皂甙成分对脂多糖诱导巨噬细胞炎性因子的影响及其机制的研究
- 目的： 系统研究三七总皂甙（Panax notoginseng，PNG）及其五个单体成分人参皂甙Rb1、Rg1、Rd、Re和三七皂甙R1的抗炎作用，并且对其抗炎作用进行比较，确定三七总皂甙中起抗炎作用的主要成分，并进一步...
- 马岩岩
- 关键词：三七皂甙抗炎作用MAPK通路NF-ΚB通路
- 文献传递
