荣靖
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人干细胞生长因子-α基因的克隆、表达及其协同rhGM-CSF对人脐带间充质干细胞的增殖作用被引量：2
- 2011年
- 为了研究hSCGF-α对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的作用,采用基因工程技术获得重组人干细胞生长因子-α(Recombinant human Stem Cell Growth Factor-α,rhSCGF-α)。针对SCGF基因的高GC含量,采用PCR两步法获得hSCGF-α基因,插入pET-28a(+)载体质粒,构建重组质粒pET-28a-SCGF-α,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株。低温20℃诱导24 h,目标重组蛋白人干细胞生长因子-α以可溶性表达为主。通过Ni2+-NTA柱纯化,获得目标重组蛋白,电泳谱带扫描分析蛋白纯度可达90%以上。以巨噬细胞/粒细胞(Granulocyte/macrophage,GM)集落形成实验鉴定重组蛋白的生物学活性,并协同重组人巨噬细胞/粒细胞集落刺激因子(Recombinant human GM-colony stimulating factor,rhGM-CSF)研究其对人脐带间充质干细胞的影响。结果显示,纯化的重组蛋白rhSCGF-α具有生物学活性;hSCGF-α及rhGM-CSF对hUCMSCs均有刺激增殖活性,但协同作用效果最强。
- 彭鑫磊马岩岩荣靖赵振岭韩波陈伟向阳飞刘秋英王一飞任哲周向荣陈海佳
- 关键词：干细胞生长因子人脐带间充质干细胞集落
- KGF-2和穿膜型KGF-2的构建、纯化及其对人脐带间充质干细胞增殖、分化的影响
- 目的：建立从人脐带中有效分离培养间充质干细胞(MSCs, mesenchymal stem cells),并能进行体外扩增传代的方法；同时构建并表达、纯化人角质细胞生长因子2 (keratinocyte growth f...
- 荣靖
- 关键词：人脐带间充质干细胞穿膜肽分化MAPK通路
- 文献传递
- hSCGF-α穿膜肽的构建及其对hUCMSCs增殖作用的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF),研究其对人脐带间充质干细胞的增殖作用。方法:采用基因工程技术将hSCGF-α基因重组插入pET-28a(+)质粒DNA,构建TAT-SCGF-28a重组DNA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效表达,包涵体纯化后,通过实验比较hSCGF-α及hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF)对人脐带间充质干细胞的增殖刺激作用。结果与结论:成功构建TAT-SCGF-28a重组DNA;纯化的蛋白纯度达90%以上;TAT-SCGF较不具有穿膜功能的SCGF对人脐带间充质干细胞有更强的增殖效果。
- 彭鑫磊马岩岩荣靖任哲陈海佳王一飞
- 关键词：人脐带间充质干细胞穿膜肽包涵体
- 穿膜肽KGF-2的构建及其对HaCaT增殖作用的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建穿膜肽KGF-2(TAT-KGF-2),研究其对人角质形成细胞HaCaT的增殖作用。方法:采用普通PCR技术和特殊引物从人胚胎肺成纤维细胞cDNA中扩增出目的基因TAT-KGF-2,并将其插入pET-28a(+)载体中构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒;将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白TAT-KGF-2;通过Ni-NTA柱纯化获得目标重组蛋白并利用Western blot进行鉴定;MTT法研究TAT-KGF-2对HaCa的增殖作用。结果:成功构建pET28a-TAT-KGF-2重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人KGF-2基因序列同源性达到100%;获得穿膜肽KGF-2蛋白,分子量约为19 kDa,纯度达到95%以上;TAT-KGF-2对HaCaT在12.5ng/ml时具有增殖作用,并呈浓度依赖性,而且与不具有穿膜功能的KGF-2相比有更强的增殖效果。结论:成功纯化出TAT-KGF-2蛋白,并验证其对HaCaT具有增殖作用,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
- 马岩岩荣靖彭鑫磊刘秋英舒辉萍陈海佳王一飞任哲
- 关键词：穿膜肽克隆原核表达纯化
