顾洪涛
- 作品数：19 被引量：51H指数：4
- 供职机构：河北医科大学口腔医学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省科技厅博士基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 人涎腺多形性腺瘤细胞体外培养及其生物学特性被引量：3
- 2003年
- 目的 建立人涎腺多形性腺瘤细胞系。方法 取自腮腺多形性腺瘤患者的原发肿瘤进行体外培养。对培养的细胞进行活细胞观察和组织学染色。观察细胞生长状况 ,绘制生长曲线。采用免疫细胞化学检测细胞内特异性抗原标记物对细胞进行鉴定 ,并对肿瘤的致瘤性进行裸鼠异种移植实验。结果 多形性腺瘤体外培养细胞呈多边形或梭形 ,有的细胞围成腺腔结构 ,胞浆内富含粘液 ,形成空泡。有的成片排列 ,细胞外有粘液样物质。细胞的生长曲线较平缓 ,无明显快速生长期。肿瘤性腺上皮细胞角蛋白阳性 ,肿瘤性肌上皮细胞肌动蛋白阳性。结论 建立的涎腺多形性腺瘤有限细胞系 (SPA - 0 2 ) ,保留了原代细胞的特点 。
- 张秀琴王洁李荷香顾洪涛王旭闫炳智
- 关键词：涎腺多形性腺瘤细胞体外培养生物学特性涎腺肿瘤组织化学染色免疫细胞化学
- P16蛋白在颊癌及癌前病变中的表达及临床意义被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨P16在口腔颊癌中的表达特点及其与临床病理和预后的关系。方法:采用免疫组化和图像分析技术,检测32例颊黏膜白斑和扁平苔藓,30例颊癌组织中P16蛋白的表达水平,并将结果与临床分期、转移等指标进行统计分析。结果:正常颊黏膜鳞状上皮和上皮单纯性增生中均有P16蛋白表达为100%(10/10,22/22);上皮异常增生中P16蛋白的表达率为90.0%(9/10);颊癌P16的表达率为40.0%(12/30),颊癌P16的表达率比上皮异常增生明显降低(P(0.01)。P16缺失表达的患者绝大多数处于临床Ⅲ、Ⅳ期(16/18)。临床Ⅲ、Ⅳ期病例P16蛋白表达水平比Ⅰ、Ⅱ期者明显降低(P(0.01);有颈淋巴结转移组P16蛋白阳性表达率低于无转移组(P(0.05)。结论:P16蛋白的表达与颊癌临床分期及颈淋巴结转移有关;P16蛋白缺失时,颊癌预后较差。P16可作为临床评估颊癌浸润、转移和预后的参考指标。
- 董玉英王洁董福生顾洪涛李荷香
- 关键词：颊黏膜癌前病变P16图像分析技术
- 短发夹状RNA沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨H—ras基因对涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）生物学特性的影响以及作为SACC基因治疗靶点的可行性。方法构建H—ras靶向H-ras—shRNA质粒及阴性对照HK-shRNA质粒，经脂质体介导转染SACC—M细胞，G418筛选建立稳定转染细胞株，将细胞分为H—ras-shRNA转染组、HK—shRNA转染组及未转染细胞组。绘制细胞生长曲线检测细胞体外增殖能力；反转录聚合酶链法分析各组细胞中H—ras基因mRNA表达变化；荧光蛋白定量分析H—ras蛋白表达水平；流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡情况；裸鼠成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力，分析H—ras沉默对细胞增殖及凋亡的影响。结果成功构建重组质粒并导入SACC—M细胞，建立稳定表达质粒的细胞株。H—ras—shRNA质粒能有效降低SACC—M细胞中H—ras表达，H—ras基因抑制率为61．80％，H—ras蛋白表达抑制率为62．76％。细胞增殖活性明显受抑，G0G1期比例增加；流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率为30．82％，显著高于阴性对照组及空白对照组的4．29％和4．16％。H—ras沉默细胞的裸鼠体内成瘤能力降低。结论H—ras靶向shRNA干扰质粒能持续有效的抑制SACC—M细胞中H—ras基因及蛋白水平的表达，降低细胞体内外的增殖活性，并能有效诱导细胞凋亡。
- 于利洁王洁董福生石宏李荷香顾洪涛
- 颊癌P16及P53蛋白表达与临床病理的相关研究被引量：6
- 2006年
- 目的探讨P16和P53在口腔颊癌中的表达特点及其与临床病理的关系。方法采用免疫组化和图像分析技术,检测32例颊粘膜白斑和扁平苔藓,30例颊癌和10例正常颊粘膜组织中P16和P53蛋白的表达水平。并将结果与病理分级、临床分期、癌转移等指标进行统计分析。结果正常颊粘膜、单纯性增生、不典型增生、颊癌中P16表达的阳性率分别为：100%、100%、90%、40%；P53表达的阳性率依次为：0、4．5%、25．5%、53．3%。颊癌P16的表达率比上皮不典型增生明显降低(P＜0．05)。颊癌P53的表达率比上皮单纯性增生明显升高(P＜0．05)。临床Ⅰ、Ⅱ期病例中P16蛋白表达水平高于Ⅲ、Ⅳ期的病例(P＜0．01)。无颈淋巴结转移病例中,P16蛋白表达水平高于有转移的病例(P＜0．05)。病理分级为Ⅰ级的病例,P53蛋白表达水平明显低于Ⅱ、Ⅲ级的病例(P＜0．01)。临床Ⅰ、Ⅱ期病例中,P53蛋白表达水平低于Ⅲ、Ⅳ期者(P＜0．05)。无颈淋巴结转移病例中,P53蛋白表达水平低于有转移的病例(P＜0．05)。P16阳性组中,P53的表达显著低于P16阴性组(P＜0．05)。结论颊癌早期P53蛋白有过度表达。P16低表达和P53高表达时提示颊癌预后较差。P16和P53蛋白的联合检测可作为临床评估颊癌浸润、转移和预后的参考指标。
- 董玉英王洁董福生王旭顾洪涛候亚丽
- 关键词：颊粘膜P16P53蛋白
- 重组人肿瘤坏死因子与维甲酸诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的实验研究被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨重组人肿瘤坏死因子α(recombinedhumantumornecrosisfactor -α,rhTNF -α)和全反式维甲酸 (all-transretinoicacid ,ATRA)对涎腺腺样囊性癌SACC细胞凋亡的诱导作用。方法 应用光镜、电镜观察凋亡细胞形态学的改变 ,采用流式细胞术检测用药后细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果 在采用rhTNF -α或ATRA诱导 72h后 ,光镜观察发现癌细胞胞核缩小 ,染色质呈新月状 ;电镜观察发现癌细胞胞核固缩 ,染色质边集 ,出现凋亡的形态学改变 ;流式细胞术检测发现 ,用药 2 4h后凋亡峰开始形成 ,72h后细胞凋亡率最高。结论 rhTNF
- 殷海珊王洁董福生顾洪涛李荷香焦建平
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子全反式维甲酸涎腺腺样囊性癌细胞凋亡流式细胞术
- TNF-α与IL-2诱导人多形性腺瘤细胞凋亡被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子 -α(tumornecrosisfactor-α,TNF -α)与白细胞介素Ⅱ (interleukin - 2 ,IL -2 )在体外对涎腺多形性腺瘤细胞凋亡的诱导作用。方法 取呈对数生长的第 12代人多形性腺瘤细胞 (SPA - 0 2 ) ,采用TNF -α与IL - 2单独或联合用药。应用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率及细胞周期分布情况 ,利用光镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果 流式细胞术检测发现 ,采用TNF -α 2 4h后凋亡峰开始形成 ,72h后细胞凋亡率最高。联合应用IL - 2较单独应用TNF -α凋亡率显著增高 ;光镜观察发现用药后大量多形性腺瘤细胞胞浆皱缩 ,胞核染色质固缩 ,呈大小不等的点状。结论 TNF -α可诱导体外涎腺多形性腺瘤细胞发生凋亡 ,IL - 2可增强TNF
- 陈玮王洁顾洪涛李荷香王旭
- 关键词：TNF-ΑIL-2瘤细胞凋亡肿瘤坏死因子-A
- 复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性被引量：2
- 2008年
- 目的建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤动物模型。方法将人复发性涎腺腺样囊性癌组织块,进行裸鼠皮下接种、传代,建立裸鼠移植瘤模型,并对其进行光镜、电镜、免疫组织化学及染色体分析。结果人复发性腺样囊性癌组织块移植于裸鼠后,获原代移植成功。2年期间移植瘤在裸鼠之间共连续传代4代,移植BALB/C裸鼠5只,平均潜伏期44.33天。经光镜、电镜、免疫组织化学观察发现移植瘤与其原发肿瘤结构特征一致。染色体检查为亚中着丝点染色体,符合人类体细胞核型。结论成功建立人复发性涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型并传代,移植瘤保留了原发肿瘤的组织学特征和染色体核型。
- 侯亚丽王洁张昊王旭李荷香顾洪涛
- 关键词：腺样囊性癌涎腺裸鼠复发
- 靶向抑制人木糖基转移酶-I基因的shRNA真核表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建靶向抑制人木糖基转移酶-Ⅰ(XT-Ⅰ)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,为探讨唾液腺肿瘤性肌上皮细胞合成及分泌蛋白多糖(PG)的研究奠定基础。方法根据GenBank提供的XT-Ⅰ基因序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链DNA片段,克隆到Pgenesil-1载体中,构建shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,行酶切及核酸测序鉴定;将构建的XT-Ⅰ特异性shRNA表达载体转染体外培养的人唾液腺腺样囊性癌细胞株ACC-M,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术检测转染效率,并采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞XT-Ⅰ基因mRNA和蛋白表达水平的变化。结果经酶切、连接后构建的6个质粒命名为WJ1、WJ2、WJ3、WJ4、WJ5、WJ6。酶切及核酸测序鉴定证实,构建的shRNA表达载体WJ1-WJ6序列正确;转染WJ1-WJ6后ACC-M细胞均可表达绿色荧光;流式细胞术测定转染效率平均为50.26%;RT-PCR结果显示,WJ3显著抑制XT-Ⅰ mRNA的表达,抑制率为72.39%;Western blot结果显示,WJ3有效抑制XT-Ⅰ的蛋白表达,抑制率为70.18%。结论成功构建靶向抑制XT-Ⅰ的shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,其中WJ3可高效抑制XT-Ⅰ基因mRNA及蛋白水平的表达,为唾液腺肿瘤中PG的RNAi研究奠定了基础。
- 石宏王洁王旭顾洪涛侯亚丽于利洁
- 关键词：唾液腺肿瘤肌上皮细胞蛋白多糖
- 肿瘤坏死因子-α诱导腺样囊性癌细胞凋亡中p53和bcl-2基因的表达被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子 (TumorNecrosisFactor -alpha ,TNF -α)诱导体外人涎腺腺样囊性癌(Salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)细胞凋亡过程中P5 3与bcl- 2蛋白的表达 ,以揭示TNF -α诱导的凋亡与癌基因表达间的相互关系。方法 SACC细胞于RPMI 16 40培养液 (含 10 %胎牛血清 )中 ,37 C恒温孵育。实验组用TNF -α处理 ;对照组只加入胎牛血清作为对照。实验组与对照组均分别于 2 4、48、72小时取出细胞爬片 ,免疫组化 (SP法 )检测P5 3与bcl- 2蛋白的表达情况。结果 经TNF -α处理的SACC细胞 2 4小时后 ,细胞出现胞体变小 ,胞核固缩的凋亡早期的形态学改变。P5 3和bcl - 2蛋白表达检测 ,经RelativeIdentifiedDistributionunit(RIDIT)分析表明 ,在 2 4、48、72小时 ,实验组P5 3蛋白的高染率分别为 5 %、2 5 %、5 5 % ,bcl- 2蛋白为 15 %、2 0 %、35 % ;在 48、72小时 ,实验组与对照组均存在显著性差异 (P <0 .0 1) ;且P5 3蛋白的高染率与相应时间段的细胞凋亡率有相关性 (P <0 .0 1) ,而bcl- 2蛋白的高染率与相应时间段的细胞凋亡率无相关关系 (P >0 .0 5 )。结论 在TNF -α诱导SACC细胞凋亡的早期阶段 ,P5 3及bcl- 2蛋白表达均增强。
- 孟雪梅王洁董福生焦建平顾洪涛
- 关键词：涎腺腺样囊性癌肿瘤坏死因子ΑP53BCL-2
- 裸鼠体内人腺样囊性癌细胞凋亡的研究被引量：6
- 2003年
- 目的 在人涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma,SACC)裸鼠移植瘤模型上 ,观察重组人肿瘤坏死因子α(recombinedhumantumornecrosisfactor α ,rhTNF α)诱导凋亡的形态学特征及bax、bcl 2蛋白的表达情况。方法 将 6× 10 10 /L的SACC细胞悬液接种于裸鼠皮下建立动物模型后 ,按rhTNF α 10 0× 10 4IU /kg或 10× 10 4IU /kg瘤体内直接注射给药。采用光镜、电镜、流式细胞术及原位凋亡试剂检测盒观察凋亡的形态学变化 ;采用免疫组织化学观察bax、bcl 2的表达情况。结果 移植瘤细胞凋亡率明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。凋亡细胞核消失后出现钙盐沉积 ,形成砂粒小体。凋亡细胞对bax、bcl 2蛋白的表达明显上升 (P <0 .0 5 )。结论 砂粒体钙化是TNF α诱导的SACC裸鼠移植瘤细胞凋亡的特征和归宿 ;TNF α诱导的细胞凋亡能够特异性增强bax、bcl
- 王洁董福生董青顾洪涛李荷香
- 关键词：裸鼠细胞凋亡肿瘤坏死因子Α癌细胞
