顾洪涛
- 作品数：30 被引量：151H指数：7
- 供职机构：山东省医学科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人肝癌Fas途径免疫逃逸机制及其反义基因治疗的研究
- 毛海婷刘倩李杰王义国张娇时昌文鹿伟李晓冰顾洪涛
- 该课题采用组织芯片、免疫组化及图像分析扫描技术反义寡脱氧核苷酸(ASODN)脂质体转染技术、流式细胞术、限制性片段长度多态性分析、RT-PCR法、混合淋巴细胞共培养法、激活性Fas单抗CH11诱导细胞凋亡等多种先进的技术...
- 关键词：
- 关键词：肝癌反义基因治疗生物治疗
- 中药淫羊藿苷抑制肝癌HepG2.2.15细胞增殖和免疫逃逸作用研究被引量：37
- 2007年
- 目的:观察中药淫羊藿苷(ICA)对HepG2.2.15细胞增殖及对CD3AK细胞杀伤活性的影响,探讨ICA对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用,为ICA的开发应用提供新的理论和实验依据。方法:MTT法检测细胞增殖和细胞杀伤活性;流式细胞术检测细胞表面分子表达水平和细胞凋亡率。结果:50μg/mlICA作用HepG2.2.15细胞48、72小时的增殖抑制作用明显,抑制率分别为22.04%、29.68%(P<0.05),呈时间依赖效应。HepG2.2.15细胞经ICA处理后,FasL的表达率由16.22%显著下降至8.29%,Fas表达率由0.79%提高到1.70%(P>0.05)。ICA可明显抑制HepG2.2.15细胞诱导Jurkat细胞凋亡,凋亡率从46.66%下降为18.20%。ICA处理HepG2.2.15细胞后,不同效靶比的CD3AK细胞的杀伤活性,可分别由对照组的15.81%、35.04%、42.85%显著提高至42.58%、67.55%、88.93%(P<0.05,P<0.01),呈效靶比依赖效应。结论:ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖,并有一定时间依赖效应;ICA可下调FasL的表达,上调细胞表面Fas的表达,对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用;ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。
- 王谦张玲毛海婷顾洪涛夏武青温培娥李翠玲杨尚军
- 关键词：HEPG2.2.15JURKAT细胞FAS/FASLCD3AK免疫逃逸
- CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用被引量：2
- 2006年
- 目的:观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MGC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bc l-2的表达水平,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法:RT-PCR法检测CD44、bc l-2 mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果:CD44反义寡核苷酸(1.6μmol/L)处理后,明显地抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达水平,在CD44配体低分子量透明质酸(HA)存在下,使MGC80-3表面下调的Fas分子显著增高,表达率从6.69%提高到16.81%(P<0.01)。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高,并呈效靶比依赖效应(P<0.01)。MGC80-3细胞bc l-2 mRNA的相对表达定量值由1.06降至0.32。结论:CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达,上调Fas分子的表达,下调凋亡抵抗基因bc l-2的表达,并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。
- 荆雪宁张玲王芸毛海婷温培娥顾洪涛崔树龄李登华
- 关键词：CD44反义基因BEL-2CD3AK
- 淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究被引量：11
- 2009年
- 目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。
- 唐菁张玲李翠玲顾洪涛杨尚军阴海鹏温培娥姜国胜
- 关键词：淫羊藿苷黄芩苷多柔比星人肝癌细胞APRIL
- 淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制被引量：34
- 2007年
- 目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法:肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BL/6小鼠,建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h,用高、中、低不同剂量(9、4.5、2.25mg/ml)的ICA和环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)(30mg/kg)进行局部注射治疗,待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右,各组小鼠称重,处死。留自凝血,取血清检测TNF-α;依次取脾脏及肿瘤组织称重;取1/2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液,剩余的用10%中性甲醛溶液固定,做病理切片和H-E染色以及TUNEL实验;脾单细胞悬液用流式细胞术(FACS)检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达;肿瘤单细胞悬液用AnnexinV/PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况,同时取适量的瘤细胞用70%乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果:Cy治疗组抑瘤率为67.16%,ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24.63%、32.84%、5.22%。AnnexinV/PI双染结果表明,Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为(9.11±1.584)%,ICA组为(7.14±1.376)%,荷瘤对照组为(3.6±2.38)%]。TUNEL结果显示,ICA治疗组凋亡指数为(5.35±0.73)%,显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[(1.03±1.17)%](P<0.01)。正常小鼠血清中未检测到TNF-α的存在,而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明,ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死,包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死,包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞(淋巴细胞与单核细胞)浸润。结论:ICA有显著的抑瘤作用,可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。
- 李翠玲张玲顾洪涛王军毛海婷杨尚军温培娥
- 关键词：淫羊藿苷抑瘤作用细胞凋亡细胞周期
- 肺癌细胞自分泌VEGF对mCRPs的调控及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人非小细胞肺癌A549细胞自分泌VEGF对膜结合补体调节蛋白(membrane-bounal complement regulatory proteins,mCRPs)的调控及其机制。方法:RT-PCR法检测CD46、CD55、CD59、VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1 CXCR2)mRNA在人非小细胞肺癌A549细胞的表达。MTT法检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞mCRPs表达水平的影响,Western blotting检测抗VEGF抗体对转录因子KLF2和磷酸化NF-κB p65蛋白表达的影响。结果:A549细胞表达膜结合型CD46、CD55和CD59 mRNA,亦表达VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1和CXCR2)mRNA。抗VEGF抗体明显抑制A549细胞的增殖(P<0.05)。终质量浓度0.1μg/ml抗VEGF抗体封闭72 h,CD55和CD59 mRNA表达下降,膜结合的CD55和CD59蛋白分子表达降低(均P<0.05);胞质和核KLF2蛋白相对定量值分别从0.63和0.88下降至0.42和0.66,胞质和胞核磷酸化NF-κB p65蛋白相对定量值分别从0.44和0.28下降至0.37和0.19。结论:A549细胞可能通过自分泌VEGF增加NF-κB p65和KLF2转录因子水平,从而上调CD55和CD59的表达。
- 赵勇张玲李翠玲阴海鹏顾洪涛温培娥
- 关键词：血管内皮细胞生长因子白细胞介素8NF-ΚB
- 海洋生物、中药提取成分对人肿瘤细胞增殖的影响
- 目的:本研究以人白血病细胞株HL-60;人肝癌细胞株BEL-7402、HepG2.2.15、HepG2人肺癌细胞株PG和15例难治性白血病患者骨髓细胞为研究模型,将多种海洋生物、中药提取成分作用于上述肿瘤细胞,采用细胞增...
- 张玲李翠玲顾洪涛阴海鹏温培娥
- 文献传递
- 抗人P185^(erbB2) scFv-Fc-IL-2调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞被引量：2
- 2006年
- 目的将抗人P185erbB2scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),通过体外实验阐明HFI调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞的抗肿瘤机制,为HFI临床应用提供实验依据。方法MTT法检测细胞增殖、杀伤活性;流式细胞术观察细胞表面分子的表达水平;生物活性法检测细胞膜相关TNF杀伤活性;RT-PCR检测细胞穿孔素表达水平。结果HFI处理后,未观察到对SKOV3细胞增殖活性的直接抑制作用;SKOV3细胞表面杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达率分别由24.85%、0.53%增高到85.36%、59.19%(P<0.01);人PBMC的增殖活性增强,CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞分别由24.37%、6.90%提高到38.80%、13.45%(P<0.01);CD25、LFA-1、FasL表达水平分别由3·99%、86.52%、5.02%提高到12.96%、99.06%16.19%(P<0.01);穿孔素基因、膜相关TNF均表达增强,LAK样、NK样杀伤活性在各效靶比时均明显增高(P<0.01)。结论HFI提高SKOV3细胞杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达水平,并且对人PBMC有明显的增殖活化作用,通过激活LFA-1/ICAM-1、Fas/FasL途径提高杀伤介质穿孔素和膜相关TNF的释放,增强LAK样、NK样杀伤活性。
- 王军张玲顾洪涛郭宁施明沈倍奋毛海婷李翠玲温培娥
- 关键词：ERBB2免疫细胞因子
- 二氢青蒿素诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制初探被引量：6
- 2009年
- 目的:研究二氢青蒿素(DHA)对乳腺癌细胞系T47D的增殖、凋亡作用的影响,初步探讨其抗癌作用的分子机制。方法:以乳腺癌细胞T47D为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对T47D细胞的作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:DHA对T47D细胞有增殖抑制作用且呈剂量和时间依赖性,DHA作用24、48和72h的IC50值分别为60.03、33.86和17.18μmol/L;流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大(20、40和60μmol/L),G0/G1期比例逐渐增高(42.76%、49.71%和63.01%),S期比例降低(48.45%、42.41%和30.98%);Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显剂量依赖性升高〔(20.81±0.68)%、(30.90±0.73)%、(45.32±2.17)%(n=3)〕;RT-PCR检测显示,DHA作用后细胞凋亡诱导因子BimmR-NA的表达量升高;蛋白质印迹法检测DHA作用48h凋亡相关蛋白tbid和Caspase-8表达增强,且呈一定剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制人乳腺癌细胞T47D生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与促使Bim、tbid和Caspase-8表达增强的内源性凋亡途径有关。
- 顾洪涛毛海婷张玲温培娥许晓群李翠玲阴海鹏
- 关键词：乳腺肿瘤青蒿素细胞凋亡
- 淫羊藿甙体内抑瘤及作用机制的初步研究
- 目的:淫羊藿甙(icariin ICA)是来源于小檗科淫羊藿属的植物的活性成分,其化学结构属黄酮类化合物,具有一定的抑瘤作用。体外研究表明ICA可抑制肿瘤细胞生长与增殖,对白血病细胞有诱导分化和诱导凋亡作用。ICA还可抑...
- 李翠玲张玲顾洪涛毛海婷杨尚军
- 文献传递
