顾洪涛
- 作品数：30 被引量：153H指数：7
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人肝癌Fas途径免疫逃逸机制及其反义基因治疗的研究
- 毛海婷刘倩李杰王义国张娇时昌文鹿伟李晓冰顾洪涛
- 该课题采用组织芯片、免疫组化及图像分析扫描技术反义寡脱氧核苷酸(ASODN)脂质体转染技术、流式细胞术、限制性片段长度多态性分析、RT-PCR法、混合淋巴细胞共培养法、激活性Fas单抗CH11诱导细胞凋亡等多种先进的技术...
- 关键词：
- 关键词：肝癌反义基因治疗生物治疗
- 中药淫羊藿苷抑制肝癌HepG2.2.15细胞增殖和免疫逃逸作用研究被引量：39
- 2007年
- 目的:观察中药淫羊藿苷(ICA)对HepG2.2.15细胞增殖及对CD3AK细胞杀伤活性的影响,探讨ICA对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用,为ICA的开发应用提供新的理论和实验依据。方法:MTT法检测细胞增殖和细胞杀伤活性;流式细胞术检测细胞表面分子表达水平和细胞凋亡率。结果:50μg/mlICA作用HepG2.2.15细胞48、72小时的增殖抑制作用明显,抑制率分别为22.04%、29.68%(P<0.05),呈时间依赖效应。HepG2.2.15细胞经ICA处理后,FasL的表达率由16.22%显著下降至8.29%,Fas表达率由0.79%提高到1.70%(P>0.05)。ICA可明显抑制HepG2.2.15细胞诱导Jurkat细胞凋亡,凋亡率从46.66%下降为18.20%。ICA处理HepG2.2.15细胞后,不同效靶比的CD3AK细胞的杀伤活性,可分别由对照组的15.81%、35.04%、42.85%显著提高至42.58%、67.55%、88.93%(P<0.05,P<0.01),呈效靶比依赖效应。结论:ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖,并有一定时间依赖效应;ICA可下调FasL的表达,上调细胞表面Fas的表达,对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用;ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。
- 王谦张玲毛海婷顾洪涛夏武青温培娥李翠玲杨尚军
- 关键词：HEPG2.2.15JURKAT细胞FAS/FASLCD3AK免疫逃逸
- CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用被引量：2
- 2006年
- 目的:观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MGC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bc l-2的表达水平,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法:RT-PCR法检测CD44、bc l-2 mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果:CD44反义寡核苷酸(1.6μmol/L)处理后,明显地抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达水平,在CD44配体低分子量透明质酸(HA)存在下,使MGC80-3表面下调的Fas分子显著增高,表达率从6.69%提高到16.81%(P<0.01)。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高,并呈效靶比依赖效应(P<0.01)。MGC80-3细胞bc l-2 mRNA的相对表达定量值由1.06降至0.32。结论:CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达,上调Fas分子的表达,下调凋亡抵抗基因bc l-2的表达,并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。
- 荆雪宁张玲王芸毛海婷温培娥顾洪涛崔树龄李登华
- 关键词：CD44反义基因BEL-2CD3AK
- 淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究被引量：11
- 2009年
- 目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。
- 唐菁张玲李翠玲顾洪涛杨尚军阴海鹏温培娥姜国胜
- 关键词：淫羊藿苷黄芩苷多柔比星人肝癌细胞APRIL
- 淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制被引量：34
- 2007年
- 目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法:肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BL/6小鼠,建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h,用高、中、低不同剂量(9、4.5、2.25mg/ml)的ICA和环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)(30mg/kg)进行局部注射治疗,待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右,各组小鼠称重,处死。留自凝血,取血清检测TNF-α;依次取脾脏及肿瘤组织称重;取1/2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液,剩余的用10%中性甲醛溶液固定,做病理切片和H-E染色以及TUNEL实验;脾单细胞悬液用流式细胞术(FACS)检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达;肿瘤单细胞悬液用AnnexinV/PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况,同时取适量的瘤细胞用70%乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果:Cy治疗组抑瘤率为67.16%,ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24.63%、32.84%、5.22%。AnnexinV/PI双染结果表明,Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为(9.11±1.584)%,ICA组为(7.14±1.376)%,荷瘤对照组为(3.6±2.38)%]。TUNEL结果显示,ICA治疗组凋亡指数为(5.35±0.73)%,显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[(1.03±1.17)%](P<0.01)。正常小鼠血清中未检测到TNF-α的存在,而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明,ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死,包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死,包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞(淋巴细胞与单核细胞)浸润。结论:ICA有显著的抑瘤作用,可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。
- 李翠玲张玲顾洪涛王军毛海婷杨尚军温培娥
- 关键词：淫羊藿苷抑瘤作用细胞凋亡细胞周期
- 肺癌细胞自分泌VEGF对mCRPs的调控及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人非小细胞肺癌A549细胞自分泌VEGF对膜结合补体调节蛋白(membrane-bounal complement regulatory proteins,mCRPs)的调控及其机制。方法:RT-PCR法检测CD46、CD55、CD59、VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1 CXCR2)mRNA在人非小细胞肺癌A549细胞的表达。MTT法检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测抗VEGF抗体和抗IL-8抗体对A549细胞mCRPs表达水平的影响,Western blotting检测抗VEGF抗体对转录因子KLF2和磷酸化NF-κB p65蛋白表达的影响。结果:A549细胞表达膜结合型CD46、CD55和CD59 mRNA,亦表达VEGF及其受体(KDR和FLT-1)和IL-8及其受体(CXCR1和CXCR2)mRNA。抗VEGF抗体明显抑制A549细胞的增殖(P<0.05)。终质量浓度0.1μg/ml抗VEGF抗体封闭72 h,CD55和CD59 mRNA表达下降,膜结合的CD55和CD59蛋白分子表达降低(均P<0.05);胞质和核KLF2蛋白相对定量值分别从0.63和0.88下降至0.42和0.66,胞质和胞核磷酸化NF-κB p65蛋白相对定量值分别从0.44和0.28下降至0.37和0.19。结论:A549细胞可能通过自分泌VEGF增加NF-κB p65和KLF2转录因子水平,从而上调CD55和CD59的表达。
- 赵勇张玲李翠玲阴海鹏顾洪涛温培娥
- 关键词：血管内皮细胞生长因子白细胞介素8NF-ΚB
- 海洋生物、中药提取成分对人肿瘤细胞增殖的影响
- 目的:本研究以人白血病细胞株HL-60;人肝癌细胞株BEL-7402、HepG2.2.15、HepG2人肺癌细胞株PG和15例难治性白血病患者骨髓细胞为研究模型,将多种海洋生物、中药提取成分作用于上述肿瘤细胞,采用细胞增...
- 张玲李翠玲顾洪涛阴海鹏温培娥
- 文献传递
- 抗人P185^(erbB2) scFv-Fc-IL-2调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞被引量：2
- 2006年
- 目的将抗人P185erbB2scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),通过体外实验阐明HFI调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞的抗肿瘤机制,为HFI临床应用提供实验依据。方法MTT法检测细胞增殖、杀伤活性;流式细胞术观察细胞表面分子的表达水平;生物活性法检测细胞膜相关TNF杀伤活性;RT-PCR检测细胞穿孔素表达水平。结果HFI处理后,未观察到对SKOV3细胞增殖活性的直接抑制作用;SKOV3细胞表面杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达率分别由24.85%、0.53%增高到85.36%、59.19%(P<0.01);人PBMC的增殖活性增强,CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞分别由24.37%、6.90%提高到38.80%、13.45%(P<0.01);CD25、LFA-1、FasL表达水平分别由3·99%、86.52%、5.02%提高到12.96%、99.06%16.19%(P<0.01);穿孔素基因、膜相关TNF均表达增强,LAK样、NK样杀伤活性在各效靶比时均明显增高(P<0.01)。结论HFI提高SKOV3细胞杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达水平,并且对人PBMC有明显的增殖活化作用,通过激活LFA-1/ICAM-1、Fas/FasL途径提高杀伤介质穿孔素和膜相关TNF的释放,增强LAK样、NK样杀伤活性。
- 王军张玲顾洪涛郭宁施明沈倍奋毛海婷李翠玲温培娥
- 关键词：ERBB2免疫细胞因子
- 二氢青蒿素诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制初探被引量：6
- 2009年
- 目的:研究二氢青蒿素(DHA)对乳腺癌细胞系T47D的增殖、凋亡作用的影响,初步探讨其抗癌作用的分子机制。方法:以乳腺癌细胞T47D为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对T47D细胞的作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:DHA对T47D细胞有增殖抑制作用且呈剂量和时间依赖性,DHA作用24、48和72h的IC50值分别为60.03、33.86和17.18μmol/L;流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大(20、40和60μmol/L),G0/G1期比例逐渐增高(42.76%、49.71%和63.01%),S期比例降低(48.45%、42.41%和30.98%);Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显剂量依赖性升高〔(20.81±0.68)%、(30.90±0.73)%、(45.32±2.17)%(n=3)〕;RT-PCR检测显示,DHA作用后细胞凋亡诱导因子BimmR-NA的表达量升高;蛋白质印迹法检测DHA作用48h凋亡相关蛋白tbid和Caspase-8表达增强,且呈一定剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制人乳腺癌细胞T47D生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与促使Bim、tbid和Caspase-8表达增强的内源性凋亡途径有关。
- 顾洪涛毛海婷张玲温培娥许晓群李翠玲阴海鹏
- 关键词：乳腺肿瘤青蒿素细胞凋亡
- 淫羊藿甙体内抑瘤及作用机制的初步研究
- 目的:淫羊藿甙(icariin ICA)是来源于小檗科淫羊藿属的植物的活性成分,其化学结构属黄酮类化合物,具有一定的抑瘤作用。体外研究表明ICA可抑制肿瘤细胞生长与增殖,对白血病细胞有诱导分化和诱导凋亡作用。ICA还可抑...
- 李翠玲张玲顾洪涛毛海婷杨尚军
- 文献传递
