蹇锐
- 作品数：60 被引量：231H指数：9
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- U6和H1双启动子载体用于RNAi的实验研究被引量：9
- 2004年
- 为建立一条简便、有效的构建哺乳动物细胞随机RNAi文库技术路线 ,首先通过PCR将 1 9～ 2 1ntsiRNA编码序列及终止信号等元件引入U6启动子下游 ,再将该扩增产物定向克隆至H1启动子的下游。构建的双启动子载体中 ,U6和H1相对排列 ,均以其间插入的靶序列为模板 ,分别转录出其正义和反义链 ,形成功能性siRNA。以EGFP和bcl 2为靶基因的实验表明 ,该方法构建的载体可有效地干扰相应基因的表达。
- 蹇锐程小星彭涛邓少丽蒋静
- 关键词：反义靶基因哺乳动物细胞定向克隆
- 查菲埃立克体120000表面抗原蛋白基因的克隆与表达被引量：1
- 2001年
- 目的 构建查菲埃立克体特异性表面抗原 Ｐ１２０基因的原核表达质粒，并使该基因在 Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法 依据查菲埃立克体Ｐ１２０基因序列设计一对特异性引物，用ＰＣＲ从查菲埃立克体的基因组中扩增含有编码Ｐ１２０抗原决定簇的基因片段，而后将ＰＣＲ产物用Ｔ载体克隆。用酶将ＰＣＲ产物从Ｔ载体切下，将它定向插入原核表达质粒ＰＥＴ１１Ｃ构建ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒；用重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）。结果 从ＤＮＡ片断中扩增出一约１１１９ ｂｐ产物，经测序为查菲埃立克体ｐ１２０基因。ＰＥＴ１１Ｃ／ｐ１２０重组质粒转化的 Ｅ．ｃｏｌｉ在 ＩＰＴＧ的诱导下产生一分子量为４１０００的天然蛋白，它的产量占细菌蛋白总量的 ２８％，用免疫印迹分析证明它能特异地与查菲埃立克体感染病人血清反应。结论 查菲埃立克体特异性的Ｐ１２０抗原在原核表达系统被高效表达，该抗原的研制成功为制备人单核细胞埃立克体病诊断抗原和疫苗奠定了基础。
- 蹇锐温博海
- 关键词：表面抗原病原体克隆埃立克体病
- 随机扩增DNA指纹分型分析耐利福平结核分支杆菌的传播
- 2001年
- 目的 对临床分离菌株进行鉴定，分析耐利福平结核分支杆菌是否在人群中传播。方法 采用一对随机引物（Ｐ１５’－ＣＣＧＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣ；Ｐ２ ５’－ＣＣＧＣＣＣＡＣＣＧＡＣ），对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的１００株耐利福平结核分支杆菌的 ＤＮＡ进行随机ＰＣＲ扩增，根据扩增产物的ＤＮＡ电泳指纹进行分型。结果１００株耐利福平结核分枝杆菌的ＤＮＡ指纹可分为６种类型，以Ⅱ、Ⅰ和Ⅲ型为主，它们分别占４０％、３１％和２５％；这３型菌株有１／４是从初治结核病人的痰标本中分离，而在２０－３９岁年龄段则有１／３是从初治结核病人的痰标本中分离。结论 随机扩增ＤＮＡ指纹是一种简便、敏感、重复性好的菌株分型方法，可用于耐药性结核病流行监测。重庆地区结核病的流行很可能与耐利福平结核分支杆菌的传播有关。
- 陈炜钟敏温博海陈荣钟明娄乐山王安容蹇锐
- 关键词：结核分支杆菌利福平耐药DNA指纹结核病
- 用16SrRNA基因序列分析从西藏的微小牛蜱中检出的埃立克体被引量：13
- 2003年
- 用埃立克体属特异性套式PCR和DNA序列测定从西藏微小牛蜱检出边缘无形体和埃立克体 ;用半套式PCR扩得该埃立克体的 16SrRNA基因 ,并测定了它的序列 ;将该埃立克体的 16SrRNA基因序列与其它埃立克体的 16SrRNA基因序列进行对比分析 ,结果证明它的 16SrRNA基因与埃立克体属的犬埃立克体群 16SrRNA基因相似水平最高 (97%～ 98% ) ;用 16SrRNA基因序列做系统发育分析 。
- 温博海蹇锐张有植
- 关键词：基因序列分析埃立克体系统发育分析
- 检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究被引量：16
- 2002年
- 目的 建立聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法 ,并评价其临床应用的价值。方法 依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物 ,用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段 ;对扩得的rpoB基因片段做DNASSCP分析 ,并随机测定rpoB片段的序列。结果 PCR从所有 2 12株结核分枝杆菌中均扩得 2 3 0bp片段 ,13 5份抗酸染色阳性的痰标本中 ,有 113份扩得阳性片段 ( 83 .7% )。在SSCP分析中 ,14 0份经L J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌 ,有 13 0份有rpoB基因突变 (符合率为 92 .9% ) ,72份经L J药敏试验检测为利福平敏感的菌 ,有 67份的rpoB基因无突变 (符合率为 93 .1% )。测序分析发现 5 7份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变 ,10份经SSCP分析为无突变的有 8份无序列改变 ,SSCP与测序结果的符合率为 94 .0 %。在本研究的菌株中 ,耐多药结核病 (MDR TB)占 76.4 % ( 10 7/14 0 ) ,有 92 .5 % ( 99/ 10 7)耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论 建立的PCR SSCP分析方法 ,是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法 ,可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性 ,并可作为MDR
- 钟敏温博海陈荣王安容蹇锐王易伟
- 关键词：结核分枝杆菌利福平聚合酶链反应RPOB基因PCR-SSCP
- 用DNA探针检测肺炎衣原体被引量：2
- 1999年
- 目的建立一种敏感而特异的肺炎衣原体分子生物学检测方法。方法用ＰＣＲ扩增约４６０ｂｐ的肺炎衣原体种特异性基因片段并标记成探针，建立ＤＮＡ探针杂交检测肺炎衣原体的方法。结果：探针只与肺炎衣原体ＡＲ－３９、ＶＲ１３１０株ＤＮＡ呈阳性杂交斑点，与肺炎衣原体ＡＲ－３９株全ＤＮＡＰｓｔＩ酶切片段在２．５ｋｂ处有一阳性杂交带，与其它两种衣原体、Ｑ热立克次体、嗜肺军团菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌ＤＮＡ斑点膜无阳性杂交信号。从１５２例有呼吸道疾患的住院病人鼻咽拭子和肺泡灌洗液中检出阳性１８例，阳性率１２％。结论本文建立的ＤＮＡ探针检测肺炎衣原体方法具有较高的敏感性和特异性，可用于批量临床标本的检测。
- 饶贤才俞树荣张雪蹇锐
- 关键词：DNA探针肺炎衣原体斑点杂交
- 广州2002年登革病毒流行株的分离鉴定及进化分析被引量：7
- 2005年
- 目的 从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法 采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)后 ,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对。确定血清型后 ,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E NS1连接区基因片段 ,测序后用邻位相连 (N J)法构建登革病毒进化树 ,分析此次登革病毒流行株的来源。通过乳鼠脑内接种及空斑实验 ,测定分离株的毒力。结果 上述 2 0份血清标本中 ,5份标本出现明显的细胞病变 ,主要表现为细胞融合 ,形成大小不一的空泡和网状结构。RT PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型。E NS1连接区基因序列片段分析表明 ,2 0 0 2年广州分离株 (DEN 1 GZ2 0 0 2 )的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN 1 T14株 (澳大利亚 ,1981)同源性最高 ,达 98%。N J法构建进化树显示 :11株DEN 1病毒分成 3个基因群 ,分别与Rico Hesse 1990分型中的Ⅰ ,Ⅳ和Ⅴ型以及AnaP .Goncalvez 2 0 0 2年分型中的亚洲型 ,南太平洋型和美洲 非洲型相符 ,本室分离的DEN 1 GZ2 0 0 2株属于Ⅳ型或者称南太平洋型。DEN 1 GZ2 0 0 2?
- 张俊磊蹇锐万颖杰彭涛安静张复春唐小平
- 关键词：登革病毒进化分析毒力
- 查菲埃立克体P28蛋白抗原免疫印迹调查犬单核细胞埃立克体病被引量：2
- 2002年
- 目的 以查菲埃立克体P2 8蛋白抗原免疫印迹法对犬单核细胞埃立克体病作流行病学调查 ,为该病的防治提供依据。方法 收集广东犬埃立克体病发生地的犬血清 ,用基因工程制备的查菲埃立克体P2 8融合蛋白抗原与犬血清作免疫印迹 ,检测犬血清中的抗P2 8抗体。结果 2 12份犬血清行免疫印迹 ,89份 (42 % )阳性 ;这些阳性反应的血清绝大部分来自广州市和深圳市的野外工作犬 ,而南海市观赏犬的血清均为阴性。广西省南宁市的野外工作犬的 36份标本仅 3份为弱阳性。高水平的P2 8抗体出现在 4～ 10月 ,与当地蜱的活动期平行。结论 犬单核细胞埃立克体病在我国为局部流行 。
- 蹇锐温博海潘华刘世忠
- 关键词：免疫印迹埃立克体病流行病血清学分析
- 从重组痘苗病毒获得JEV蛋白的分析被引量：2
- 1995年
- 本文报告应用免疫过氧化物酶技术（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｓｓａｙ，ＩＰＡ）、微斑免疫过氧化物酶技术（Ｍｉｃｒｏｐｌａｑｕｅｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅａｓｓａｙ，ＭＰＩＰＡ）和免疫印迹试验（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔａｓｓａｙ，ＩＢＡ）对我室构建的３株含有日本脑炎病毒（ＪａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＪＥＶ）基因的重组痘苗病毒进行了分析，结果表明，３株重组病毒均可在乳地鼠肾细胞（ＢＨＫ－２１－１５ｃｌｏｎｅｃｅｌｌ）上表达ＪＥＶ蛋白。（１）在感染的细胞浆、细胞膜和微孔板培养的单层细胞上显示特异的免疫酶斑。（２）可于感染６ｈ后的单层细胞上检出ＪＥＶ蛋白。（３）用免疫印迹分析观察到３～４条区带（１９ＫＤ、３７ＫＤ、５１ＫＤ和５６ＫＤ）。
- 刘启富蹇锐胡晓梅娄元梅朱德钟
- 关键词：重组痘苗病毒蛋白日本脑炎病毒
- 医学微生物学多媒体教学的几点体会被引量：3
- 2009年
- 多媒体教学作为一种新型的教学手段有传统教学手段不可比拟的优越性,对提高医学微生物学课堂教学质量与教师备课效率起着积极作用。但在教学过程中,必须遵循教学规律,充分发挥教师的主导作用和学生的主体作用,使多媒体更好地为教学服务。
- 张俊磊韩俊峰蹇锐陈炜
- 关键词：医学微生物学多媒体教学多媒体课件
