许清
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金上海市自然科学基金江苏省“333工程”培养资金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-33参与促进A549细胞上皮-间质转化及作用机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨在上皮来源的A549细胞上皮-间质转化进程中,IL-33/ST2L信号传导系统的作用及其机制。方法培养A549细胞,RT-PCR检测受体ST2L mRNA;不同浓度白细胞介素-33(IL-33)刺激细胞,在不同时间点以MTT方法检测IL-33对A549细胞增殖的影响;以Real-time PCR法检测不同时间点A549细胞标志性基因E-cad mRNA、α-SMA mRNA以及Vimentin mRNA等的变化和IL-33/ST2L信号通路中关键因子TRAF-6 mRNA的表达改变;Western blot法检测细胞标志性蛋白E-cad、collagenI、Vimentin以及TRAF-6的改变。结果 IL-33对A549细胞的增殖没有影响;不同浓度(5、10及50 ng/mL)IL-33刺激A549细胞24 h,E-cad的表达随浓度的升高逐渐下降、α-SMA的表达随浓度的升高逐渐上调,选择10 ng/mLIL-33作为A549细胞的刺激浓度;随着IL-33刺激时间的逐渐延长,E-cad的表达先降低后升高,α-SMA、Vimentin、collagenI以及TRAF-6的表达呈现先升高后降低的趋势。结论 IL-33/ST2L信号通路的激活能促进A549细胞间质变,尤其是在早期炎症反应阶段作用最为明显。
- 吴立艳郑金旭宋萍许姣刘继柱许清
- 关键词：A549细胞增殖上皮-间质转化
- Inhibition of epithelial-mesenchymal transition in A549 cell by transfected Napsin A
- Background Cells without Napsin A are susceptible to transition.Further studies are required to investigate wh...
- 郑金旭管淑红宋萍许清刘继柱
- 热休克蛋白47参与TGF-β1促人胚肺细胞胶原合成被引量：3
- 2011年
- 目的观察热休克蛋白47(HSP47)对人胚肺成纤维细胞(HELF)胶原合成及间质细胞标志物的影响,探讨它与肺纤维化的关系。方法用TGF-β1诱导HELF表达HSP47,用5 ng/mL TGF-β1作用不同时间和用不同浓度TGF-β1作用于HELF 48 h;WST-8法检测细胞增殖;免疫荧光法检测HSP47的表达;Western blot检测HSP47、Ⅰ型胶原(CollageⅠ)及间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果正常HELF表达少量HSP47,随着HELF在TGF-β1作用时间的延长和剂量逐渐增加,HSP47(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,7.081±0.265)、CollageⅠ(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,2.494±0.139)、α-SMA和Vimentin的表达均同步增强(P<0.05)。结论 HSP47在TGF-β1的作用下,促进人胚肺成纤维细胞胶原蛋白的合成,作为胶原特异性分子伴侣在肺纤维化的发生发展过程中发挥至关重要的作用。
- 郑金旭汤艳黄振杰管淑红许清刘继柱
- 关键词：热休克蛋白47人胚肺成纤维细胞肺纤维化
- WNT1对人胚肺成纤维细胞的影响
- 宋萍郑金旭许姣吴立艳许清刘继柱
- Ⅱ型肺泡上皮细胞转染Napsin A基因对肺纤维化的干预研究
- 郑金旭管淑红许清汤艳刘继柱吕晓婷
- Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化中增殖的影响及其机制
- 2011年
- 采用慢病毒载体质粒PLJM1将NapsinA基因转染到人肺腺癌细胞——A549细胞中,获得稳定表达Napsin A蛋白的特性并鉴定,通过转化生长因子-β1刺激A549细胞发生上皮-间质转化,体外构建上皮-间质转化模型并鉴定。MTT法检测转基因前后A549细胞在上皮-间质转化过程中生长速率的变化;流式细胞术检测其细胞周期的改变,最后予Western blot检测黏着斑激酶的表达情况,探讨Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化过程中增殖的影响及其机制。结果表明转染后的A549细胞表达Napsin A蛋白明显增加(P<0.01);A549细胞发生上皮-间质转化后细胞E钙蛋白表达下调(P<0.01),Ⅰ型胶原表达上调(P<0.01);转基因细胞在体外上皮-间质转化模型中增殖速度减慢(P<0.05),且细胞周期被阻滞在G_1期(P<0.01),其表达整合素信号传导通路的基础分子——黏着斑激酶的量显著下降(P<0.01)。提示Napsin A基因可以抑制A549细胞在上皮-间质转化过程中的进一步增殖,其机制可能与抑制整合素信号传导通路有关。
- 管淑红郑金旭许清汤艳刘继柱吕晓婷
- 关键词：NAPSINA549细胞上皮-间质转化增殖黏着斑激酶
- 柴胡皂甙d干预肺纤维化VEGF/PEDF表达的实验研究被引量：9
- 2012年
- 目的:观察柴胡皂甙(SS)d对博来霉素(BLM)致肺纤维化小鼠的肺组织血管内皮生长因子(VEGF)/色素上皮衍生因子(PEDF)在不同时间表达变化的调节作用,并探讨其与抗肺纤维化作用的关系。方法:将80只小鼠随机均分为对照组,BLM组,SSd大、小剂量组。治疗组分别每天腹腔注射不同剂量SSd(2.0mg/kg,1.0mg/kg),分别于3、7、14及28d时观察纤维化程度,样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,免疫荧光观察PEDF、VEGF蛋白在肺内表达的规律,RT-PCR观察各时间点PEDF、VEGFmRNA表达的强度。结果:BLM组和SSd大、小剂量组均呈纤维化逐渐进展的动态变化,28d时,SSd大、小剂量组纤维化程度较BLM组轻(P<0.01);BLM组和SSd大、小剂量组HYP含量随时间增加逐渐增加,7、14及28d时SSd大、小剂量组HYP含量均低于BLM组(P<0.001);BLM组及SSd大、小剂量组VEGF表达从3d时开始升高,第7天达高峰,后呈下降趋势,28d达低点,PEDF表达总体呈逐渐增高趋势;SSd大、小剂量组VEGF表达比BLM组降低,PEDF表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论:SSd能够抑制肺纤维化进展,机制可能与下调VEGF的表达,上调PEDF的表达有关。
- 郑金旭许清管淑红刘继柱宋萍汤燕吴立艳
- 关键词：柴胡皂甙肺纤维化血管内皮生长因子类博来霉素
- 人胚肺成纤维细胞中HSP47与TGF-β_1关系的探讨被引量：1
- 2011年
- 目的分析在人胚肺成纤维细胞(HELF)中热休克蛋白47(HSP47)与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的关系。方法将HELF分为4组:对照组、热休克组、TGF组及联合组。采用WST-8法检测HELF细胞活力和Western blot检测各组细胞HSP47、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vi mentin)表达情况。结果 TGF-β1能促进HELF的增殖(P<0.05);在TGF-β1作用下HELF中上述蛋白表达上调,在TGF-β1联合热休克反应的作用下上调更明显,而单在热休克反应后细胞HSP47表达显著,ColⅠ却未见明显增强(P>0.05)。结论 HSP47参与TGF-β1促HELF胶原合成,在肺纤维化中起着重要的作用。
- 汤艳郑金旭黄振杰管淑红许清刘继柱
- 关键词：转化生长因子Β1人胚肺成纤维细胞
- Ⅱ型肺泡上皮细胞转染Napsin A基因对肺纤维化的干预作用被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞对肺纤维化的作用和机制.方法 采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞染色体中并鉴定.予转化生长因子β1（TGF-β1）刺激A549细胞构建体外肺纤维化模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化 用MTT法检测A549细胞转基因前后受TGF-β1刺激情况下增殖能力的变化,并绘制生长曲线 分别用RT-PCR和Western印迹方法检测未转基因和转基因A549细胞被TGF-β1干预后其表达E钙蛋白和纤维连接蛋白基因和蛋白水平的变化,以判断其发生上皮-间质转化（EMT）的情况 用Western印迹方法检测A549细胞转基因前后表达黏着斑激酶（FAK）蛋白量的变化,探讨Napsin A干预肺纤维化的机制.结果 重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A基因和蛋白均显著高于非转基因细胞组（P＜0.01）.细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,提示体外构建肺纤维化模型成功.MTT法检测转基因细胞在TGF-β1诱导下其增殖速度减慢（P＜0.05） E钙蛋白的基因和蛋白表达水平在体外肺纤维化模型中明显下调（E钙蛋白mRNA：A549-PLJM1：0.77±0.09,A549-PLJM1-Napsin A：0.79±0.03,A549＋TGF-β1：0.41±0.05,A549-PLJM1＋TGF-β1：0.40±0.05 E钙蛋白分别为：0. 76±0.06,0.73±0.09,0.20±0.05,0. 22±0.03,P＜0.01）,相反纤维连接蛋白则明显上调（P＜0.01）,但转染Napsin A基因后其变化幅度减小（P＜0.01,P＜0.05）.体外肺纤维化模型中,细胞FAK蛋白表达量增多（A549：0.49±0.04,A549-PLJM1：0.50±0.06 A549-PLJM1-NapsinA：0.48±0.08 A549＋TGF-β1：3.49±0.61 A549-PLJMI＋TGF-β1：3.54±0.25,P＜0.01）,但转基因细胞上调趋势显著小于未转基因细胞组（P＜0.01）.结论 转染Napsin A基因至Ⅱ型肺泡上皮细胞可以抑制肺纤维化,其作用机制可能�
- 郑金旭管淑红许清汤艳刘继柱吕晓婷
- 关键词：肺纤维化NAPSIN上皮-间质转化
- Napsin A基因转染干预A549细胞的上皮-间质转化被引量：4
- 2011年
- 目的探讨Napsin A基因转染至A549细胞对其上皮-间质转化(EMT)的作用和机制。方法采用慢病毒载体质粒PLJM1构建重组质粒PLJM1-Napsin A,将Napsin A基因转染至A549细胞染色体中并鉴定。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激A549细胞构建体外EMT模型,倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化,观察Napsin A基因转染对A549细胞在体外EMT模型中细胞EMT和表达黏着斑激酶(FAK)的影响。结果重组质粒PLJM1-Napsin A测序结果与设计序列完全符合,转Napsin A基因A549细胞表达Napsin A蛋白显著高于非转基因细胞组(P<0.01)。细胞经TGF-β1刺激后形态上演变为间质细胞,E钙蛋白的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01),相反Ⅰ型胶原则显著上调(P<0.01),提示体外构建EMT模型获得成功。转Napsin A基因A549细胞在TGF-β1干预后,其细胞形态间质改变、E钙蛋白和Ⅰ型胶原的表达量也发生相似变化趋势,但变化幅度显著变小(其中E钙蛋白:P<0.01,Ⅰ型胶原:P<0.05)。体外EMT模型中,细胞FAK蛋白表达量增多(P<0.01),但转基因细胞上调趋势明显小于未转基因细胞(P<0.01)。结论转染Napsin A基因至A549细胞可以部分阻滞细胞EMT进程,其作用机制可能与抑制整合素信号转导通路有关。
- 管淑红郑金旭汤艳宋萍许清刘继柱
- 关键词：NAPSINA549细胞上皮一间质转化免疫印迹法
