许文钊 作品数:8 被引量:67 H指数:5 供职机构: 贵州省农业生物工程重点实验室 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 青年科技基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 农业科学 更多>>
油菜偏嗜性ChIFN-γ基因合成及原核表达 2009年 依据鸡γ-干扰素基因(ChIFN-γ)的氨基酸序列,采用油菜偏嗜性的密码子,人工合成ChIFN-γ,构建原核表达载体pET32a-ChIFN-γ,并转化到E.coliBL21中。1 mmol.L-1IPTG 37℃诱导表达12h ChIFN-γ表达量达到菌体总蛋白的37%。SDS-PAGE电泳检测表明,ChIFN-γ重组蛋白分子量约为33kDa。研究为下一步制备ChIFN-γ抗体进行真核表达研究奠定了基础。 许文钊 吴拥军 赵德刚 田斌关键词:原核表达 细菌型豆豉发酵芽孢杆菌的筛选与鉴定 被引量:33 2009年 对贵州省10个细菌型豆豉产区的样品进行菌种分离与鉴定。旨在通过纯种发酵、口感评测、产蛋白酶能力测定、产气实验,筛选出能够取代自然发酵、蛋白酶产量高、发酵风味好、发酵不产气的芽孢杆菌菌株。结果从分离的184株芽孢杆菌中,筛选出3株发酵品质突出且不产气的菌株:BJ3-2、BJ1-3和ZY4-5,其产蛋白酶能力(h/c)分别为3.60、1.71和1.50。生理生化鉴定和16SrDNA序列分析结果显示,它们均为枯草芽孢杆菌。扩大纯种发酵实验证明,可以将其作为工业发酵参考菌株。 贾东旭 吴拥军 李耀中 许文钊关键词:细菌型豆豉 芽孢杆菌 纯种发酵 蛋白酶 转ChIFN-γ基因油菜植株的建立 被引量:2 2013年 干扰素(interferons,IFNs)是一类抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖等作用的高活性、多功能诱生性糖蛋白.采用农杆菌介导法将含鸡γ-干扰素(chicken interferon-γ,ChIFN-γ)基因的植物表达载体pSW-NGN导入油菜下胚轴和子叶柄.经筛选和分化,获得了62株抗性再生植株,通过葡糖醛酸酶GUS(β-glucuronidase,GUS)活性检测、PCR检测及Southern杂交检测,确定获得2株单拷贝转ChIFN-γ基因油菜.ELISA定量检测转基因植株中的ChIFN-γ蛋白.结果表明,转基因植株ChIFN-γ蛋白表达量最高可达1 120 pg/g鲜重.该研究为植物生物反应器生产ChIFN-γ口服疫苗蛋白的开发及应用奠定了基础. 吴玉俊 许文钊 吴拥军 赵德刚关键词:油菜 重组ChIFN-γ基因的表达及油菜的遗传转化 目前,每年全世界鸡肉消费量约占全部肉制品消费总量的40%,为提供健康的鸡肉,每年要耗费几十亿美元用于饲养和防疫。γ-干扰素具有广谱抗病毒活性和免疫保护作用,在生产上有实际的应用意义。应用植物生物反应器生产IFN蛋白具有天... 许文钊关键词:油菜 蛋白表达 遗传转化体系 禽病防治 文献传递 ChIFN-γ基因植物表达载体的构建与瞬时表达 被引量:10 2008年 为了使鸡干扰素-γ(ChIFN-γ)基因在油菜中获得高效表达,优化了油菜偏爱的密码子,在ChIFN-γ的5′端添加Kozark序列,3′端增加内质网滞留信号肽SEKDEL.应用同尾酶将人工合成的ChIFN-γ,Napin特异性启动子及信号肽与NOS终止子克隆到质粒pSH中构建成植物表达载体pSH-NGN.经生菜瞬时表达,ELISA检测表明ChIFN-γ蛋白获得有效表达.研究结果为进一步遗传转化油菜奠定了基础,同时也对构建基因的正确表达提供了一种新的快速鉴定方法. 吴拥军 赵德刚 宋莉 许文钊关键词:同尾酶 转ChIFN-γ基因烟草抗虫作用初步研究 被引量:8 2009年 对田间烟蚜的自然发生情况观察和抗虫试验的研究显示,转ChIFN-γ基因烟叶具有显著的抗虫效果.为探索转基因烟草的抗虫机理,测定了叶片中烟碱含量并对植株组织进行切片染色.结果表明,烟碱含量与对照无显著差异;转基因烟草叶片增厚,细胞致密,细胞壁增厚可能是导致抗蚜虫、抗斜纹夜蛾的最直接因素之一. 吴拥军 赵德刚 许文钊 李耀中 詹寿年关键词:烟草 烟碱 组织切片 抗虫机制 腐乳发酵中毛霉菌丝的自溶及其影响因素研究 被引量:5 2008年 对腐乳发酵过程中甲壳素酶、脱乙酰甲壳质酶、壳多糖酶和N-乙酰氨基葡萄糖酶进行研究,旨在探索腐乳毛霉后发酵菌丝自溶机理。在保持腐乳发酵所需各种酶活力的同时,达到后期腐乳成熟及毛霉菌丝充分自溶,以提高腐乳品质。结果表明:甲壳素酶是影响毛霉菌丝自溶的关键酶;温度是影响菌丝自溶的主要因素;香辛料(砂仁)对几丁质酶活力影响较大。通过正交试验确定:控制适宜的香辛料比例,温度30℃,初始pH6.5,初始酒精度10°,初始NaCl浓度11%并添加0.2%几丁质进行腐乳发酵。70d完全成熟,腐乳毛霉菌丝长度比对照低4.1倍。 吴拥军 王嘉福 陈昌泽 龙菊 许文钊关键词:几丁质酶 腐乳毛霉高产蛋白酶菌株的分离与鉴定 被引量:11 2008年 从贵州各地风味较好的腐乳样品中分离到20株疑似毛霉菌株,经理化鉴定。并采用福林-酚试剂法检测产蛋白酶活力,获得1株发酵风味良好且蛋白酶活性较高的腐乳毛霉菌株MGC317。鉴定为雅致放射毛霉Actinomucor elegans(Eid)Benjam et Hesseh。将MGC317菌株接种麸皮培养基,28℃培养48h。其蛋白酶活性为57.26μL;对其16SrDNA的ITS序列进行克隆和分析,其分子长为711bp,与雅致放射毛霉比较。序列同源性为96%-97%。前发酵结果显示,MGC317菌株的菌丝高度为3.1cm。48h时蛋白酶活性为13.82μL。 程昌泽 吴拥军 龙菊 王嘉福 许文钊关键词:腐乳 毛霉 蛋白酶 ITS 菌株分离