薛志刚
- 作品数：23 被引量：92H指数：6
- 供职机构：中南大学湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ被引量：4
- 2005年
- 构建了携带改造型hFⅧ(hFⅧ-BDDAK39)的核糖体基因区靶向表达载体pHrneo-BDDAK39,并将其转入人纤维肉瘤细胞(HT1080),检测其定点整合的能力及hFⅧ-BDDAK39的表达情况.结果显示,pHrneo-BDDAK39能够成功地将hFⅧ-BDDAK39靶入到HT1080细胞的核糖体基因区,定点整合效率达到2.0×10^(-5),并且靶入的hFⅧ-BDDAK39能有效表达,表达量为(32±5)ng·10~6细胞^-1·24h^(-1).这为利用此靶向表达载体进行血友病A的基因治疗提供了重要的实验依据.
- 刘雄昊刘慕君佘华文路薛志刚梁德生蔡芳潘乾龙志高邬玲阡戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：靶向表达核糖体基因改造型打靶载体纤维肉瘤
- 胎儿附属物来源细胞的培养冻存被引量：1
- 2007年
- 目的研究从胎儿附属物中分离培养及冻存细胞的较佳方法,以期为组织工程、细胞治疗和基因治疗提供种子细胞。方法取足月产胎儿脐带和胎盘,用酶消化法获得细胞,用相应培养液进行培养传代。将胎盘、脐带组织块冻存,检测加入不同浓度抗冻剂二甲亚砜的组织复苏后的活细胞率,透射电镜下观察其超微结构,并与新鲜组织进行比较;冻存培养所得人脐带血管周细胞和胎膜贴壁细胞的原代细胞,用免疫化学法检测冻存前后各自免疫表型的表达。结果新鲜脐带组织活细胞率为67.0%,抗冻剂体积分数为5%、10%、15%、20%时,冻存复苏脐带组织的活细胞率分别为23.4%、55.5%、48.8%、31.8%。抗冻剂体积分数为10%时,冻存复苏组织与新鲜组织活细胞率最接近(P>0.05),体积分数为5%和20%时与新鲜组织该指标比较,差异均有统计学意义(P<0.01);透射电镜观察结果与之吻合。胎盘组织与脐带组织的情况类同。细胞冻存后免疫表型无明显变化。结论本方法可以从胎儿附属物中分离培养出大量种子细胞,冻存复苏后细胞免疫表型未发生改变,抗冻剂体积分数为10%时效果最好。
- 余旭明薛志刚戴国胜徐旭陈万安范锟锫梁德生夏家辉
- 关键词：脐带胎盘细胞培养技术二甲亚砜
- PCR技术在快速筛选DNA文库中的应用被引量：3
- 2004年
- 目的探讨运用PCR (polymerase chain reaction)方法快速筛选DNA文库的可行性。方法以猪α-1,3GT cDNA片段为探针,用cDNA上的特异性序列合成的引物,采用噬菌斑原位杂交和PCR相结合的方法,对猪的gDNA文库进行α-1,3GT基因筛选,经酶切、Southern Blot、测序和荧光原位杂交定位。结果经过两次杂交和一次PCR即得信号很强的7个阳性单克隆,插入子均在8 kb以上,且包含第三内含子,其中3个片段测序证实含第三、第四外显子;荧光原位杂交证实该基因位于染色体1q2.10-q2.11。结论PCR可以应用于快速筛选DNA文库。
- 赵永祥刘斌张昊宇胡冬煦杨进福夏家辉潘乾薛志刚
- 关键词：PCRDNA文库基因筛选荧光原位杂交
- 人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文)被引量：7
- 2005年
- 目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。
- 梁羽梁德生薛志刚龙志高邬玲仟潘乾胡艺俏戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：融合基因COS-7细胞基因表达杜氏肌营养不良
- 利用PCR,FISH对异常核型中额外染色体的证实被引量：4
- 2005年
- 目的:检测在常规G显带下,45,X[115]/46,X+m ar[45]/46,XY[29]异常核型中额外小染色体的来源。方法:利用PCR对SRY基因进行检测;对人的Y染色体进行标记,利用荧光原位杂交技术,在荧光显微镜下观察。结果:用Y染色体杂交,发现在额外小染色体上有荧光信号。结论:额外小染色体来源于Y染色体。
- 薛志刚李玉梅姚仲元龙志高戴和平邬玲仟夏昆夏家辉
- 关键词：额外小染色体PCRY染色体
- 硅纳米颗粒的生物毒理学研究被引量：8
- 2006年
- 目的:研究硅颗粒制成纳米颗粒后的长期毒性及生殖毒性。方法:将硅纳米颗粒经尾静脉注入小白鼠体内,收集尿液离心后,电镜下观察是否有纳米颗粒的存在,并将小白鼠雌雄合笼交配产生后代,观察其产仔率,同时在电镜下观察纳米颗粒在亲代鼠各脏器中的分布。结果:硅纳米颗粒进入小鼠体内后,分布于小鼠各脏器,并能经肾脏排泄,同时注入纳米颗粒的小鼠能正常的繁殖后代。结论:硅纳米颗粒没有毒性并能在体内使用。
- 薛志刚朱晒红潘乾梁德生李玉梅刘雄昊夏昆夏家辉
- 关键词：小鼠
- 真核细胞中多重表达框mRNA的选择性翻译起始(英文)被引量：1
- 2015年
- 扫描模型和遗漏扫描模型是真核生物m RNA翻译起始的两种主要机制,但其仍存在某些例外情况,如对具有多顺反子结构的m RNA,选择性翻译起始的发生机制目前仍不清楚.本研究基于GFP蛋白开放表达框(ORF)构建了一系列重组表达载体,用以转录在移码翻译顺序及同一翻译顺序下,AUG起始密码子处于不同序列背景,以及间隔不同距离的多顺反子结构m RNA.通过转染人Bel-7402细胞系,研究了这些多顺反子结构m RNA的翻译起始模式.结果表明,在移码翻译顺序下,多顺反子m RNA可翻译出对应的不同蛋白质,而在同一翻译顺序下,GFP蛋白表达框中的多个AUG密码子,仅有首位起始密码子可发挥作用,提示核糖体在从首位起始密码子开始翻译的同时,可能会有部分核糖体继续向下扫描并识别下游的起始密码子,而这种选择性的翻译起始效率,主要取决于密码子所处的序列背景及间隔距离等因素.
- 薛金锋刘雄昊李卓胡友金薛志刚谭杨高庭吴奔邬玲仟梁德生
- 关键词：翻译起始核糖体
- 体细胞起源的人胚胎干细胞被引量：6
- 2003年
- 根据治疗性克隆假设 ,可以通过体细胞核移植技术获得与病人具同样基因型的细胞或组织 ,这样起源的细胞或组织植回病人将不会引起免疫排斥反应。本研究将 5岁、42岁、52岁和60岁 4个不同年龄的人体细胞核植入去核的兔卵母细胞中重新启动 ,发育至囊胚 ,并分离人胚胎干细胞。研究结果提示 ,年龄不影响体细胞被重新启动的效率。经过核型分析 ,同源染色体分析 ,原位杂交 ,PCR和免疫组化染色等多种鉴定 ,ntES细胞具有人染色体。ntES细胞可以长期增殖并保持不分化状态 ,也可以形成类胚体并分化出包括神经和肌肉在内的多种细胞类型。由类胚体诱导生成的混合细胞群体表达所有三个胚层 (外、中、内胚层 )细胞类型标记 ,说明ntES细胞具有分化成所有三个胚层的潜力。因此 。
- 陈莹何志旭刘爱莲王凯毛文伟褚建新卢勇方贞付施英唐杨庆章陈大元王敏康李劲松黄绍良孔祥银史耀洲王志强夏家辉龙志高薛志刚丁文祥盛慧珍
- 关键词：体细胞人胚胎干细胞核移植体细胞核移植治疗性克隆
- 羟基磷灰石纳米颗粒:一种新型基因转染载体材料被引量：30
- 2005年
- 采用化学共沉淀-水热合成法制备羟基磷灰石纳米颗粒.将羟基磷灰石纳米颗粒与SGC-7901细胞混合培养,用MTT法测定细胞增殖率,显示在10～100 μg/ml浓度范围内细胞贴壁生长良好,方差分析各组之间的OD值无明显差异(t>0.05),证明羟基磷灰石纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性.琼脂糖凝胶电泳分析发现羟基磷灰石纳米颗粒在酸性与中性条件下能与质粒PEGFP-N1结合,用结合了PEGFP-N1的羟基磷灰石纳米颗粒转染胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察发现其转染效率约为对照组脂质体的80%.用纳米颗粒及纳米颗粒-DNA复合体悬液分别尾静脉注射小白鼠,两周内动物无死亡或其它急性毒性反应,取动物的肝、肾和脑组织进行透射电镜和冰冻切片检查,发现上述组织器官有纳米颗粒分布和绿色荧光蛋白表达.实验证明,羟基磷灰石纳米颗粒是一种新型基因转染载体材料.
- 朱晒红周科朝黄伯云黄苏萍刘芳李益民薛志刚龙志高
- 关键词：羟基磷灰石基因载体羟基磷灰石基因转染SGC-7901细胞显微镜下观察急性毒性反应
- 人核糖体DNA打靶载体介导mda-7基因对肝癌的体外基因治疗研究(英文)被引量：1
- 2009年
- 人核糖体DNA打靶载体pHr是一种由中南大学医学遗传学国家重点实验室开发构建的针对人类基因组的同源重组质粒载体.利用pHr构建了一种mda-7/GFP融合基因的人源基因表达载体pHr-CMG,并研究了其在肝癌细胞系Bel-7402中的作用.利用荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting检测了mda-7/GFP融合基因的表达;利用细胞周期分析、MTT和Hoechst33258染色研究了其在细胞中的作用.结果显示,pHr-CMG载体能在Bel-7402细胞中有效表达MDA-7/GFP融合蛋白,进而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,推测其可能是由载体表达了mda-7基因引起细胞在G2/M期累积所导致的.同时,实验结果证实了人核糖体DNA打靶载体系统以及pHr-CMG表达载体的有效性,为其在进一步基因治疗研究中的应用提供了理论和实验基础.
- 薛金锋刘雄昊何嫱薛志刚胡友金李卓杨俊林高庭潘乾龙志高邬玲仟夏昆梁德生夏家辉
- 关键词：肝癌基因治疗
