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程冰
作品数:
2
被引量:2
H指数:1
供职机构:
中国科学技术大学生命科学学院
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发文基金:
安徽高校省级科学研究项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
王丽
安徽医科大学
张林杰
安徽医科大学
侯丽丽
安徽医科大学
张旭东
安徽医科大学
韩传春
中国科学技术大学生命科学学院
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作者
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侯丽丽
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程冰
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张林杰
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王丽
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金雷
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韩传春
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中华肿瘤杂志
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安徽医科大学...
年份
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2011
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Bim的异常调控在黑色素瘤细胞耐受内质网应激状态中的作用
2011年
目的探讨Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态下可能存在的异常调控,及其在黑色素瘤细胞对内质网应激耐受中的作用。方法用衣霉素诱导黑色素瘤细胞Mel—RM和MM200,产生内质网应激模型。采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法及Hoechst染色法检测细胞凋亡;Westem blot检测caspase-3和caspase-9的活化,以及Bim、GRP78、CHOP及Foxol等的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bim、CHOP及Foxol的mRNA水平。以小干扰RNA(siRNA)特异性沉默人胚肾上皮细胞系HEK293的Bim基因,观察Bim的蛋白表达和细胞凋亡情况。结果衣霉素作用后,黑色素瘤细胞对内质网应激诱导的凋亡表现为耐受,HEK293细胞中caspase-3和caspase一9明显活化,但在黑色素瘤细胞中却不明显。3μmol/L衣霉素作用黑色素瘤Mel—RM和MM200细胞12、24、36h后,Bim蛋白的水平均未上调,mRNA表达的变化倍率分别为0.37±0.05、0.13±0.02、0.02±0.01和0.41±0.06、0.16±0.04、0.21±0.03,与HEK293细胞相比,均发生下调(P〈0.01)。在HEK293细胞中,特异性沉默Bim基因后,caspase-3的活化程度下降,BimsiRNA干扰组细胞凋亡率为(5.69±0.38)%,明显低于siRNA阴性对照组[(40.32±1.64)%,P〈0.01]和空白对照组[(35.46±2.01)%,P〈0.01)]。3μmol/L衣霉素作用黑色素瘤细胞6、12、24、36h后,转录因子CHOPmRNA和蛋白表达水平均发生上调,Foxol mRNA和蛋白表达水平均发生下调。结论Bim的异常调控在黑色素瘤细胞对内质网应激诱导的凋亡耐受中发挥重要作用,这可能是导致黑色素瘤对治疗不敏感的重要原因之一。转录因子CHOP和Foxol可能与Bim在内质网应激诱导的黑色素瘤细胞中的异常表达有关。
侯丽丽
金雷
韩传春
程冰
王丽
张旭东
张林杰
关键词:
黑色素瘤
BIM
CHOP
小干扰RNA
TRAIL诱导黑色素瘤细胞中miRNA-221的表达
被引量:2
2011年
目的研究TRAIL诱导的黑色素瘤细胞中miRNA-221的表达及其在细胞凋亡抵抗中的意义。方法 TRAIL(100μg/L)分别处理黑色素瘤细胞系sk-Mel-28、IgR3、Mel-RM、MM200、Me4405,6 h后收集细胞,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miRNA-221的mRNA水平,同时检测TRAIL(100μg/L)诱导Mel-RM细胞不同时间点miRNA-221的mRNA水平变化;脂质体转染反义miRNA-221下调TRAIL诱导的Mel-RM细胞中miRNA-221的表达,同时设对照组和转染无意序列组;流式细胞术PI单染法检测细胞凋亡率;Western blot检测p-ERK及p27蛋白表达。结果 TRAIL(100μg/L)诱导Mel-RM细胞中miRNA-221的mRNA水平明显高于其他细胞系(2-ΔΔCt值为18.553 4±1.514 6)。随TRAIL诱导时间的延长,Mel-RM细胞中miRNA-221的表达上调。TRAIL(100μg/L)诱导的Mel-RM细胞中,反义miR-NA-22l转染组凋亡率高于对照组和转染无意序列组。miR-NA-221靶基因p27在U0126(MEK1/2抑制剂)和TRAIL共处理的Mel-RM细胞中的表达较TRAIL单独处理组上调。结论抑制miRNA-221的表达可能具有提高TRAIL诱导的黑色素瘤细胞凋亡敏感性的作用,抑制ERK的激活可能下调miRNA-221的表达,从而上调miRNA-221的靶基因p27蛋白的表达。
侯丽丽
程冰
张旭东
王丽
张林杰
关键词:
黑色素瘤
细胞凋亡
转染
微RNAS
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