田卉
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：徐州医学院药学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Ki-67启动子转录调控结构与功能研究被引量：5
- 2010年
- 目的 观察Ki-67核心启动子调控元件对转录调控的影响.方法 根据Ki-67启动子结构软件分析结果,对Ki-67核心启动子（-223～＋30）内的5个调控区域,包括（＋13～＋30）及4个潜在Sp1结合位点（-198～-172）、（-170～-144）、（-63～-37）和（-14～＋12）进行内部缺失,目的片段缺失的Ki-67核心启动子插入pGL3-Basic载体,构建报告基因重组体质粒.将重组体分别转染肿瘤Hela、SW1990、SGC-7901、A549细胞株,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,并与Ki-67核心启动子质粒pGLBK2＋转录活性比较.结果 缺失（＋13～＋30）的启动子重组体质粒在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著提高,分别达到缺失前的1.2、2.0、1.7、1.4倍.缺失潜在Sp1结合位点的4个启动子重组体在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著降低,其中缺失（-170～-144）后转录活性最小,在4种肿瘤细胞中分别降至未缺失前的16.2%、10.4%、6.7%、12.2%.结论 Ki-67启动子（＋13～＋30）区包含负性调控元件,对其缺失后形成的新的Ki-67核心启动子（-223～＋12）是更好的调控肿瘤基因治疗的启动子.（-198～-172）、（-170～-144）、（-63～-37）和（-14～＋12）可能存在潜在的Sp1顺式作用元件,其中-170～-144区域的顺式作用元件最为重要.
- 李中林钱国伟徐为李望张宝福刘俊杰陈菲菲田卉章龙珍郑骏年
- 关键词：KI-67基因启动子转录调控
- Ki-67启动子内Sp1位点与Hela细胞核蛋白结合活性被引量：3
- 2010年
- 目的 观察Ki-67启动子内能与细胞核蛋白结合的转录因子Sp1结合位点,探讨肿瘤细胞Ki-67基因高表达机制.方法 提取Hela细胞核蛋白.针对Ki-67启动子内4个潜在Sp1位点区域A1（-198～-172）、A2（-170～-144）、A3（-63～-37）、A4（-14～＋12）,以及没有Sp1结合位点的阴性对照区域C（-117～-91）,设计相应的Sp1一致性寡核苷酸探针和Sp1突变性寡核苷酸探针,凝胶阻滞电泳实验（EMSA）验证Sp1探针与Hela细胞核蛋白的结合活性.结果 EMSA显示A2、A3、A4一致性探针均可以和Hela细胞核蛋白结合,这种结合可以被相应的100倍浓度非标记的一致性探针竞争抑制,不能被100倍浓度的非标记的突变性探针所抑制.出现结合带的反应中加入Sp1抗体后观察到明显的Supershift现象.A1和C相应探针不能和Hela细胞核蛋白发生结合反应.结论 Ki-67启动子-170～-144、-63～-37和-14～＋12区域上存在能与肿瘤Hela细胞核蛋白结合的Sp1结合位点.
- 李中林钱国伟徐为李望李圆张宝福陈菲菲田卉章龙珍郑骏年
- 关键词：肿瘤细胞KI-67转录因子SP1
