王洪涛
- 作品数：16 被引量：28H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 两个新的前列腺癌相关分泌蛋白的鉴定和表达
- 2010年
- 为了获得代表不同前列腺癌进展阶段的细胞系的胞外蛋白表达谱,验证其中差异表达蛋白是否为分泌蛋白,在细胞水平看其是否有作为前列腺癌血清标志物的潜质,文章利用双向电泳寻找胞外蛋白中差异表达的点,并质谱鉴定其是何种蛋白质。应用RT-PCR方法分析候选分子在8种细胞系中的表达和对雄激素刺激的应答,构建了候选分子的真核表达载体,瞬时转染293T细胞,应用标签抗体Western blotting方法检测验证细胞培养基中候选分子的表达。结果表明:筛选出两个C4-2胞外高表达的分子--磷酸丙糖异构酶-1(Triosephosphate isomerase1,TPI1)和多配体聚糖结合蛋白(Syndecan binding protein,syntenin,ST1);转录水平发现它们与前列腺癌恶性程度相关,并且后者受雄激素的作用下调;二者均为分泌蛋白。磷酸丙糖异构酶-1和多配体聚糖结合蛋白均有作为指示前列腺癌发展阶段的血清标志物的潜质。
- 钱晓龙施庆国庞博武瑞琴俞岚李山虎王洪涛周建光
- 关键词：前列腺癌血清标志物分泌蛋白
- 过表达SGK3肝癌细胞BEL-7402在去甾体激素血清中的抗凋亡研究被引量：9
- 2016年
- 目的:构建过表达血清与糖皮质激素调节激酶3(SGK3)的质粒以及稳定表达SGK3的肝癌细胞系BEL-7402,研究其在去甾体激素胎牛血清(FBS)中的抗凋亡能力。方法:PCR扩增SGK3基因,将扩增产物连接到p CDH载体,构建出p CDH-SGK3的慢病毒载体质粒,将其同空白对照p CDH-NC分别与慢病毒包装载体共转入293T细胞,包装成慢病毒p CHD-SGK3和p CDH-NC;将构建的慢病毒感染肝癌细胞BEL-7402并用嘌呤霉素筛选,Western印迹检测SGK3的表达;观察细胞在FBS及去甾体激素FBS中的生长情况。结果:包装出p CDH-SGK3重组慢病毒,此慢病毒感染肝癌细胞系BEL-7402后获得表达;CCK8实验表明过表达SGK3可促进肝癌细胞的生长,BEL-7042细胞中有雄激素的表达,去甾体激素FBS中细胞生长受到抑制,过表达SGK3可增强肝癌细胞在去甾体激素血清中的抗凋亡能力。结论:在肝癌细胞BEL-7402中过表达SGK3可促进细胞生长,可增强细胞在去甾体激素FBS中的抗凋亡能力。
- 吕文杰王洪涛黄芳王健王芃洪鎏周建光潘耀振李山虎
- 关键词：肝癌BEL-7402细胞
- 运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体被引量：3
- 2016年
- 目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位。方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到p EGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现。结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位。结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础。
- 吕文杰王洪涛黄芳王健王芃洪鎏周建光潘耀振李山虎
- 关键词：重叠延伸PCR
- PC-1解除S6K对AKT信号通路的负反馈抑制
- 2014年
- 目的:通过建立过表达PC-1的前列腺癌LNCaP细胞系及敲低PC-1表达的C4-2细胞系,探究PC-1激活AKT信号通路的分子机制。方法:将PC-1基因及针对PC-1的siRNA序列,分别克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-Myc-MCS-T2A-Puro及干扰载体pSIH1-H1-Puro,包装成慢病毒后分别感染前列腺癌LNCaP及C4-2细胞,通过Western印迹鉴定PC-1过表达及敲低效果,并检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白S6K、AKT的磷酸化水平。结果:PC-1过表达时,S6K磷酸化水平下降,而AKT的磷酸化水平上升。结论:PC-1可以通过抑制S6K激酶活性,解除其对AKT的负反馈抑制作用,从而激活AKT激酶的活性。
- 张晓清王健王洪涛李山虎王芃黄芳洪鎏邓楚中周建光
- 关键词：前列腺癌AKT信号通路
- 外源性表皮生长因子治疗大鼠慢性胃溃疡对原癌基因表达的影响被引量：11
- 1999年
- 目的通过观察外源性ＥＧＦ对大鼠实验性胃溃疡治疗后，对胃粘膜组织学及原癌基因ｃｍｙｃ基因及ｃｆｏｓ基因表达的影响，探讨ＥＧＦ在溃疡治疗中应用的可能性．方法乙酸烧灼法制备溃疡模型．术后次日１５只以西咪替丁１００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）ｓｃ治疗，６只以生理盐水治疗，１４只及１０只对照组大鼠以ＥＧＦ１０μｇ／（ｋｇ·ｄ）ｓｃ治疗，共４ｗｋ．于实验的１ｗｋ及１２ｗｋ分别处死动物，进行组织学及原位杂交检查．结果ＥＧＦ治疗后胃粘膜无异型增生出现．正常胃粘膜ｃｍｙｃ基因表达阴性，ｃｆｏｓ基因表达弱阳性；治疗１ｗｋ后的溃疡边缘ｃｍｙｃ基因、ｃｆｏｓ基因表达弱阳性．实验ｗｋ１２溃疡治愈后胃粘膜ｃｍｙｃ基因表达阴性，ｃｆｏｓ基因表达水平无升高．ＥＧＦ作用正常胃粘膜后，ｃｍｙｃ基因，ｃｆｏｓ基因表达水平无升高．结论外源性ＥＧＦ长期作用于正常及溃疡状态胃粘膜后。
- 陈宝雯王洪涛王洪涛刘正新马清钧
- 关键词：胃溃疡表皮生长因子C-FOS基因
- 4E-BP1、4E-BP1-4A重组慢病毒载体的构建及对胃癌细胞HGC27生长的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建4E-BP1及其T37A、T46A、S65A、T70A突变体4E-BP1-4A基因表达的重组慢病毒载体,研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法:PCR扩增4E-BP1基因及其突变体4E-BP1-4A基因并克隆到pCDH载体,构建成pCDH-4E-BP1、pCDH-4E-BP1-4A,将其与包装载体共转染293T细胞,包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞,Western印迹鉴定病毒载体介导的4E-BP1、4E-BP1-4A蛋白的表达,MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E-BP1、4E-BP1-4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果:包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞;MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E-BP1可抑制胃癌HGC27细胞的生长,过量表达4E-BP1-4A时抑制效果更明显。结论:构建了4E-BP1、4E-BP1-4A的重组慢病毒表达载体,在胃癌HGC27细胞中过量表达4E-BP1可抑制细胞生长,过量表达4E-BP1-4A的抑制效果更明显。
- 罗国兰王洪涛伍飞马李海量张晓清薛萌王健李山虎赵亚丽刘萱周建光
- 关键词：慢病毒载体胃癌细胞生长
- 敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长
- 2010年
- 目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。
- 俞岚钱晓龙施庆国李山虎王洪涛王乐乐周建光
- 关键词：前列腺癌RNA干扰
- PC-1在前列腺癌细胞中促进c-myc基因的表达被引量：2
- 2010年
- 前列腺癌相关基因PC-1(Prostate and colon gene1)是属于癌基因D52家族成员,具有促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的功能。为了研究PC-1发挥这种生物功能的分子机制,文章在PC-1高表达的LNCaP-pc-1及对照LNCaP-zero细胞中,利用RT-PCR和Western blotting等方法检测c-myc基因表达;提取两细胞胞质和胞核蛋白,利用Western blotting分析c-myc上游调节蛋白β-catenin变化;利用c-Myc蛋白抑制剂10058-F4作用前列腺癌细胞C4-2,Western blotting检测PC-1蛋白表达变化。发现PC-1促进c-myc基因表达,并促进β-catenin入核;c-Myc蛋白抑制剂10058-F4可抑制PC-1的表达。结果表明:PC-1在前列腺癌中促进c-myc基因的表达,并且这种促进作用可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。同时,PC-1与c-Myc蛋白间可相互促进,进一步促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长。
- 俞岚施庆国钱晓龙李山虎王洪涛王乐乐周建光
- 关键词：前列腺癌C-MYC基因Β-CATENIN蛋白
- SGEF增强EGFR蛋白稳定性的分子机制及生物学意义
- EGFR信号通路的异常激活与前列腺癌的恶性进展、高Gleason分级及雄激素非依赖进程密切相关。最新的研究发现，在前列腺肿瘤标本中，仅有8％的EGFR发生突变，但却有高达31％的标本中EGFR发生高表达，提示EGFR的高...
- 王洪涛
- 关键词：前列腺癌EGFR蛋白分子机制
- 干扰EphA3的慢病毒lentivirus-1504的构建及其对肝癌细胞7402抑制作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的构建携带干扰癌基因EphA3的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,并研究其对肝癌细胞7402的生长和迁徙的影响。方法构建携带EphA3 siRNA的慢病毒载体质粒并将其与外源EphA3表达质粒共转染至人胚肾细胞293T中,Western印迹检测其干扰EphA3蛋白表达的效果。将pSIH-H1-小发夹RNA(shRNA)-1504及空载体分别与3种包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒lentivirus-1504及对照慢病毒。将所获慢病毒分别感染肝癌细胞7402,并加入嘌呤霉素(puromycin)筛选,1周后将细胞收集。Western印迹检测EphA3蛋白的表达水平,然后分别应用MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验以及划痕实验检测敲低EphA3对肝癌细胞增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力的影响。结果 lentivirus-1504抑制了7402细胞EphA3的表达,敲低EphA3后抑制了7402细胞的增殖能力、存活能力、恶性程度和迁移能力。结论慢病毒lentivirus-1504能够明显抑制肝癌细胞7402的生长能力、存活能力、恶性程度和迁移能力,提示EphA3可能是一个新的肝癌治疗靶点。
- 李海量王洪涛赵亚丽罗国兰张晓清薛萌潘耀振周建光
- 关键词：慢病毒感染癌基因
