王汉洲
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：江苏省重点实验室开放基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- β-1,4-半乳糖苷键在周围神经损伤后的表达变化
- 2003年
- 为了探讨正常和损伤的周围神经中β-1,4-半乳糖苷键的表达定位和表达变化 ,本研究用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素 -I免疫组织化学方法结合 S-10 0和 neurofilam ent免疫双标记 ,研究了大鼠坐骨神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的合成影响。结果表明 ,β-1,4-半乳糖苷键主要分布在正常和损伤坐骨神经的 Schwann细胞中 ,图像分析表明β-1,4-半乳糖苷键的表达在周围神经损伤后 1～ 2 d内有所增高 ,以后随时间延长表达量逐步下降。本研究结果提示 ,周围神经损伤对 β-1,4-半乳糖苷键的表达有影响 ,Schwann细胞表达的β-1。
- 沈爱国周鸣鸣丁斐顾晓松王汉洲顾建新
- 关键词：周围神经损伤
- 细胞周期素D3新功能的研究
- 顾建新宗鸿亮孙茂云魏湲颜王汉洲
- 本项目利用酵母双杂交发现了一些cyclin D3的新结合蛋白，如CDK11p58、ERK3、ATF5、维生素D受体（VDR）、eIF3k，并利用GST-pull down和免疫共沉淀确证了cyclin D3与这些分子间的...
- 关键词：
- 关键词：转录调控凋亡
- 地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用被引量：2
- 2003年
- 为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。
- 沈爱国龚蕾蕾丁斐严美娟王汉洲顾建新
- 关键词：地高辛标记小鼠RNA探针
- 正、反义β1,4半乳糖基转移酶-I表达质粒的构建
- 2002年
- 目的 :为了探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 - I(β1,4 - galactosyltransferase I,β- 1,4 - Gal T- 1)表达水平的生物学意义。方法 :通过分子生物学手段 ,构建正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。:设计β- 1,4 - Gal T- I全长引物 ;提取小鼠脑总 RNA,通过 RT- PCR方法 ,得到全长 β- 1,4 - Gal T- I基因片段 ,将其克隆到 p GEM- T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将β- 1,4 - Gal T- I全长序列克隆到 pc DNA3.1表达载体中。设计反义引物 ,以 p GEM- β- 1,4 - Gal T- I质粒为模板 ,将 PCR产物克隆到 pc DNA3.1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,实验得到了正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。结论 :正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β- 1,4 - Gal T-
- 沈爱国姚登兵丁斐王汉洲顾建新
- 关键词：逆转录-聚合酶链反应小鼠
- β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究
- 2003年
- 为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在
- 沈爱国何江虹丁斐朱敏王汉洲顾建新
- 关键词：Β-1,4-半乳糖基转移酶亚细胞结构肝癌细胞
- Schwann细胞转染Ha-Ras对 β_1 ,4-半乳糖基转移酶I,II,V表达的影响
- 2003年
- 目的 :研究原代Schwann细胞转染持续激活型原癌基因Ha Ras后β1,4 半乳糖基转移酶I,II ,V(β 1,4 galactosyltransferaseI ,II ,V ;β 1,4 GalT I,II,V)表达变化。方法 :构建Ha Ras表达质粒和分离纯化大鼠Schwann细胞 ,将Ha Ras表达质粒转染到Schwann细胞中。采用NorthernBlot方法分析转染细胞中Ha Ras转染情况和转染后β 1,4 GalT I,II,V的表达变化。结果 :原代Schwann细胞转染持续激活型Ha Ras后 ,β 1,4 GalT I随转染时间延长而表达增高 ,而 β 1,4 GalT II及V的表达无变化。 结论 :β 1,4 GalT I随Schwann细胞转染时间Ha Ras延长而表达增高 ,提示原代细胞表面的 β 1,4 GalT I可能与Ha Ras影响原代细胞增殖的信号途径相关。
- 沈爱国丁斐强亮龚蕾蕾王汉洲顾建新
- 关键词：HA-RAS质粒转染原癌基因
- Schwann细胞表达β1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响被引量：6
- 2003年
- 为了探讨周围神经Schwann细胞中不同β1,4半乳糖基转移酶-1(β-1,4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响,本实验首先构建了正、反义β-1,4-GalT-I表达质粒,然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠Schwann细胞,最后将转染的Schwann细胞与分离的大鼠背根神经节共培养;根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积,分析Schwann细胞中不同β-1,4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现:转染正义β-1,4-GalT-I的Schwann细胞能促进共培养神经节神经元轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强,而转染反义β-1,4-GalT-I却有相反的作用。提示周围神经Schwann细胞中表达β-1,4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。
- 沈爱国姚登兵丁斐王汉洲顾建新
- 关键词：SCHWANN细胞背根神经节神经元轴突
- β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响被引量：5
- 2003年
- 目的 探讨周围神经施万细胞表达 β1,4 半乳糖基转移酶 Ⅰ (β 1,4 GalT Ⅰ )对其增殖的影响。 方法 将构建的正、反义 β 1,4 GalT Ⅰ表达质粒 ,转染到施万细胞中 ,分析转染细胞倍增时间、3H TdR掺入情况以及细胞周期变化。 结果 转染正义β 1,4 GalT Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制 ,这种作用随转染浓度增大而增强 ;在G1 /G0 期的细胞数目增加 ,S期的数目减少。而转染反义 β 1,4 GalT Ⅰ有相反的作用。 结论 β 1,4 GalT Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用 ,可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用。
- 沈爱国丁斐顾晓松强亮王汉洲顾建新
- 关键词：施万细胞细胞增殖周围神经损伤流式细胞仪细胞周期
- 雪旺氏细胞表达β-1,4半乳糖基转移酶-I对神经元轴突生长的影响
- 2003年
- 为了探讨周围神经雪旺氏细胞中不同 β -1,4半乳糖基转移酶 -I(β -1,4-galactosyltransferaseI ,β -1,4-GalT -I)表达水平对神经元轴突生长的影响 ,本实验首先构建了正、反义 β -1,4-GalT -I表达质粒 ;然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠雪旺氏细胞 ;最后将转染的雪旺氏细胞与分离的大鼠背根神经节共培养 ,根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积 ,分析雪旺氏细胞中不同 β -1,4-GalT -I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现 :转染正义 β -1,4-GalT -I的雪旺氏细胞能促进共培养神经节轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内 ,这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强 ,而转染反义 β-1,4-GalT -I却有相反的作用。提示周围神经雪旺氏细胞中表达 β -1,4-GalT
- 沈爱国姚登兵丁斐顾晓松王汉洲顾建新
- 关键词：雪旺氏细胞神经元轴突细胞培养神经损伤
- β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究
- 2003年
- 目的 :研究 β1,4-半乳糖基转移酶II和V(β1,4-galactosyltransferaseⅡandⅤ ,β -1,4-GalT -ⅡandⅤ )蛋白表达的亚细胞结构定位。方法 :构建 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ融合绿色荧光蛋白 (greenfluorescenceprotein ,GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,荧光显微镜下观察 β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ在其中表达的亚细胞结构定位。 结果 :β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ主要表达在这两种细胞细胞核旁的高尔基复合体。结论 :β -1,4-GalT -Ⅱ和Ⅴ主要分布在高尔基复合体上 。
- 严美娟沈爱国朱敏王汉洲顾建新
- 关键词：亚细胞结构高尔基复合体
