毕世樑
- 作品数：14 被引量：29H指数：3
- 供职机构：四川大学华西第二医院妇产科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 构建阴道毛滴虫铁氧还蛋白 (ferredoxin ,Fd)基因重组质粒 ,并进行克隆及序列分析。 方法 根据Fd基因已知序列 ,设计合成 1对引物 ,应用螯合树脂 (Chelex 10 0 )提取基因组DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增出Fd基因 ,克隆入pMD 18T载体 ,转化大肠埃希菌JM 10 9感受态细胞 ,经PCR及酶切鉴定、测序。 结果 Fd基因体外扩增产物长度为 3 0 6bp ,重组质粒经PCR及酶切鉴定结果表明获得正确重组子 ,测序结果表明其片段与已知序列吻合。 结论 克隆出阴道毛滴虫Fd基因。
- 谢辉王雅静帖超男毕世樑刘佩娜
- 关键词：阴道毛滴虫蛋白基因PCR测序酶切增产
- 阴道毛滴虫多克隆抗体的制备及Fd基因的原核表达
- 2006年
- 目的-将阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因在大肠埃希菌中诱导表达。方法-制备阴道毛滴虫可溶性抗原,多点注射免疫家兔,获得的血清用ELISA测定其抗体效价。将原核表达重组质粒pET3C-Fd转化入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。结果-制备出抗阴道毛滴虫多克隆抗体,抗体效价在1∶8000以上,用于免疫印迹实验。经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)分析,重组质粒在大肠埃希菌中表达出Fd。结论-在大肠埃希菌中表达出了Fd。
- 谢辉王雅静帖超男毕世樑刘佩娜廖琳
- 关键词：阴道毛滴虫铁氧还蛋白多克隆抗体基因表达
- 米索前列醇致晚孕子宫破裂被引量：7
- 2000年
- 毕世樑徐克惠罗智香
- 关键词：药物引产米索前列醇子宫破裂病案讨论
- 阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶基因真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶(adenynate kinase,AK)基因真核表达载体并予以鉴定。方法根据AK基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从阴道毛滴虫基因组DNA中扩增出AK基因,并将其克隆入pMD18-T Simple载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用BLAST软件辅助分析所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列的同源性。克隆载体PMD-18T-AK经限制性内切酶BamHI和XbaI双酶切,得到含这2个酶切位点之AK DNA片段,T4连接酶连接到含有这2个酶切位点的真核表达载体pcDNA3.1(+),构建出重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-AK,经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实DNA片段大小的正确性。结果经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实含大小正确的AK DNA片段。结论成功地构建了基因真核表达载体。
- 帖超男王雅静谢辉毕世樑刘佩娜廖琳
- 关键词：阴道毛滴虫腺苷酸激酶基因克隆真核表达载体
- 阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶基因的克隆及序列分析
- 2005年
- 目的-克隆阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶 (AK) 基因, 并测定其序列, 进行序列分析。方法-根据AK基因已知序列设计合成一对引物, 应用PCR技术从阴道毛滴虫基因组DNA中扩增出AK基因, 并将其克隆入pMD18 T simple载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后, 用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用BLAST软件辅助分析所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列的同源性。结果-PCR扩增得到特异的阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶基因序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的PT AK重组质粒。测序表明, 所克隆的AK基因大小为690 bp, 编码229个氨基酸。序列分析表明, 所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列具有高度同源性 (99 9%)。结论-克隆了阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶基因, 序列测定及同源性分析表明, 所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列具有高度同源性。
- 帖超男王雅静谢辉毕世樑刘佩娜廖琳
- 关键词：阴道毛滴虫腺苷酸激酶酶基因阳性克隆酶切同源性
- 阴道毛滴虫AK基因原核表达质粒的构建及在大肠埃希菌中的表达
- 2009年
- 目的构建阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶(adenynate kinase,以下简称AK)基因原核表达质粒并予以表达。方法AKDNA的克隆载体PMD-18T-AK经限制性内切酶BamHI和XbaI双酶切,得到含这2个酶切位点之AKDNA片段,T4连接酶连接到含有2个酶切位点的原核表达载体PUC18,构建出重组原核表达质粒PUC18-AK,经PCR、酶切鉴定。重组质粒PUC18-AK经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在大肠埃希菌中进行初步表达。结果AK基因体外扩增产物大小均为690bp,重组原核表达质粒经PCR及酶切鉴定表明获得正确重组子。在大肠埃希菌中表达出AK蛋白,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析与理论预测值相符。经蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定具有免疫原性。结论成功地构建了AK基因原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达了AK蛋白。
- 帖超男王雅静谢辉毕世樑刘佩娜廖琳
- 关键词：阴道毛滴虫腺苷酸激酶基因原核表达质粒
- 妊娠黄疸对母儿的影响123例临床分析
- 1999年
- 蔡压西徐克惠毕世樑林丽
- 关键词：妊娠黄疸孕妇胎儿
- 阴道毛滴虫黏附蛋白33基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的构建并鉴定阴道毛滴虫黏附蛋白33基因(adhesionprotein33gene,ap33gene)真核表达载体。方法提取阴道毛滴虫分离株基因组DNA,PCR扩增黏附蛋白33基因,克隆入pMD-18T线性质粒,重组子经双酶切、PCR鉴定及测序分析。鉴定出的重组质粒pMD-18T-ap33和pcDNA3.1(+)空质粒经BamHⅠ和XbaⅠ限制性内切酶双酶切,凝胶电泳后回收ap33目的基因和pcDNA3.1(+)空质粒酶切片段,将ap33基因亚克隆入pcDNA3.1(+)载体并进行筛选和鉴定。结果PCR扩增出阴道毛滴虫黏附蛋白33基因,重组质粒pMD-18T-ap33经双酶切,PCR及序列分析,ap33基因的长度为930bp,与GenBank上公布的ap33基因序列同源性达99%。经凝胶电泳、PCR鉴定和限制性酶切鉴定,构建出pcDNA3.1(+)-ap33重组质粒。结论成功构建了阴道毛滴虫pMD-18T-ap33克隆质粒及pcDNA3.1(+)-ap33重组质粒。
- 杨树国王雅静帖超男谢辉毕世樑刘佩娜廖琳
- 关键词：阴道毛滴虫真核表达载体
- 阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因真核表达质粒的构建
- 2006年
- 作者用螯合树脂(Chelex-100)提取阴道毛滴虫基因组DNA,PCR扩增出阴道毛滴虫铁氧还蛋白(ferredoxin,Fd)基因,克隆入pMD-18T载体,亚克隆至pcDNA3·1(+)真核表达质粒。经PCR及酶切鉴定,Fd基因体外扩增产物为306bp,与已知序列吻合。成功构建了Fd基因的真核表达质粒。
- 谢辉王雅静帖超男毕世樑刘佩娜
- 关键词：阴道毛滴虫铁氧还蛋白真核表达质粒
- 四川地区阴道毛滴虫内人型支原体的PCR检测被引量：3
- 2009年
- 从临床上分离获得20株阴道毛滴虫虫株,经纯化培养后,提取基因组DNA。以人型支原体16S rDNA序列设计特异性引物,利用PCR技术检测阴道毛滴虫内的人型支原体,结果有13株为人型支原体阳性,感染率为65%,表明阴道毛滴虫与人型支原体的共生关系在中国四川具有普遍性。
- 朱晓燕王雅静毕世樑张仁刚
- 关键词：阴道毛滴虫人型支原体PCR
