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牛碱性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的生物学活性: 2007年; 采用巢式PCR方法克隆了牛18ku-bFGF基因完整的编码序列,并构建了原核表达载体pET-28a-bFGF,将其转化大肠杆菌BL21,在25℃低温条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达5 h,用Ni-NTA亲和纯化细胞裂解上清液,经Western-blotting检测,结果显示,在特定的诱导条件下,重组牛bFGF基因在大肠杆菌中获得了表达,并且主要以可溶性状态存在于细胞中。经检测,纯化后的重组蛋白能显著促进成纤维细胞的增殖(P<0.05),其活性与商品用重组人18ku-bFGF没有差异(P>0.05)。表明,所获得的可溶性重组牛18ku-bFGF蛋白具有较高的生物学活性,可用于后续研究工作。; 刘华忠杨兴元李晴安晓荣陈永福钟杰平李琨; 关键词：原核表达活性检测

小鼠体外成熟和体外受精卵的DNA甲基化和组蛋白修饰: 与体内受精胚胎相比，通过卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精(IVF)获得的胚胎发育能力较差。近年的研究显示，体外操作或体外环境可能对胚胎的表观遗传修饰有不利影响，从而导致胚胎的发育能力减弱。为验证这一可能原因，本论文以...; 张静安晓荣李晴崔秀宏刘琳裴业春陈永福侯健; 关键词：DNA甲基化组蛋白修饰体外成熟动物繁殖小白鼠; 文献传递

应用重组肌肉抑制素C-端重组蛋白提高仔鼠出生质量的研究被引量：2: 2010年; 为探讨利用重组肌肉抑制素促进肌肉生长的可能性,本研究原核表达并纯化了肌肉抑制素C-端重组蛋白。将雌性小鼠同雄性小鼠合笼,妊娠后分笼饲养。应用重组蛋白免疫雌性昆明白小鼠。利用间接ELISA法检测抗血清效价。每周测母鼠及仔鼠体质量1次。结果表明:(1)免疫后对照组和试验组母鼠体质量差异不显著(P>0.05)。在妊娠后期(免疫后第11周),两组间体质量出现差异(P<0.05),试验组为(56.23±3.37)g,而对照组为(54.11±3.18)g。试验组体质量在第12周达到(79.16±3.72)g,而对照组为(75.23±3.44)g,差异极显著(P<0.01)。分娩后,这种差异消失(P>0.05)。(2)仔鼠出生体质量在2处理组间差异极显著(P<0.01),试验组仔鼠出生体质量比对照组增加25.8%左右;但在生长阶段仔鼠体质量差异有逐渐缩小的趋势。结论:应用肌肉抑制素C-端重组蛋白免疫母鼠可以显著提高仔鼠出生体质量。; 马毅李晴陈小强王文杰关宏安晓荣陈永福; 关键词：免疫抗体体质量

绵羊肌肉抑制素C-端的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2009年; 为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理,进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备。首先将绵羊myostatin基因C-端克隆入含组氨酸标签的表达载体pET-30a-c(+)中,转化大肠杆菌BL21后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化重组蛋白,薄层扫描及Bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量。应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测多克隆抗体效价,用Western blot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性。结果,薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上,Bradford法检测蛋白浓度约5 mg.mL-1,制备的抗血清效价可达1∶250 000以上,Western blot检测证明抗体特异性良好,免疫细胞化学染色表明抗血清可检测到肌肉细胞中内源性myostatin的表达,说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究,有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理。; 马毅舒建洪李晴关宏安晓荣陈永福; 关键词：绵羊克隆原核表达纯化多克隆抗体

应用乙肝核心抗原增强肌肉抑制素免疫原性的研究被引量：1: 2009年; 为提高肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)免疫原性,进行了乙肝核心抗原(HBcAg)作为分子佐剂可能性的研究。利用PCR方法获得了MSTN的C端片段,并分别在乙肝核心抗原的N端、C端及中间位点融合,构建了3个融合表达克隆:pET-30a-MSTN/HBcAg(N)、pET-30a-MSTN/HBcAg(C)和pET-30a-MSTN/HBcAg(M),转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化融合蛋白。应用重组蛋白免疫小鼠后利用间接ELISA法检测抗血清效价。结果表明:融合蛋白免疫效果要显著优于MSTN(P<0.05);融合蛋白MSTN/HBcAg(M)的免疫效果最佳。乙肝核心抗原可以作为分子佐剂以增强肌肉抑制素免疫原性。; 马毅陈小强王文杰李晴关宏安晓荣陈永福; 关键词：乙肝核心抗原融合蛋白免疫原性

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李晴