李利峰
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省科技重大专项博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选被引量：4
- 2006年
- 本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。
- 陈瑛炜罗文新王明桥王晋李利峰袁权张军夏宁邵
- 关键词：噬菌体抗体库
- 三明小湖赤枝栲林地部分矿质元素及土壤理化性质研究被引量：4
- 2002年
- 分析测定福建三明小湖赤枝栲林部分矿质元素及土壤理化因子 ,结果表明 :该地区土壤 pH值为 4 2 4 ,全N平均含量为 0 0 84 2 % ,全P(P2 O5% )为 0 0 15 5 % ,有机质为 3 7874 %。该地土壤的全N、全P和有机质均不高。该地区土壤Mg元素含量为 6 2 6 0 4 4mg kg-1,Ca为 15 6 5 88mg kg-1,Mn为 80 4 4 4 3mg kg-1,Fe为 2 6 179 6mg kg-1,Co为 3 3335mg kg-1,Ni为12 94 6 7mg kg-1,Cu为 15 2 95 3mg kg-1,Zn为 2 6 9116mg kg-1,Mo为 0 4 6 4 1mg kg-1,Cd为 0 0 4 70mg kg-1,Pb为 9 786 5mg kg-1。土壤矿质元素中 ,Ca、Fe含量偏高 。
- 连玉武朱小龙李利峰
- 关键词：矿质元素林地土壤
- 抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2004年
- 通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3 1/Hygro和pcDNA3 1(+)质粒中,共转染中华仓鼠卵巢癌细胞(CHO)细胞。RT-PCR结果表明,转染的CHO细胞转录了嵌合重链及轻链基因,间接ELISA及Westernblot结果表明:翻译出的两种多肽在细胞内正确组装成嵌合抗体分子,并可分泌至细胞外,表达的嵌合抗体保留了原鼠单抗的抗原结合特异性及对8H3结合抗原的增强作用。8C11嵌合抗体的成功表达可降低鼠源性,为探讨戊肝抗体治疗的可能性奠定了基础。
- 罗文新李利峰许辰煜程通管宝全张军夏宁邵
- 关键词：嵌合抗体戊肝重链可变区CHO细胞轻链
- 多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用被引量：5
- 2006年
- 目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。
- 王晋罗文新李利峰陈瑛炜王明桥张军夏宁邵
- 关键词：单链抗体多样性
- 抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆菌中进行表达。用ELISA、Westernblot检测scFv的活性。结果 :SDS PAGE表明 ,13D8的scFv在E .coli中得到高效表达 ,表达量达菌体总蛋白的 2 6 .8%左右 ,表达产物主要以包涵体的形式存在。间接ELISA和Westernblot检测表明 ,表达的 13D8的scFv能与HEVOFR2区中一段重组蛋白(NE2 )特异结合。竞争ELISA表明 ,scFv与原鼠mAb识别的为同一表位。结论 :成功地表达出具有免疫学活性的 13D8的scFv。
- 李利峰罗文新顾颖朱子恒王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：HEV单链抗体中和抗体NE免疫学活性
