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亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选被引量：4: 2006年; 本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。; 陈瑛炜罗文新王明桥王晋李利峰袁权张军夏宁邵; 关键词：噬菌体抗体库

高致病性H5N1禽流感病毒血凝素蛋白（HA）模拟表位的初步研究: 禽流感/(Avian influenza, AI/)是由A型流感病毒引起的烈性传染病。全球自2003年以来,已有10个国家先后报告发现人感染H5N1病例,导致170多名患者死亡,人类防控行动不可懈怠。在禽流感病毒编码的各...; 王明桥; 关键词：禽流感噬菌体肽库表位疫苗; 文献传递

一种新型均相荧光共振免疫检测法的建立: ：建立一种用于检测抗原的新型均相荧光共振免疫检测法(hFRIA).方法：利用大肠杆菌表达系统,在HBVpre-S1单克隆抗体MA18/7的重链可变区的N端通过3×Ala与绿色荧光蛋白(GFP)进行融合表达,得到...; 管宝全罗文新王明桥程通顾颖张军夏宁邵; 关键词：绿色荧光蛋白小分子抗体

抗HBV preS1嵌合抗体的真核表达及活性分析: 2007年; 目的通过真核系统表达抗HBVpreS1嵌合抗体4D11并分析其活性。方法通过RT-PCR方法从分泌抗乙型肝炎病毒preS1的鼠源单克隆抗体4D11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区（VH）、轻链可变区（Vk）序列，并分别克隆到含有人71重链和X轻链恒定区序列的pcDNA3．1-AH和pcDNA3．1-Ak质粒中，共转染人胚肾细胞变种（293FT）细胞。通过Western blot、竞争ELISA、阳性血清阻断及血清中preS1的检测实验来分析其活性。结果轻重链基因在细胞内正确组装成嵌合抗体分子并分泌至细胞外，具有结合活性。嵌合抗体可以很好的与病毒preSl结合，对阳性血清的检测效果与鼠单抗一致。结论成功的利用293FT细胞表达了4D11嵌合抗体，抗体保留了原鼠单抗的特异性和活性，为探讨乙肝抗体的治疗提供了试验资料。; 陈瑛炜罗文新王晋王明桥顾颖林亦伟张军夏宁邵; 关键词：乙型肝炎病毒嵌合抗体真核表达

高致病性禽流感病毒H5N1中和抗体的单链抗体构建与活性鉴定被引量：4: 2007年; 在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中,10F7scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性,而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中,10F7scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。; 方钟罗文新王明桥陈瑛炜张军陈鸿霖管轶夏宁邵; 关键词：单链抗体血凝抑制

多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用被引量：5: 2006年; 目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。; 王晋罗文新李利峰陈瑛炜王明桥张军夏宁邵; 关键词：单链抗体多样性

分子对接预测H5亚型禽流感病毒的广谱中和表位被引量：1: 2008年; H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8H5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8H5Fab的三维空间结构.8H5Fab与3种HA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8H5抗体与HA蛋白的作用模式与HA宿主来源无关,但与HA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8H5抗体识别的广谱中和表位是由HA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为H5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据。; 颜渊清李少伟杨春燕罗文新王明桥陈毅歆罗海峰吴婷张军夏宁邵; 关键词：H5N1禽流感病毒分子对接血凝素蛋白中和表位

噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究被引量：4: 2006年; 目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索。结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高。包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10mg/L抗原竞争洗脱60min,可得到较高的阳性率。结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整。; 王明桥罗文新陈瑛炜袁权王晋张军夏宁邵; 关键词：噬菌体抗体库

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王明桥