张琪
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华南农业大学林学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 棉卷叶野螟泛素基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：5
- 2008年
- 本研究用RT-PCR方法,克隆了棉卷叶野螟Haritalodes derogata(Fabricius)泛素基因编码区,GenBank登录号为 EU580145。序列分析表明,该编码区长228 bp,编码76个氨基酸,推测的编码蛋白的相对分子质量和等电点分别为 8.53 kD和5.83。同源性比较发现,棉卷叶野螟泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有93 %以上的相似性。系统发育树显示棉卷叶野螟与斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabricius)遗传距离较近,通过同源建模获得了该棉卷叶野螟基因编码蛋白的理论三维结构。将棉卷叶野螟泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体 pET-32a-ub,经IPTG诱导,棉卷叶野螟泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。本研究成功克隆了棉卷叶野螟泛素基因的编码区,并经Western blotting分析证明实现了该基因的原核表达,为进一步研究其在该昆虫体内的作用机理奠定了基础。
- 张宇宏林同张琪常润磊温秀军
- 关键词：泛素基因克隆基因序列分析原核表达
- 同安钮夜蛾核型多角体病毒pst I-G片段克隆及序列分析
- 2009年
- 【目的】测定同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)pst I-G片断的序列,了解OpdiNPV的遗传结构和与其它昆虫病毒的进化关系。【方法】用pstⅠ酶切病毒基因组,电泳分离并回收pst I-G片段,连接到PUC18,转化入E.coli DH 5α,挑取阳性菌落测序。【结果】该片段长度为5056bp,有4个ORF,分别编码ODV-E66的C末端(EU 623602),P87/VP80的C末端(EU 732665),ODV-Ec43(EU 617337)和Ac108(EU 732666)。ac108基因和odv-ec43起始密码子上游都有1个晚期启动子结构域TAAG,odv-ec43基因起始密码子上游有2个早期转录起始元件CAGT;由odv-ec43推导的蛋白有2个跨膜螺旋、3个N-糖基化位点、1个N端酰基化位点、7个PKC磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和4个CKⅡ磷酸化位点;p87/vp80基因终止密码子下游有polyA信号。【结论】氨基酸序列同源分析和相似性分析显示Ac108、ODV-E66和P87/VP80与其它昆虫病毒差异较大,ODV-Ec43的保守性较高。
- 常润磊林同张宇宏张琪温秀军
- 松褐天牛泛素基因的克隆及表达被引量：4
- 2009年
- 设计一对简并引物,应用RT-PCR技术,从松褐天牛细胞中克隆泛素基因的编码区,GenBank登录号EU433567。序列分析表明:该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8.49ku,理论等电点为5.83。同源性比较发现,松褐天牛泛素基因与其他10种昆虫泛素基因在氨基酸水平上具有94%～98%的相似性。基于核苷酸水平上的系统发育树显示松褐天牛与斜纹夜蛾、草地贪夜蛾遗传距离较近;通过同源建模获得了松褐天牛泛素基因编码蛋白的理论三维结构。将泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体pET-32a-ub,经IPTG诱导,松褐天牛泛素基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并经Westernblotting分析验证该表达,为研究泛素在松褐天牛体内的功能奠定基础。
- 林同张宇宏常润磊张琪温秀军
- 关键词：松褐天牛泛素基因克隆原核表达
