张珍
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组人胸腺素β_4基因的克隆、表达、纯化、鉴定及活性检测被引量：5
- 2008年
- 目的:利用基因工程的方法原核表达重组人胸腺素β4(Tβ4)并对其进行纯化和鉴定.方法:使用大肠杆菌偏爱密码子合成人Tβ4全长基因,构建了Tβ4的二串联体基因(Tβ4②),将其克隆入表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达后,经盐析、疏水层析和离子交换层析纯化重组蛋白,采用免疫印迹和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对重组蛋白进行鉴定.结果:获得了纯化的重组Tβ4②蛋白,并具有生物学活性.结论:成功构建、表达和纯化了Tβ4②,为其功能研究奠定基础.
- 张珍游颜杰李维娜薛晓畅赵宁包春杰韩苇张英起
- 关键词：胸腺素Β4串联重复序列基因表达
- PTD-SARA融合蛋白的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达PTD-SARA融合蛋白,并对其进行纯化和鉴定。方法使用大肠杆菌偏爱密码子合成PTD-SARA全长基因,将其克隆入载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA,转化感受态大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定及N-端测序。结果重组表达质粒pQE-30-PTD-SARA经双酶切及测序鉴定证明构建正确。1.0mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的25%,主要以包涵体形式存在。纯化的融合蛋白纯度为94%,浓度为0.2mg/ml,且具有良好的反应原性,N-端有14个氨基酸。结论已成功表达并纯化了PTD-SARA融合蛋白,为其功能的研究奠定了基础,也为临床防治肾脏纤维化提供了一个新的策略。
- 宋扬张珍张英起黄晨
- 关键词：纯化慢性肾病纤维化
- 重组人B7-H4IgV融合蛋白的表达、纯化及活性被引量：1
- 2008年
- 目的表达、纯化重组人B7-H4IgV融合蛋白,并检测其活性。方法将人B7-H4胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化,并进行Westernblot鉴定。用纯化的rhB7-H4IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定小鼠抗血清的活性;免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果表达的rhB7-H4IgV蛋白约占菌体总蛋白的25%,纯化后蛋白纯度为93%,浓度约为0.5mg/ml,与抗His单抗可产生特异性反应条带。免疫昆明小鼠产生的抗血清效价可达1∶10000,可与SP2/0肿瘤细胞结合。rhB7-H4IgV蛋白对SP2/0移植瘤生长具有一定的抑制作用。结论已成功表达并纯化了重组人B7-H4IgV融合蛋白,纯化蛋白可诱发小鼠体内免疫应答,产生的抗体能与表达B7-H4的肿瘤细胞SP2/0结合,rhB7-H4IgV蛋白在一定程度上能抑制SP2/0移植瘤的生长。
- 朱文华姜昌丽张存游彦杰王伟华刘艳张珍冉永刚叶星明李维娜韩苇张英起
- 关键词：原核表达活性肿瘤免疫治疗
