张国鹏
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HSV1-sr39tk/FIAU报告系统监测hVEGF165基因治疗股骨头缺血坏死的实验研究
- 目的探索HSV1-sr39tk/FIAU报告系统监测股骨头缺血坏死细胞及hVEGF165基因联合治疗的可行性。方法将报告基因HSV1-sr39tk与治疗基因hVEGF165通过IRES技术连接,构建同源重组腺病毒载体(A...
- 王朋张国鹏兰晓莉张永学
- 利用报告基因rNIS监测大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌的可行性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 研究大鼠钠碘转运体（rNIS）作为报告基因监测大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSC）移植至大鼠心肌的可行性.方法 构建含rNIS/增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组腺病毒载体（Ad/rNIS/EGFP）,转染rBMSC后应用荧光显微镜观察细胞表达EGFP情况.按随机数字表法将健康大鼠分为3组,rNIS组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC 抑制组大鼠心肌内移植转染rNIS的rBMSC,γ显像前口服高氯酸纳 对照组大鼠心肌内移植未转染病毒的rBMSC.细胞移植到大鼠心肌后,以99TcmO4-作为报告探针对大鼠进行γ显像,随后进行生物学分布实验,用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot分别检测心肌组织中rNIS基因和蛋白表达水平,免疫组织化学检测心肌组织中CD11b、CD29、CD34、CD44、CD45和CD90表达情况.组间计量资料的差异用t检验分析.结果 重组腺病毒转染后,荧光显微镜下可见到高表达EGFP的rBMSC.rNIS转染的rBMSC移植到大鼠心肌后,γ显像能清晰显示移植部位的心肌,心肌/右前肢放射性比值（RUR）为6.7±0.4,对照组RUR为3.0±0.2,二者之间比较差异有统计学意义,t=2.78,P=0.03.生物学分布实验中,对照组心肌组织的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）为2.5±0.4,明显低于rNIS组的60.2±20.8,差异有统计学意义,t=7.13,P＜0.001.移植心肌组织中rNIS的基因和蛋白都高表达,而对照组心肌组织rNIS表达较低.移植转染细胞的心肌组织中,CD29、CD44、CD90表达阳性,CD11b表达弱阳性,CD34、CD45表达阴性.结论 rNIS可作为报告基因有效监测rBMSC移植大鼠心肌.
- 胡硕兰晓莉曹卫曹国祥张国鹏张斌青吴涛常伟张永学
- 关键词：心肌干细胞钠碘转运体放射性核素显像
- 心肌缺血性疾病基因治疗及分子影像监测进展
- 2008年
- 心血管疾病是严重危害人类健康的疾病，目前已成为导致死亡的主要疾病之一。随着对心血管病发病的分子机制的研究进展，以及心血管病基因治疗的实验研究，基因治疗已成为心肌缺血治疗具有前景的有效方法，其中有些已经进入临床试验以验证其可行性和有效性。而如何在活体内无创性监测治疗基因的表达及其治疗效果也成为当今亟待解决的课题。
- 张国鹏张永学
- 关键词：心肌缺血基因疗法分子诊断技术
- 报告基因系统HSV1-sr39tk/FIAU监测治疗基因表达的体外研究被引量：1
- 2010年
- 构建HSV1-sr39tk为报告基因,以VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体Ad5-sr39tk-IRES-VEGF165(Ad5-SIV),将其以不同感染复数(MOI=0、10、25、50、75、100)感染大鼠骨髓间充质干细胞,用免疫激光共聚焦技术检测HSV1-sr39tk与VEGF165的表达。用酶联免疫吸附试验(ELISA)监测感染病毒后细胞培养上清中VEGF165蛋白分泌量;细胞摄取131I-FIAU实验监测HSV1-sr39tk报告基因的表达情况,以腺病毒包装增强型绿色荧光蛋白(Ad5-EGFP)为对照。结果显示:免疫共聚焦显微镜可观察到HSV1-sr39tk蛋白与VEGF165蛋白在细胞内成功表达;VEGF165蛋白分泌情况与MOI间呈线性正相关(P<0.05);感染Ad5-SIV后细胞对131I-FIAU摄取率增高与MOI间呈线性正相关(P<0.05)。不同时间摄取实验结果显示:30-150min间细胞摄取率迅速增高,之后增高减慢,进入平台期。MOI相关摄取结果与MOI相关ELLISA结果具有较好相关性(P<0.05)。Ad5-SIV经感染后可在大鼠骨髓间充质细胞中成功表达,并且治疗基因VEGF与报告基因HSV1-sr39tk的表达呈正相关,说明可通过报告基因HSV1-sr39tk监测治疗基因VEGF165的表达,为动物水平报告基因显像提供理论支持。
- 张国鹏兰晓莉陈铨曹卫何勇张永学
- 关键词：血管内皮生长因子骨髓间充质细胞报告基因基因治疗
- ^99Tc^m-亚锡葡庚糖酸钠结合GGC序列监测基因治疗的实验研究被引量：4
- 2011年
- 目的 构建以金属结合肽（双甘氨酰半胱氨酸,即GGC序列）为核素报告基因、人VEGF165为治疗基因的重组腺病毒载体,以99Tcm-GH为报告探针,探讨该报告系统监测治疗基因表达的可行性.方法 pcDNA3-VEGF165质粒线性化后,将金属结合肽GGC序列连于VEGF165基因C端,通过内部核糖体切入位点（IRES）连接增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,构建重组腺病毒载体Ad5-VEGF165GGCmotif-IRES-EGFP（Ad5-VIE）,同时构建腺病毒包装EGFP（Ad5-EGFP）为对照.以不同感染复数（MOI=0,10,25,50,100）Ad5-VIE感染大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）后,用99Tcm-GH为报告探针,研究感染细胞摄取动力学（30,60,90和120 min）情况,以检测GGC序列在MSC中的表达,并与实时定量PCR、Western-blot蛋白印迹、免疫组织化学等方法鉴定的VEGF165表达进行对比分析.通过荧光显微镜及实时定量PCR检测EGFP在细胞中的表达.采用SPSS 13.0软件进行统计学处理,组间比较运用独立样本成组t检验、q检验和直线（Pearson）相关分析.结果 以Ad5-VIE感染MSC后,不同MOI摄取实验结果示细胞对99Tcm-GH的摄取率随病毒MOI的增加而逐渐增加（r2=0.86,P＜0.05）,并且在MOI=100时达到（7.94±0.75）%;不同时间摄取实验示随99Tcm-GH孵育时间延长,细胞摄取率逐步增高,至120 min时达到（7.72±0.22）%.Ad5-VIE感染组与Ad5-EGFP感染组摄取率在各个不同时间点差异均有统计学意义（t=15.10～54.92,P均＜0.05）.在mRNA水平上,VEGF165及EGFP表达均随病毒MOI增加而增加（r2=0.99,P＜0.05）.不同MOI下细胞对99Tcm-GH的摄取与VEGF165蛋白表达呈较好的相关性（r2=0.90,P＜0.05）.免疫组织化学检查结果表明人VEGF165目的 基因在MSC中成功表达.荧光显微镜下可以观测到被感染细胞中的EGFP蛋白.结论 成功构建的重组腺病毒系统Ad5-VIE感染MSC对99Tcm-GH的摄取与VEGF165表达呈正相关.以GGC多肽为报告基因可以监测治疗基因VEGF165的表达,为
- 张国鹏兰晓莉何勇陈铨张永学
- 关键词：甘氨酸半胱氨酸肽类
- ^99Tc^m-HYNIC-Annexin V动脉粥样硬化显像的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-膜联蛋白V（Annexin V）显像检测兔动脉粥样硬化（AS）病变的价值。方法5只雄性日本大耳白兔通过免疫损伤血管和12周高脂饮食制备成AS模型（实验组），白兔耳缘静脉按体质量注射^99Tc^m-HYNIC-Annexin V 37MBq／kg，分别行活体和离体血管的^99Tc^m-HYNIC—Annexin V显像。5只未经特殊处理的同种白兔行活体显像作为对照。对实验组兔的主动脉分段后，测定各片段质量和放射性计数，并进行病理学和免疫组织化学检查。采用SPSS 13．0软件对数据进行统计学处理。结果显像剂注射后2h，实验组兔主动脉可见放射性摄取达峰值，而对照组未见明显的放射性摄取，前者靶／非靶（T／NT）比值（2．70±0．26）明显高于后者（1．30±0．13，t=1．99，P〈0．05）。实验组兔的主动脉血管斑块片段放射性摄取（每克组织百分注射剂量率，％ID／g）为（0．075±0．016）％ID／g，明显高于非斑块血管片段[（0．035±0．013）％ID／g，前者是后者的（4．55±0．99）倍，t=4．77，P〈0．001]；两者的凋亡细胞指数（AI）分别为（40．53±14．94）％和（11．90±7．09）％，差异具有统计学意义（t=2．54，P〈0．01）。所有血管片段的放射性摄取（％ID／g值）与AI呈正相关（r=0．98，P〈0．001）。结论^99Tc^m-HYNIC-Annexin V可以无创性地检测AS斑块的凋亡。
- 黄代娟兰晓莉张永学张国鹏常伟张斌青
- 关键词：动脉粥样硬化膜联蛋白放射性核素显像
