常志广
- 作品数：7 被引量：11H指数：3
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 恶性疟原虫3D7株AP核酸内切酶的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2016年
- 为研究恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）3D7株AP核酸内切酶（AP endonuclease）的功能,通过PCR的方法扩增PF3D7_0305600（292-1 137 bp）,构建克隆载体。测序正确后,将该片段插入到pET-28a和p GEX-4T-1,构建重组表达载体p ET-28a-Ae、p GEX-4T-1-Ae。将表达载体转入BL21-Codon Plus表达重组蛋白r-Ae-His和r-Ae-GST,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,r-Ae-His免疫家兔制备多克隆抗体,并用ELISA检测抗血清效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明：表达的r-Ae-His分子量约为39 ku,r-Ae-GST分子量约为60 ku。制备的多克隆抗体能够特异性地识别天然蛋白,可用于恶性疟原虫3D7株AP核酸内切酶的后续研究。
- 土志伟赵帅杰常志广陆慧君姜宁陈启军
- 关键词：恶性疟原虫基因克隆多克隆抗体药物靶点
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并进行鉴定。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心法对猪HEV进行纯化,免疫BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选能稳定分泌抗HEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单抗进行生物学鉴定。结果筛选出4株能稳定分泌抗HEV单抗的杂交瘤细胞株2H2、2A1、1E2、4D4。经鉴定,4株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水抗HEV的ELISA效价可达1∶12800～1∶51200,其中3株HI效价可达1∶24～1∶28,另1株为0。4株杂交瘤细胞分泌的单抗与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;杂交瘤细胞染色体数为83～103;除2A1单抗为IgG2b外,其他3株均为IgG1;Westernblot分析表明,2H2、2A1和4D4能识别HEV的血凝素-酯酶蛋白(HE),1E2可识别纤突蛋白(S)。结论已成功制备出抗HEV的单克隆抗体,为HEV快速检测试剂的研制奠定了基础。
- 陈克研赵传博贺文琦陆慧君高巍常志广王丽高丰
- 关键词：血凝性脑脊髓炎病毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 疟原虫TatD-like DNase的功能分析及与虫体致病性的相关性分析
- 疟原虫对宿主的危害主要发生在血液期,即虫体在宿主红细胞内的发育繁殖过程。然而,多年来对疟原虫的生物学及致病机理的解析一直存在着很多空白。这影响着疫苗的研制和抗疟药物的开发。在本实验中,我们通过生物信息学分析首先分析潜在的...
- 常志广
- 关键词：疟原虫脱氧核糖核酸酶致病机理ETS
- 文献传递
- 恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质(PF3D7_0811600)的表达纯化及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2016年
- 利用大肠杆菌原核表达并纯化恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3D7_0811600,免疫家兔制备特异性多克隆抗体,通过对虫体天然蛋白的识别,分析PF3D7_0811600在虫体内的表达。采用PCR技术从恶性疟原虫3D7株总DNA中获得PF3D7_0811600基因的目的片段,连接到p MD18-T克隆载体,得到的克隆质粒经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建重组原核表达质粒p ET-PF3D7_0811600和p GEX-PF3D7_0811600,通过优化表达条件,分别在大肠杆菌中得到高效表达,并用亲和层析柱纯化目的蛋白质。用纯化的His标签重组蛋白质免疫家兔,用Western Blot方法检测制备的特异性多克隆抗体。结果表明:成功纯化并获得重组蛋白质,用间接ELISA方法检测多抗效价达到1∶16 000,用Western Blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性,能够识别虫体天然蛋白。恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3D7_0811600在虫体晚期表达,说明该蛋白在虫体发育的晚期发挥重要作用,猜测其可能与裂殖子入侵宿主红细胞有关。
- 周健华魏晓燕常志广姜宁陆慧君陈启军
- 关键词：恶性疟原虫裂殖子原核表达多克隆抗体
- 恶性疟原虫PfRNase Ⅱ的克隆表达与降解特性的初步分析被引量：3
- 2016年
- 目的利用原核表达系统诱导表达恶性疟原虫融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性。方法分析并选取恶性疟原虫3D7株PfRNaseⅡ的活性区,以cDNA为模板PCR扩增目的片段。将目的片段插入到pGEX-4T-1表达载体中,构建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒,转化至大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG诱导表达目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ。应用Glutathione-SepharoseTM 4B树脂纯化目的蛋白。并用pGEX-PfRNaseⅡ体外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性。结果经PCR、双酶切、测序鉴定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒构建正确,转化DE3后在IPTG的作用下表达目的蛋白。纯化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在体外可降解单链RNA,但不能降解双链RNA。pGEX-PfRNaseⅡ在低浓度的Mg2+条件下降解活性较强,高浓度Mg2+条件下活性受到抑制,在5mmol/L EDTA存在下活性降低。结论克隆表达的pGEX-PfRNaseⅡ重组蛋白能水解单链RNA,且该水解活性具有二价金属离子依赖性。
- 余胜超常志广土志伟黄朋韩悦赵帅杰魏晓艳周健华陆慧君姜宁陈启军
- 关键词：原核表达RNA降解
- 恶性疟原虫3D7株新型裂殖子蛋白质(PF3D7_1361800)的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2015年
- 目的用大肠埃希菌表达PF3D7_1361800蛋白,制备多克隆抗体。方法根据PF3D7_1361800蛋白的水溶性分析,设计目的基因引物,采用PCR技术扩增目的基因片段,长度为897bp。将其克隆到pMD18-T载体,测序正确后将该片段连接到pET-28a和pGEX-4T-1表达载体中,测序鉴定正确后将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL中,用0.1mmol/L IPTG诱导表达,用His GraviTrapTM和Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析柱纯化目的蛋白质。用His-tag重组蛋白免疫家兔,每2周免疫一次,分别于免疫后14、28、42、52d采血,用间接ELISA法测定抗体效价。以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western blot分析其特异性。结果经测序和酶切鉴定,成功构建了表达载体pET-PF3D7_1361800和pGEX-PF3D7_1361800。SDS-PAGE分析亲和纯化的重组蛋白纯度较好,间接ELISA法检测该蛋白免疫兔血清抗体效价>1∶16 000。结论成功克隆了PF3D7_1361800的表达载体并表达目的蛋白,制备的抗重组蛋白多克隆抗体具有特异性,为研究该蛋白质的生物学功能及疟疾疫苗的研发奠定了基础。
- 魏晓艳姜宁周健华常志广赵欣土志伟余胜超韩悦黄朋赵帅杰陆慧君陈启军
- 关键词：裂殖子原核表达多克隆抗体
- 恶性疟原虫海南株var2csa基因DBL区蛋白的原核表达及功能分析被引量：1
- 2011年
- 目的克隆、表达恶性疟原虫海南株变异抗原基因(var)家族之一var2csa基因的血型抗原结合基团(duffy anti-gen-binding ligand,DBL)4、DBL5、DBL6区,比较其与硫酸软骨素A(chondroitin sulfate A,CSA)黏附能力的差异。方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株基因组DNA中3个目的片段,将扩增产物与pMD18-T克隆载体连接,经酶切、测序鉴定正确后克隆至表达载体pET-22b上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,并用组氨酸标签融合蛋白纯化柱(His GraciTrap)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)检测目的蛋白。ELISA检测不同DBL区重组蛋白与CSA的结合情况。结果 PCR扩增获得目的片段分别为996、859和894bp,酶切及DNA测序结果均显示重组质粒构建成功,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达并纯化3个DBL区重组蛋白,DBL4区、DBL5区和DBL6区的相对分子质量分别为Mr 439800,Mr 34500,Mr 36000。West-ern blotting检测结果显示,目的蛋白具有反应原性。ELISA结果显示,不同蛋白浓度条件下DBL5区均明显比其他两个DBL区的吸光度(A405值)高(P<0.05),表明DBL5区与CSA的黏附能力较强。结论 var2csa基因3个DBL区重组蛋白表达成功,DBL5区与CSA的黏附能力较强。
- 康巍常志广陆慧君姜宁尹继刚陈启军
- 关键词：恶性疟原虫DBL硫酸软骨素A
