周麒
- 作品数：4 被引量：37H指数：3
- 供职机构：哈尔滨工业大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程轻工技术与工程化学工程更多>>
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达被引量：20
- 2004年
- 采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.4.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒赵敏
- 绿色木霉AS3．3711的葡聚糖内切酶V基因的克隆与表达被引量：5
- 2004年
- 采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3．3711的葡聚糖内切酶V(EGV)的cDNA基因。测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上，转化酿酒酵母，同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响。转化子用2％的β-D-半乳糖进行诱导，用Northem杂交和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测。结果表明，EGV的cDNA基因开放阅读框长度为741bp，编码247个氨基酸，推测的蛋白质分子量为24．99kDa。超声波处理60s的酿酒酵母的转化率最高，在相同条件下是未处理组的2倍。酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达并分泌到胞外。发酵液中的酶活在培养60小时达到最高0．046U／ml。最适酶解温度为60℃，最适pH值为5．4。
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母超声波处理纤维素酶系
- 绿色木霉AS3.3711的EGⅢ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达
- 为研究构建可直接降解纤维类资源生产燃料乙醇的酵母基因工程菌，本文以纤维素高效分解菌株绿色木霉（Trichoderma viride）AS3.3711为出发菌株。通过 RT-PCR的方法克隆出绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅲ（EGⅢ...
- 周麒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母基因工程菌
- 文献传递
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅲ基因的克隆与表达被引量：26
- 2004年
- 为研究构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌 ,采用RT PCR方法克隆到绿色木霉 (Trichodermaviride)AS3 371 1的葡聚糖内切酶Ⅲ (EGⅢ )的cDNA基因 ,测序后构建到酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)诱导型表达载体pYES2上 ,用正交实验对超声波辅助酵母转化系统进行了优化 .转化获得的EGⅢ转化子用 2 %的 β D 半乳糖诱导 ,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测 .结果表明 ,EGⅢ的cDNA基因开放阅读框长度为 1 2 5 4bp ,编码 4 1 8个氨基酸 ,推测蛋白质分子量为 4 4 1× 1 0 3 .正交实验中较优组合为第 5组 (超声波处理 6 0s,温育 4 0min ,单链DNA 1 5 0 μg ,热激 5min) ;刚果红染色显示 ,转化子可产生明显的水解圈 ;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅢ并分泌到胞外 ,发酵液中的酶活在培养 6 0h达到最高 0 0 4 1U/mL ;最适酶解温度为 5 0℃ ;最适 pH值为 5 8.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母
