刘北东
- 作品数：9 被引量：85H指数：5
- 供职机构：哈尔滨工业大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达被引量：20
- 2004年
- 采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.4.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒赵敏
- 绿色木霉纤维素酶系基因克隆表达及特性研究
- 利用纤维类固体废弃物生产酒精来作为一种替代能源已引起研究者们越来越大的兴趣,绿色木霉(Trichoderma viride)具有一个高效的纤维素酶体系,单独研究这一酶系的某个成分,可能会影响对这一体系的组成与功能机理的理...
- 刘北东
- 关键词：绿色木霉超声波处理酿酒酵母
- 文献传递
- 大豆幼胚子叶胚性悬浮细胞系的建立与次生胚诱导被引量：6
- 2002年
- 本研究选用黑龙江省 5个大豆品种的幼胚子叶 ,建立了胚性悬浮培养体系 ,并由悬浮体系增殖产生次生胚。系统探讨了培养基组成和浓度对体细胞胚诱导和悬浮培养物生长的影响 ,以及悬浮体系继代时间与胚成熟率和再生率的关系。结果表明 ,高效体细胞胚诱导培养基为 :MSB +4 0mg/L 2 ,4 -D + 6 %蔗糖。高效球型胚增殖培养基为 10mg/L2 ,4 -D + 1/2MS氮源 + 5mM谷氨酰胺 + 5mM天门冬酰胺。培养 8周后的次生胚成熟率和再生率显著提高 ,到第 12周分别达6 3%和 35 % 。
- 李海燕朱延明冯莹莹周长梅刘北东丁晓东张淑珍
- 关键词：大豆幼胚子叶
- 农杆菌介导几丁质酶基因转化大豆子叶节主要影响因素的研究
- 该研究以10个东北主栽大豆品种(系)的子叶节为受体材料,研究了大豆子叶节高效再生体系的建立,以及农杆菌介导法遗传转化的影响因素.建立了稳定的遗传转化体系,获得7株PCR检测呈阳性植株.初步证实菜豆几丁质酶基因已经整合到大...
- 刘北东
- 关键词：大豆子叶节农杆菌介导几丁质酶基因
- 文献传递
- 绿色木霉AS3．3711的葡聚糖内切酶V基因的克隆与表达被引量：5
- 2004年
- 采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3．3711的葡聚糖内切酶V(EGV)的cDNA基因。测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上，转化酿酒酵母，同时研究了超声波处理对酵母完整细胞转化的影响。转化子用2％的β-D-半乳糖进行诱导，用Northem杂交和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测。结果表明，EGV的cDNA基因开放阅读框长度为741bp，编码247个氨基酸，推测的蛋白质分子量为24．99kDa。超声波处理60s的酿酒酵母的转化率最高，在相同条件下是未处理组的2倍。酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达并分泌到胞外。发酵液中的酶活在培养60小时达到最高0．046U／ml。最适酶解温度为60℃，最适pH值为5．4。
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母超声波处理纤维素酶系
- 纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达
- 为研究构建可转化纤维类固体废弃物生产乙醇的工程菌，采用RT-PCR方法克隆到绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711的3种内切葡聚糖酶(EGⅠ、EGⅢ、EGV)、2种纤维二糖水解酶(CBHI、CB...
- 杨谦刘北东张向东
- 关键词：固体废弃物纤维素酶酿酒酵母酶解温度
- 文献传递
- 大豆子叶节再生影响因素的研究被引量：34
- 2002年
- 为了建立一个大豆子叶节高效再生体系用于大豆的遗传转化 ,选用 10个东北主栽大豆品种(Glycinemax (L .)Merr .)的子叶节作为外植体 ,研究了基因型、植物激素的浓度、超声波辅助处理时间 ...等 6种影响大豆子叶节再生的因素。结果表明合丰 35、合丰 2 5、黑农 4 0再生效率较高 ,平均每个外植体分化出的丛生芽数分别为 6 .6 9、6 .32和 5 .98;确定了丛生芽分化阶段所需的BA浓度和生根阶段所需的IBA浓度 ,发现不同基因型需要不同的BA浓度 ,合丰 35、合丰 2 5为1.5mg/l,黑农 4 0为 1.2mg/l。适宜的外植体大小为保留全部子叶。作为遗传转化时的除菌剂 ,头孢唑啉钠 (Cef)在 5 0 0mg/l时对子叶节的再生无显著影响。当遗传转化时使用的超声波辅助处理时间小于 12秒时 。
- 刘北东朱延明李海燕杨谦
- 关键词：影响因素大豆子叶节丛生芽
- 大豆再生体系的建立及遗传转化的研究进展被引量：10
- 2003年
- 刘北东朱延明杨谦杨晓辉
- 关键词：大豆
- 绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅲ基因的克隆与表达被引量：26
- 2004年
- 为研究构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌 ,采用RT PCR方法克隆到绿色木霉 (Trichodermaviride)AS3 371 1的葡聚糖内切酶Ⅲ (EGⅢ )的cDNA基因 ,测序后构建到酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)诱导型表达载体pYES2上 ,用正交实验对超声波辅助酵母转化系统进行了优化 .转化获得的EGⅢ转化子用 2 %的 β D 半乳糖诱导 ,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测 .结果表明 ,EGⅢ的cDNA基因开放阅读框长度为 1 2 5 4bp ,编码 4 1 8个氨基酸 ,推测蛋白质分子量为 4 4 1× 1 0 3 .正交实验中较优组合为第 5组 (超声波处理 6 0s,温育 4 0min ,单链DNA 1 5 0 μg ,热激 5min) ;刚果红染色显示 ,转化子可产生明显的水解圈 ;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅢ并分泌到胞外 ,发酵液中的酶活在培养 6 0h达到最高 0 0 4 1U/mL ;最适酶解温度为 5 0℃ ;最适 pH值为 5 8.
- 刘北东杨谦周麒宋金柱陈佃福刘恒
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母
